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现代分子生物学实验指导
禹艳红 李慧编
暨南大学生命科学与技术学院
二○一六年六月
目录
实验室规则和注意事项 ................................................................ 1 分子生物学实验注意事项 ............................................................ 2 微量加样器的使用及注意事项 ..................................................... 3 实验一大肠杆菌的对照培养、单菌落的分离及菌种保存 ........... 8 实验二克隆挑取及质粒提取 ....................................................... 11 实验三 动物基因组DNA提取 ................................................. 19 实验四 核酸的定量、纯度测定及电泳分析 ............................ 24 实验五 DNA片段酶切 ............................................................. 29 实验五 凝胶中DNA的回收 ...................................................... 35 实验七 SDS-PAGE及Western blotting .................................... 40
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实验室规则和注意事项
1. 严格遵守实验室的各项规章制度、遵守纪律、不得无故旷课、迟到或早退,自
觉维护实验室秩序、不得大声喧哗。
2. 尊敬教师、服从指导,提倡独立思考、科学操作、细致观察、如实记录、自觉
培养严谨、求实的科学作风和生动活泼、勇于探索的创新精神。着装整洁,进入实验室应穿白大衣,不允许穿背心、拖鞋进入实验室,否则教师有权停止其实验。
3. 实验课前认真阅读实验课手册,熟悉实验有关的内容,认真听取实验的注意事
项,按照器械清单对照检查有无缺失,各组仪器、器械不得混用。
4. 在操作时必须注意安全,使用易燃、易爆、有毒、带菌等材料进行实验时,应
严格按规定要求进行操作,以防失火和避免污染。
5. 严格遵守操作规程,爱护仪器设备、实验器械用品及室内设施。实验过程中,
不能将实验室各种设备及其他实验用品带到室外,因不听指挥、不遵守操作规程、违章使用仪器设备或器械,造成人身或仪器损坏的将按学校的有关规定解决处理。
6. 实验结束时应将实验用品、器械清洗干净,分类整理,放回原处,请带教老师
检查认可后方能离开。
7. 实验结束后应认真总结,进行分析和讨论,及时填写实验报告,按时交给老师。 8. 严禁烟火、注意安全,自觉维护实验室公共卫生,保持实验室清洁整齐,不吃
零食,不乱丢废弃物。
9. 节约用水、电、药品及实验材料,杜绝浪费。
10. 建立实验室值日制度,值日生离开实验室前需协同带教老师关好水、电、门、
窗。
11. 认真保管好自己所带的财务如(数码相机、U盘等),如因自己保管不当造成
损坏或丢失,实验室管理人员概不负责赔偿。
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分子生物学实验注意事项
l. 实验前应做好试剂的配置、用品灭菌等准备工作。配置各种试剂,必须要使用
重蒸水。
2. 使用后的器皿必须认真清洗干净,洗完后还要用重蒸水冲洗三次。
3. 凡是可以进行灭菌的试剂与用具都必须要经过高压蒸汽灭菌后进行使用,防止
其他杂质或酶对 DNA、RNA 或蛋白质的降解。
4. 凡操作所用的一切塑料器具(Eppendorf 管、吸嘴等),在使用前都应装入盒子和
瓶子中灭菌,且装盒或装瓶过程中都应采用镊子,或戴上一次性手套进行操作,不能直接用手去拿,严防手上杂酶污染。
5. 对于 Eeppendorf 管、吸嘴与非玻璃离心管等只能湿热灭菌,然后放置在 50°C
箱中烘干后使用。
6. 实验中加入任何试剂后应注意样品的混匀,保温等反应后的样品也应离心一下
后再进行下步的实验。
7. 限制性内切酶等工具酶保存于 50%的甘油中,-20°C 可以长期保存。应自始至
终将酶保持在零度以下,取酶时不能用手指接触储存酶的部分。在需要加酶的时候将酶从冰箱中取出,放在冰盒里,用完后立即放回冰箱。
8. 微量移液器的使用:微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器。
其装有直接读数容量计,读数由三位拨号数字组成,在移液器容量范围内能连续调节,从上(最大数)到下(最小数)读取。移液器的型号即是其最大容量值。按钮向下压以及放的动作、速度要缓慢平稳。 9. 电子天平使用:
1) 注意在天平的最大称量范围内使用。
2) 天平应放在无振动、无空气对流处,使用前须先调节水平泡至中央位置。 3) 使用后应保持仪器的洁净。
10. 微波炉内不可使用金属容器以及空载。
11. 配制药品取试剂时,所用的钥匙不能混用,否则会造成药品污染。
12. 实验过程中应做好每个样品的标记工作,如样品的名称、保存的时间.且一
般在Eeppendorf 管上用记号笔作标记时,应在两处重复做好标记。
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