发布时间 : 星期一 文章微生物标准操作规程六更新完毕开始阅读172ff007a6c30c2259019e3f
XXX人民医院检验科微生物室 标准操作文件 编写者：XXX XXX 审核者：XXX 文件编号：WSW-SOP-007 版本号：2007 第1次修改 修订日期：2012年1月15日 页码：第 1 页 共 2 页 尿液标本细菌学检验标准操作规程
l.目的
规范尿液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围 尿液。 3．标本
3.1 标本类型 尿液。 3.2 标本采集
3.2.1 中段尿标本采集法
女性：先以肥皂水清洗外阴部，再以无菌水冲洗，用无菌纱布擦拭，以手指将阴唇分开排尿，弃去前段尿，留取中段尿5～7 ml于无菌试管内。 男性：翻转包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水冲洗，留取中段尿。
儿童、婴儿：先以无菌生理盐水棉球洗净其外阴部或外生殖器，将无菌试管或瓶口对准尿道口，以胶布固定于皮肤上，待尿排出后送检。
3.2.2 两侧肾盂尿 由专科医师采集，左右侧标本必须标明，避免混淆而误诊。
3.2.3 膀胱穿刺 此法用于厌氧菌培养。耻骨上皮肤经碘酊消毒后，再以75％酒精擦拭，用无菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器内的空气，针头插于无菌橡皮塞上送检。
3.2.4 尿标本采集应及时送检，2小时内进行接种。 ’ 3.3 标本拒收标准
3.3.1 申请单项目与标本不符。 3.3.2 尿标本不是用无菌容器留取。
3.3.3 送标本的时间在采集标本后超过2小时。 3.4 标本保存
采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于冰箱。 4．试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。 4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡((GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱，c02培养箱等。 5．细菌鉴定和药敏质控
参见《质量管理程序》。 6．检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6．1 涂片检查
6．1 1 一般细菌涂片 以无菌操作吸取尿液5～10 ml，3 000 r／min离心沉淀15分钟，取沉淀物作涂片及革兰染色，镜检，可提示有无细菌及细菌种类。
6 1．2 真菌涂片 取尿液沉淀物放于清洁玻片上，覆以盖玻片，略加压力，制成涂片，用高倍镜检查。如发现发亮的芽生孢子和假菌丝，就可报告“找到酵母样细胞，形似念珠菌”。
6．1 3 结核分枝杆菌参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。 6．2 一般细菌培养取中段尿，用定量接种环取尿液10 ul接种于血琼脂平板和麦康凯(或EMB)营养琼脂平板上，5％～10％C02，35℃培养18～24小时，观察有无菌落生长，并进行菌落计数。平板生长菌落数乘以100即每毫升尿液的菌落数。根据菌落特征和涂片、染色结果，选择相应的方法作进一步鉴定。
6．3 特殊菌培养 6．3．1 淋病奈瑟菌培养 选用淋球菌琼脂平板等，放人5％～10％CO2环境中培养。
6．3 2 厌氧菌培养 必须用膀胱穿刺尿进行培养，接种厌氧琼脂平板，并在厌氧环境培养。
6．3 3 结核分枝杆菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。 7．操作流程
尿液 一般细菌涂片 定量培养 淋球菌培养 结核菌培养 菌落计数 血琼脂和麦康凯 GC琼脂平板5% 罗氏培养基 平板35 ℃培 -10%CO2, 35℃ 35℃培养 养18-24h 培养8-24h 4-8周 观察菌落特征及涂片、染色 观察有无可 疑菌落生长 、 手工或仪器细菌鉴定及药敏 发出报告 发出报告 8．结果报告
8．1 尿液细菌培养检查必须报告细菌的种属、菌落计数及药敏结果。 8.2 阳性结果报告
8.2.1 无明确意义的阳性结果报告——纯培养：革兰×性×菌生长，菌落数××CFU／ml；混合菌生长：革兰×性×菌生长，菌落数××CFU／ml，注明是混合菌。
8.2.2 有意义的阳性结果报告：报告细菌种名、药敏结果及菌落数。
8.3 阴性结果报告：培养48小时无菌落生长，即为阴性。
8.4 若尿液培养同时有≥3种细菌生长时，可视为污染标本，建议重留送检。
9．注意事项
9.1 尿液标本不可置肉汤中进行增菌培养。 9.2 中段尿标本不可做厌氧菌培养。
9.3 收集尿液过程中，请勿将手伸人容器中，且避免尿液溢出容器，以免污染(以无菌导管技术收集尿液的方法已被淘汰)。 10．临床意义
尿液的细菌学检查(中段尿培养加计数)对于泌尿道感染的诊断有重要价值。正常尿液是无菌的，而外尿道有正常菌群寄生，标本的采集必须无菌操作。另外，细菌培养必须结合菌落计数辨别是否为病原菌。有致病菌或条件致病菌生长，菌落计数>105CFU／ml，提示感染(膀胱炎、肾盂肾炎、肾或膀胱结核等)。常见病原菌主要有大肠埃希菌、葡萄球菌、肠球菌等。 11．危急值报告
如查出抗酸杆菌阳性，则应及时向临床报告并作传染病报告。