发布时间 : 星期六 文章细胞生物学实验指导更新完毕开始阅读1991cc72a417866fb84a8ec1
溶液 1mol/L乙二醇 1mol/L丙三醇 1mol/L葡萄糖 相对分子质量 62 92 180
溶血时间 2. 脂溶性大小对细胞膜透性的影响
（1） 编号的3支试管分别加入2ml 3mol/L的甲醇、乙醇、丙醇。 （2） 分别先后加入两滴血液，按住管口倒置一次。 （3） 观察溶血时间。
（4） 间实验结果记入下所示的表格中。 溶液 3mol/L甲醇 3mol/L乙醇 3mol/L丙醇 相对分子质量 32.04 46.07 58.0 分配系数 0.0097 0.0357 0.156 溶血时间
3. 电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响
（1） 将试管编号，注明溶质名称及物质的量浓度。
（2） 按编号分别加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液2ml。 （3） 每管各加入两滴血液，按住管口，倒置一次。
（4） 室温放置15min，观察发生溶血的浓度，确定等渗浓度。 （5） 按下表记录实验结果。 （6） 计算等渗摩尔浓度。 溶质 葡萄糖 NaCl
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物质的量浓度/（mol/L） 1/8 1/9 1/10 1/12 1/13 1/14 1/16 1/18 实验十三 细胞电泳
一、实验目的：
了解细胞电泳的原理及意义，学习细胞(包括细胞器)电泳速度及其ζ电位的测
定方法。
二、实验原理：
所谓细胞电泳，就是将细胞制成悬浮溶液．使其单个游离的细胞分散于等渗
的介质中。在外电场的作用下，细胞在特殊的装置内发生运动．这种现象称作细胞电泳。
细胞表面具有一定的电荷(通常为负电荷)，它能象无机离子一样均匀地分布在
介质中。细胞表面吸附了一层极薄的水膜，它与介质间存在着电位差，此电位差称为ζ电位。每种细胞在恒定的条件下(如温度、电压、电流，介质浓度，溶液的PH值等)其电泳速度和ζ电位十分稳定，但在各种有害因子，病理状态的影响下，可降低其表面电荷，所以电泳速度和ζ电位值也发生改变(降低)。因此，利用细胞电泳对研究生命结构的表面性质，鉴定细胞或单细胞有机体的机能和病理状态，具有重要的意义，是一种十分有用的方法。
有些细胞器(如叶绿体)也具有上述的类似的细胞特性，可进行与细胞电泳类似
的细胞器电泳。
三、实验用品：
(一)材料：鼠全血细胞。菠菜叶绿体
(二)用具：细胞电泳仪，光学显微镜，电子表，台微尺，目微尺，细胞电泳架， 电泳毛细管，吸血量管，洗耳球，盐桥等。 (三)试剂
l、生理盐水甘油溶液：O．9％NaCl，0.32M甘油溶液，每毫升加入4—5V (国际
单位)的肝素。混匀备用。
2、8％蔗糖甘油溶液：8％的蔗糖，O．32M甘油溶液，每毫升加入4—5V(国际单
位)的肝素，混匀后备用。
四、实验方法：
(一) 细胞电泳前的准备工作
l、目微尺校正：与实验二“台微尺与目微尺的校对”相同的操作。
2、毛细管l／10d层的测定：电泳毛细管的长度为6cm。内腔是正方形或长方形，
圆形等。在其中相对应的一对内壁中线处，各刻有一条与长轴平行的滚线，而两线之间的距离为电泳室的厚度d。 d的测量同实验二中“厚度的测量’’部分．然后将测得的d值除以lO，便求得了d／10层的刻度数，将微调回零后，再转动到上述刻度值，便是d／lO层的位置。
3、细胞(或细胞器)悬液调制，用血球计数板对悬液计数，然后调制细胞(或细 胞器)浓度，全血细胞约2000个／mm3，叶绿体为5000一10000个／nm3。 4、显微镜固定及毛细管和银电极的清洁：
