发布时间 : 星期一 文章人教版高中生物选修一专题5课题3血红蛋白的提取和分离教学案含解析更新完毕开始阅读0f853410d05abe23482fb4daa58da0116c171f9f
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项目 能否进入凝胶内部 运动路径 运动方式 运动路程 运动速度 洗脱次序 3.电泳 (1)原理：
大 不能进入 凝胶颗粒之间 垂直向下 较短 较快 先流出 能进入 凝胶颗粒内部 垂直向下和无规则扩散运动 较长 较慢 后流出 .
(2)常用方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。测定蛋白质分子量时通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。在凝胶中加入SDS，可使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链，然后与各种蛋白质形成蛋白质-SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过了蛋白质分子原有电荷量，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
[题组冲关]
1．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程(见下图)可表示为(..)
解析：选B.用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量较大的蛋白质迅速通过凝胶间隙，先被洗脱出来；相对分子质量较小的蛋白质进入凝胶内部而被滞留，后被洗脱出来。
2．关于电泳的说法，错误的是(..)
A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
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B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动
C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率只取决于它所带净电荷的多少 D．用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小 解析：选C.蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。SDS能与各种蛋白质形成蛋白质-SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
核心要点
1．样品处理 (1)红细胞的洗涤
①目的：去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。 ②过程：
二
| 血红蛋白提取和分离的实验操作
(2)血红蛋白的释放
①目的：使红细胞破裂释放血红蛋白。 ②过程：
a．将洗涤好的红细胞倒入烧杯中。
b．加蒸馏水到原血液的体积，其作用是使红细胞吸水涨破。 c．加入40%体积的甲苯，其作用是溶解细胞膜。
d．置于磁力搅拌器上充分搅拌10.min，其作用是加速红细胞破裂。 e．红细胞破裂，释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液
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2．粗分离——透析
(1)目的：除去样品中相对分子质量较小的杂质。
(2)过程：取1.mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300.mL物质的量浓度为20.mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的烧杯中，透析12.h。
3．纯化——凝胶色谱操作 (1)凝胶色谱柱的制作
①取长40.cm，内径为1.6.cm的玻璃管，两端用砂纸磨平。
②柱底制作：打孔→挖凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
③柱顶制作：打孔→安装玻璃管。
④组装：将上述三者按相应位置组装，并在下端出口连接带开关的尼龙管，尼龙管放入收集器。
(2)凝胶色谱柱的装填
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(3)样品的加入和洗脱
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4．纯度鉴定
在鉴定的方法中，使用最多的是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 5．结果分析与评价 项目 分析 分层明显→样品处理完成 血液样品的处理 凝胶色谱柱的装填 放一支与凝胶柱垂直的日光灯→直接检查(加入大分子有色物质，如蓝色葡聚糖－2.000或红色葡聚糖)→色带均匀、狭窄、平整→装填成功 血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随洗脱液缓慢流出→分离成功 [题组冲关] 3．下列有关“血红蛋白的提取和分离”实验的叙述，正确的是(..) A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白 B．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质 C．血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂 D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构
解析：选D.用生理盐水进行红细胞的洗涤，其目的是去除杂蛋白；将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质；血红蛋白释放时加入
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血红蛋白的分离