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专题三 植物的组织培养技术 课题一 菊花的组织培养

植物组织培养的基本过程

细胞分化:_______________________________________________________________________________________。 离体的植物组织或细胞,在培养了一段时间以后,会通过细胞分裂,形成愈伤组织,愈伤组织的细胞排列疏松而无规则,是一种_____________________________的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程,称为植物细胞的________________,或者叫做______________。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成根或芽等器官,这个过程叫做1。再分化形成的试管苗,移栽到地里,可以发育成完整的植物体。 植物细胞工程

具有某种生物全________________的任何一个活细胞,都具有发育成________________的能力,即每个生物细胞都具有________。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来,这是因为在________________条件下,通过基因的______________________,构成不同组织和器官。 ·细胞分化是一种持久性的变化,它有什么生理意义?

答:使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化,有利于提高各种生理功能的效率。 比较根尖分生组织和愈伤组织的异同 组织类型 根尖分生组织 细胞来源 受精卵 细胞形态 正方形 细胞结构 无液泡 细胞排列 紧密 细胞去向 分化成多种 细胞组织 再分化成新个体 愈伤组织 高度分化细胞 无定形 高度液泡化 疏松 相同点 影响植物组织培养的条件 都通过有丝分裂进行细胞增殖 材料:不同的植物组织,培养的难易程度差别很大。植物材料的选择直接关系到试验的成败。植物的______、材料的_____________________和__________________等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择____________________________________作材料。一般来说,容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好,容易诱导脱分化和再分化。

营养:离体的植物组织和细胞,对营养、环境等条件的要求相对特殊,需要配制适宜的培养基。常用的培养基是MS培养基,其中含有的____________是____________________________________,____________是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co,有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。

激素:植物激素中____________和____________是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素,其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。

生长素类有:______________、__________________、_____________________、________________________。 细胞分裂素类有:_____________________、______________________________、_______________________。 赤霉素类有:__________________。

生长素/ 细胞分裂素比值与结果 使用顺序 实验结果 先生长素, 比值高时 ____________ __________________ 后细胞分裂素 先细胞分裂素, 比值低时 ____________ __________________ 后生长素 同时使用 ____________ 比值适中 + __________________

环境条件:PH、温度、光等环境条件。

不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养,一般将pH控制在5.8左右,温度控制在18~22℃,并且每日用日光灯照射12h.

4、操作流程

配制MS固体培养基:配制各种母液:将各种成分按配方比例配制成的浓缩液(培养基母液)。 ·使用时根据母液的浓缩倍数,计算用量,并加蒸馏水稀释。 ·配制培养基:

母液:无机物中的大量元素浓缩______倍,微量元素浓缩______倍。_________________、__________________以及用量小的有机物一般单独配制成母液。

取配制好的__________、____________、____________和____________的母液,并用蒸馏水定容到1000毫升。 ·在菊花组织培养中,可以不添加植物激素-----------原因是菊花茎段组织培养比较容易。 ·灭菌:采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。

·MS培养基中各种营养物质的作用是什么?与肉汤培养基相比,MS培养基有哪些特点?

大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐;蔗糖提供碳源,维持细胞渗透压;甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。

★(微生物培养)微生物培养基以有机营养为主,如:牛肉膏蛋白胨培养基(又称肉汤培养基,培养细菌)、伊红美蓝培养基(培养大肠杆菌----菌落成黑色)

★(植物组织培养)MS培养基则需提供大量无机营养。(也有有机物如蔗糖)。

★动物细胞培养的营养物质与体内基本相同,需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素。由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚,因此,在使用合成培养基时,通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 外植体的消毒 外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段。选取菊花茎段时,要取__________________。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉,用软刷轻轻刷洗,刷洗后在流水下冲洗20min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分,放入体积分数为____________中摇动2~3次,持续6~7s,立即将外植体取出,在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分,放入质量分数为________________________中1~2min。取出后,在无菌水中至少清洗3次,漂洗消毒液。

注意:对外植体进行表面消毒时,就要考虑________________________,又要考虑_______________________。 接种:接种过程中插入外植体时________________________,每个锥形瓶接种7~8个外植体。外植体接种与细菌接种相似,操作步骤相同,而且都要求____________。

培养:应该放在无菌箱中进行,并定期进行消毒,保持适宜的温度(18~22℃)和光照(12h)

移栽:栽前应先打开培养瓶的封口膜,让其在培养间生长几日,然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的__________________等环境中生活一段时间,进行__________________。最后进行露天栽培。 栽培:

外植体在培养过程中可能会被污染,原因有外植体____________;培养基____________;接种中被杂菌污染;锥形瓶密封性差等。

专题二 月季的花药培养

被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊通常包含花丝、花药两部分。花药为囊状结构,内部含有许多花粉。花