(1)选可翻转的显微镜以免细胞在电泳时迅速下沉，脱离观察面。
(2)用肥皂水(最好用十二烷基磺酸钠)冲洗毛细管电泳室，然后用清水冲洗数
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次。
(3)用普通纱布将电泳架两端的银电极擦干净，以免正反两方向的电泳速度显著不 一样。
(二)细胞(或细胞器)电泳速度及ζ电位的测定：
1、根据所使用的输入电源，将仪器背面的电源选择钮“交流一直流”，调至所要
求的位置。
2、接通电源，打开电源开关，指示灯亮。
3、插入直流输出引线，并注意电极夹的正负极短路，以免损坏仪器。
4、将调整开关至“工作”档，换向开关至“正”档，然后调节“电压调节’’及 “电流调节”二旋钮，动物细胞电泳时，电压调至40伏，电流调至lmA；叶绿
体电泳时，电压调至55伏，电流以调至lmA。调好后再将开关推到“停止”档。
5、将制备的样品注灌毛细管电泳室，其灌注方法是：
(1) 将毛细管斜插入被测样品中，由于毛吸管吸引作用，则整个管腔内充满了被
测样液。
(2) 也可用橡皮胶头的吸吮作用将样品灌满电泳室。将注灌样品的毛细管水平移
至电泳架上，并夹紧，然后利用盐桥将细管与银极接通。
6、将电泳架移至显微镜载物台上，调整焦距，使焦面落在管腔的d／lO—d／15
处。为了对照可测d／2处的电泳速度。 7、通过直流输出引线夹，分别与两极接通。 8、测量
(1) 将开关调至“工作”档，再调节电压使其达到原来(即操作4中所调)的水平，
由于电场作用，在视野内可观察到管腔内细胞的移动。记录某个细胞通过目微尺2格的时间。
(2) 将开关调至“停止”档，细胞即停止移动。
(3) 将换向开关调至“负”处，调整高速开关调至“工作”档，由于电流方向变 更，则细胞向相反方向移动，此时再选择一细胞按上述方法，记录下电泳时间。 (4) 如此反复测量多次，分别记录实验数据。
(5) 实验结束后，将电压及电流二钮调回到“0”处，调整开关至“停止”处，并
断开电源；将毛细管洗干净，同时将电极擦净，放回原处，显微镜恢复到直立状态。
9、电泳速度计算：根据所测目微尺的实际刻度值，计算出每次的电泳距离S，将 所测电泳距离的总和除以所测时间的总和，得出电泳的平均速度，以下式表示：
s1+ s2+ ……+ sn W= =∑s/∑t t1+ t2+ ……+ tn
一般s以cm计算，t以秒计算
10、ζ电位的计算：根据所测电泳速度，可用下式求得ζ电位：
w×r ζ=140× v w：cm/秒； r：cm； v：伏特； ζ：伏特
五、作业:
1、根据实验数据，求出鼠的全血细胞和叶绿体的电泳速度和ζ电位。
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2、全血细胞在蔗糖和生理盐水的肝素甘油液的两种介质中时，其电泳速度有无
差别。
附：材料悬液的制备及盐桥制备法。 一、悬液制备：
1、鼠的全血细胞悬液制备 、
用微量吸取全血10mm3，吹于装有lml生理盐水肝等甘油液，或8％蔗糖肝
等甘油液小管中，吹气使之混匀。 ’ 2、菠菜叶绿体悬液制备
参考实验六“叶绿体分离”部分 二、盐桥制备:
称取9gNaCl加蒸馏水100ml，溶解后，加0．9g琼脂加热溶化，不断用玻棒搅
动，直至全部溶化，此时将已洗净凉干的塑料管插入溶液内，使管腔内部全部溶液充满。不得留有气泡，冷却后取盐桥存于9％的Nacl液中备用。
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