粉是由__________________经过________________________而形成的,因此,花粉是__________________。被子植物花粉的发育要经历小孢子__________________、____________和____________等阶段。在小孢子四分体时期,4个单倍体细胞连在一起,进入单核期时,四分体的4个单倍体细胞彼此分离,形成4个具有单细胞核的花粉粒。这时的细胞含__________________,核位于细胞的中央(____________)。随着细胞不断长大,细胞核由中央移向细胞一侧(__________________),并分裂成1个____________和1个____________,进而形成两个细胞,一个是____________,一个是____________。生殖细胞将在分裂一次,形成__________________。 注意:①同一生殖细胞形成的两个精子,其基因组成完全相同。

1.各字母代表的具体时期是:A__________ B___________C___________D__________E________ (1)图中所示的植物的基因型为AaBb(两对基因遵循自由组合定律遗传),则①的基因型为 ,②、③、④、⑤的基因型可能为 、 、 、 。 (2)⑦、⑧所指的结构依次是 、 ;两者的基因型是否相同? 。 (3)某同学用上述花药进行离体培养,对获得的植株进行鉴定,发现有一些为二倍体。推测这些二倍体植株的基因型有 种。 (4)在进行月季花药组织培养时,选择 期的花药接种,培养成功率最高。确定花粉发育时期最常用的方法有 法。对于某些不易着色的花粉细胞核,需要使用 法将花粉细胞核染成蓝黑色。

产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株(即单倍体植株)一般有两种途径,一种是花粉通

过 ___ 阶段发育为植物,另一种是花粉在诱导培养基上先形成 ___ ,再将其诱导分化成植株。这两种途径之间并没有绝对的界限,主要取决于培养基中 ___ 及其 ___ 。 注意:①无论哪种产生方式,都要先诱导 ___ ,再诱导 ___

②胚状体:植物体细胞组织培养过程中,诱导产生的形态与受精卵发育成的胚非常类似的结构,其发育也与受精卵发育成的胚类似,有 、 、 等完整结构,就像一粒种子,又称为细胞胚。

影响花药培养的因素诱导花粉能否成功及诱导成功率的高低,受多种因素影响,其

中 与 是主要的影响因素

·亲本的生理状况:花粉早期是的花药比后期的更容易产生花粉植株,选择 。

·合适的花粉发育时期:一般来说,在 ,细胞核由中央移向细胞一侧的时期,花药培养成功率最高

·花蕾:选择 的花蕾

·亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率都有一定影响

·材料的选取:选择花药时,一般要通过 来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。确定花粉发育时期的最常用的方法是 。但是,某些植物的花粉细胞核不易着色,需采用 ,这种方法能将 染成 。 ·材料的消毒

花蕾用 浸泡大约30秒,无菌水冲洗,然后放入质量分数为 溶液中2-4min. ·接种和培养:灭菌后的花蕾,要在无菌条件下除去 和 ,并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时,要 (否则接种后容易从受伤部位长生愈伤组织),同时还要 ,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成,通常每瓶接种花药7~10个,培养温度控制在25℃左右,不需要 .幼小植株形成后才需要 .一般经过20~30天培养后,会发现花药开裂,长出愈伤组织或形成胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上,以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体,则一个花药内就会产生大量幼小植株,必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开,分别移植到新的培养基上,

否则这些植株将很难分开。还需要对培养出来的植株做进一步的鉴定和筛选。

植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处是:培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。两者的不同之处在于:花药培养的选材非常重要,需事先摸索时期适宜的花蕾;花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基;花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加。 试题:

2、下图所示胡萝卜的韧皮部细胞通过无菌操作,接入试管后,在一定的条件下,形成试管苗的培育过程,请据图回答下列问题:

(1)要促进细胞分裂生长,培养基中应有营养物质和激素。营养物质包括_______和小分子有机物,激素包括细胞分裂素和________两类植物激素。

(2)此过程依据的原理是________。A和B阶段主要进行的分裂方式是_______,B阶段除了细胞分裂外,还进行细胞_________等。

(3)此过程要无菌操作,主要是指对______进行灭菌消毒,B阶段需要光照,原因是_____________。 (4)试管苗的根细胞没有叶绿素,而叶的叶肉细胞具有叶绿素,这是基因______的结果。

3、科学家将分离得到的成熟的胡萝卜韧皮部细胞进行如下处理,最终由单个细胞发育成了完整的新植株。请回答下列问题:

(1)科学家所用的这种生物技术叫做______________________。该技术表明,当植物细胞处于离体状态时,在一定的营养物质、___________和其他外界条件的作用下,可能表现出___________,发育成完整植株。

(2)图中B过程称为___________。通过B过程产生的愈伤组织细胞与根韧皮部细胞形态结构___________(相同/不同),其根本原因是______________________。

(3)某课外小组同学用愈伤组织同时进行了两组实验:甲组培养基中含3%的蔗糖,乙组培养基中不含蔗糖,经灭菌后接种,每组实验再分成两个小组,分别在光下和暗处培养。1个月后,观察植物体生长、分化情况,结果如下表:

培养条件 光下 暗处 甲组 正常生长,分化 正常生长,不分化 乙组 不生长,死亡 不生长,死亡 由此得出的结论是:①______________________;②______________________。

4、(2008年海南高考)某二倍体植物是杂合体,下图为其花药中未成熟花粉在适宜的培养基上培养产生完整植株的过程。请据图回答: