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分子诊断学习题 Lucas Gu
部分，另外还包括单一序列。5＇端的LTR包含许多特定的基因表达调控区域，是一组真核生物增强子和启动子单位，而3＇端的LTR具有转录终止的作用。另外，逆转录病毒基因组利用LTR中的重复序列形成环状结构，在整合酶作用下整合入宿主细胞基因组内。
蛋白质组学
选择题
1． 目前研究蛋白质间相互作用最常采用的方法是_______。 A 质谱分析 B 二维凝胶电泳 C 酵母双杂交技术 D DNase I 足纹分析
2． 目前进行蛋白质分离最有效的方法是_______。
A 质谱分析 B 二维凝胶电泳 C 酵母双杂交技术 D DNase I 足纹分析
3．二维凝胶电泳是根据蛋白质的_______来进行分离的。 A 分子量和分子构像 B 分子量和电荷 C 电荷和分子构像 D 分子量
4．质谱分析技术主要是用来检测蛋白质的_______。
A 分子量 B 分子组成 C 分子构像 D 分子大小 5．下列技术中，不能用来检测溶液中蛋白质分子的结构是_______。A 核磁共振 B 圆二色谱法 C 氢同位素交换法 D 小角中子衍射法
6．DNase Ⅰ 足纹分析技术中，DNase Ⅰ 水解的是DNA分子中的_______。
A 氢键 B 磷酸二酯键 C 疏水键 D 肽键 7．蛋白质之间相互作用的形式主要包括_______。
A 分子和亚基的聚合 B 分子识别 C 分子自我装配 D 多酶复合体 E 分子杂交
名词解释 1． 蛋白质组 2． 蛋白质组学 3． 二维凝胶电泳 4． 质谱技术 5． 凝胶滞后实验 问答题
1．蛋白质组学的研究特点有哪些？ 2．蛋白质组学的研究内容有哪些？
3．目前在蛋白质组学的研究中主要采用了哪些技术？ 4．等电聚焦凝胶电泳的原理是什么？ 5．简述酵母双杂交系统的优缺点。 答案：
选择题：
C、B、B、A、D、B、ABCDE
名词解释： 1.
蛋白质组是指特定细胞、组织乃至机体作为一个生命单元中所拥有蛋白质的集合，即生命体中携带的基因信息在某一时段所表达的全部蛋白质。 2.
蛋白质组学是指对在特定的时间和环境下所表达的群体蛋白质研究的一门学问。主要在蛋白质水平上探索蛋白质的表达模式、作用模式、功能机制、调节控制以及蛋白质群体内的相互作用。是在生物体或其细胞的整体蛋白质水平上进行的，并从一个机体或一个细胞的蛋白质整体活动来揭示生命的规律。
3.
二维凝胶电泳是目前蛋白质组研究中最有效的分离技术。它由两向电泳组成，第一向以蛋白质电荷差异为基础进行分离的等电聚焦凝胶电泳，第二向是以蛋白质分子量差异为基础的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4. 质谱技术是样品分子离子化后，根据不同离子间的质量、电荷比值(质荷比，m/z)差异来确定分子量的技术。 5. 凝胶滞后实验是近年来发展起来的用聚丙烯酰胺凝胶电泳直接分析核酸与蛋白质结合的简单、快速、敏感方法。通过蛋白质与末端标记的核酸探针特异性结合，电泳时这种复合物较无蛋白结合的探针在凝胶中的泳动速度要慢，即表现为相对滞后。
问答题：
1．① 整体性 ② 揭示生命的动态性过程 ③ 体现生命现象的复杂性
2．蛋白质组学的研究包括两个方面：一是针对蛋白质表达模式的研究，一是在蛋白质功能模式方面的深入分析。 3．① 蛋白质的分离技术：二维凝胶电泳
② 蛋白质的鉴定技术主要包括：质谱技术、Edman降解分析技术、蛋白质分子结构分析技术
③ 蛋白质与核酸间相互作用的研究技术：凝胶滞后实验、DNase Ⅰ 足纹分析、核酸一蛋白质杂交实验
④蛋白质与蛋白质间相互作用的研究技术：酵母双杂交技术 4．依据蛋白质分子的净电荷或等电点进行分离的技术。在等电聚焦过程中，电场所采用的载体两性电解质含有脂肪族多氨基多羧酸，可在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续pH梯度，蛋白质分子在一个载体两性电解质(ampholyte)形成的连续而稳定的线性pH梯度中电泳，当蛋白质迁移到其等电点位置时，净电荷为零，在电场中不再移动，因此可将各种不同等电点性质的蛋白质分离开来
5．酵母双杂交系统所具有的优点：①蛋白质作为被研究的对象不用被纯化；②检测在活细胞内进行，可以在一定程度上反映体内（细胞内）的真实情况；③由于这一系统可以反映基因表达产物的累积效应，因而可检测存在于蛋白质之间微弱或短暂的相互作用；④采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库，可用于分析多种不同功能的蛋白。
局限性：①双杂交系统分析蛋白间的相互作用定位于细胞核内， 分子诊断学习题 Lucas Gu
而许多蛋白间的相互作用依赖于翻译后加工如糖基化、二硫键形成等，这些反应在核内无法进行。②由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用，从而引起报告基因的表达，产生“假阳性”结果。③双杂交只是反映蛋白质间能发生作用的可能性，这种可能还必须经过其他实验验证，尤其要与生理功能研究相结合，否则可能会误入歧途。
核酸的分离与纯化
一、选择题
1. 真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在 A 环状单链分子 B 线性单链分子 C 环状双链分子 D 线性双链分子 E 线性或环状双链分子 [本题答案] C
2. DNA在细胞核内通常与下列哪种物质结合 A 蛋白质 B 糖类 C 脂类 D 无机盐 E 水 [本题答案] A
3. RNA主要存在于 A 细胞质 B 线粒体 C 细胞核 D 溶酶体 E 内质网 [本题答案] A
4. 人的二倍体细胞DNA大约由多少碱基对（bp）组成 A.1.0×109bp B.2.0×109bp C.3.0×109bp D.4.0×109bp E.5.0×109bp [本题答案] C
5.紫外分光光度法测定核酸溶液选用的光波波长为 A 200nm B 230nm C 260nm D 280nm E 320nm [本题答案] C
6. 在纯化核酸时往往含有少量共沉淀的盐，常用下列哪种浓度的乙醇洗涤去除 A 100% B 95% C 70~75% D 50~60% E 30~40% [本题答案] C
7. 在核酸的分离与纯化过程中，不需去除的污染物是 A 蛋白质 B 脂类
C 对后续实验有影响的溶液和试剂 D 不需要的核酸分子 E 水 [本题答案] E
8. 紫外分光光度法对DNA进行测定中，下列哪项是正确的 A DNA的最大吸收波长为280nm
B A260为1的光密度大约相当于50μg/ml双链DNA C A260为1的光密度大约相当于40μg/ml双链DNA D A260为1的光密度大约相当于33μg/ml双链DNA E A260 / A280大于2.0 [本题答案] B
9.在核酸的提取过程中，将整个操作过程的pH尽可能控制在 A 2～3 B 4～10 C 10～11 D 11～12 E 12～14 [本题答案] B
10.紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定，下列说法是正确的 A 纯DNA的A270/A280比值为2.0 B 纯DNA的A260/A280比值为1.8 C 纯DNA的A260/A280比值为2.0 D 纯DNA的A270/A280比值为1.8 E 纯DNA的A230/A270比值为1.8 [本题答案] B
11.通过凝胶电泳法可对RNA分子完整性进行鉴定，提示无RNA的降解时应
A 28S RNA的荧光强度约为18S的2倍 B 18S RNA的荧光强度约为28S的2倍 C 5S RNA的荧光强度约为18S的2倍 D 5S RNA的荧光强度约为28S的2倍 E 28S RNA的荧光强度约为5S的2倍
分子诊断学习题 Lucas Gu
[本题答案] A
12.总RNA经琼脂糖凝胶电泳EB染色后观察不到的是 A mRNA B 28SrRNA C 18SrRNA D 5SrRNA E 5.8SrRNA [本题答案] A
13. 以下哪项有利于DNA的保存 A 溶于TE中DNA在室温可储存数年 B 加入少量DNase C 溶于pH 3.0溶液
D 加入少量DNase和RNase
E 在DNA样品中加入少量氯仿，可有效避免细菌污染 [本题答案] E
14. 酚抽提法可用于高分子量DNA的分离纯化，所用试剂分别有不同的功能，下列正确的是
A SDS为 阳离子去污剂，主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质
B EDTA为二价金属离子螯合剂，可促进DNase的活性 C 蛋白酶K只可消化K类蛋白质 D 酚可使蛋白质变性沉淀
E 无RNase的DNase可有效地水解RNA [本题答案] C
15. 下列哪种不是对核酸分子完整性进行鉴定的方法 A 凝胶电泳法 B Northern杂交 C ELISA
D Western blotting E 生物芯片技术 [本题答案] D
16. 下列哪种方法不是分离纯化高分子量DNA的 A 酚抽提法 B 煮沸裂解法 C 甲酰胺解聚法 D 玻棒缠绕法 E 异丙醇沉淀法 [本题答案] B
17. 下列哪种不是从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法 A DEAE纤维素膜插片电泳法 B 电泳洗脱法 C 冷冻挤压法
D 低熔点琼脂糖挖块回收法 E 漂洗法 [本题答案] E
18.适合从琼脂糖凝胶中回收5kb的DNA片段的方法是 A DEAE纤维素膜插片电泳法 B 非透析袋电泳洗脱法 C透析袋电泳洗脱法 D 压碎与浸泡法 E 冷冻挤压法 [本题答案] C
19.适合从琼脂糖凝胶中回收500bp~5kb的DNA片段的方法是A DEAE纤维素膜插片电泳法 B 非透析袋电泳洗脱法 C透析袋电泳洗脱法 D 压碎与浸泡法 E 冷冻挤压法 [本题答案] A
20.适合从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段的标准方法是 A DEAE纤维素膜插片电泳法 B 非透析袋电泳洗脱法 C透析袋电泳洗脱法 D 压碎与浸泡法 E 冷冻挤压法 [本题答案] D
21. 大多数质粒的结构特点一般为 A 单链线性DNA B 双链线性DNA C 闭合环状单链DNA D 闭合环状双链DNA E DNA-RNA杂交体 [本题答案] D
22. 目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是 A牙签少量制备法 B 小量一步提取法 C SDS裂解法 D 碱裂解法 E 煮沸裂解法 [本题答案] D
23. 有关煮沸裂解法提取质粒DNA的正确叙述是 A 该法是一种条件比较温和的物理方法 B 煮沸能完全灭活核酸内酶A C 不适用于大多数E.coli菌株
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D 适用于HB101菌株
E 适用于<15kb的质粒DNA制备 [本题答案] E
24. CsCl2-EB法中在过量EB存在的下，超速离心后密度最大沉于管底的是 A 蛋白质
B 带切口的环状或线性DNA C RNA D 复合糖类 E 闭环质粒DNA [本题答案] C
25. 用柱层析法纯化质粒DNA时DNA的何种残基与硅基质结合 A 嘌呤 B 磷酸盐残基 C 嘧啶 D 糖基 E 氢离子 [本题答案] B
26. 在RNA纯化时，常使用的水饱和酚的pH值为 A 3.5-4.0 B 4.5-5.5 C 6.0-7.5 D 7.0-8.5 E 9.0-10.0 [本题答案] B
27. 分离与纯化mRNA可采用下列哪种方法 A oligo(dT)-纤维素柱层析法 B oligo(dA)-纤维素液相结合离心法 C oligo(U)-滤纸法
D oligo(dC)-纤维素柱层析法 E oligo(dG)-纤维素液相结合离心法 [本题答案] A
名词解释
1.RNA酶蛋白抑制剂
[本题答案] RNA酶蛋白抑制剂（RNasin）是从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合形成非共价结合的等摩尔复合物，使RNA酶失活。
2.电泳洗脱法
[本题答案] 电泳洗脱法是将待回收的DNA片段电泳出凝胶介质，使其进入一个便于回收的固定的小容积溶液中；再通过一些方法分离纯化出DNA片段。目前主要有透析袋电泳洗脱法与非透析
袋电泳洗脱法两大类。
3.A260/A280
[本题答案]指核酸溶液在260nm和280nm紫外波长下的吸光度的比值，根据比值来判断核酸样品有无蛋白质和酚等的污染。 问答题
1. 在核酸的分离和纯化过程中，如何保持核酸的完整性？ [本题答案] 为了保证核酸的完整性，首先在操作过程中，应尽量简化操作步骤，减少各种破坏核酸的有害因素，包括物理、化学与生物学的因素。提取应在0～4℃的条件下进行；另外避免强力的机械剪切力对核酸的破坏。细胞内或外来的核酸酶对核酸的生物降解，而破坏核酸的一级结构，使用EDTA、柠檬酸盐并在低温条件下操作，基本上就可以抑制DNA酶的活性；并尽可能地抑制RNA酶的活性。
2. 试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。
[答案] 质粒DNA提取的方法包括碱裂解法、煮沸裂解法和SDS裂解法。
1）碱裂解法：在NaOH存在的强碱性（pH12.0～14.0）的条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁和裂解细胞，并使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。它是一种适用范围很广的方法，能从所有的大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA，制备量可大可小。
2）煮沸裂解法：是将细菌悬浮于含Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中，Triton X-100和溶菌酶能破坏细胞壁，再用沸水浴裂解细胞，使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性。对CCC质粒DNA因结构紧密不会解链，当温度下降后，CCC质粒DNA可重新回复其超螺旋结构，通过离心去除变性的蛋白质和染色体DNA，然后回收上清液中的质粒DNA。本法只能用于小质粒DNA（小于15kb）的小量或大量制备，适用于大多数从大肠杆菌（E.coli）菌株中分离出质粒DNA。
3）SDS裂解法：它是将细菌悬浮于等渗的蔗糖溶液中，用溶菌酶和EDTA处理以破坏细胞壁，再用SDS裂解去壁细菌，从而温和地释放出质粒DNA到等渗溶液中，然后用酚/氯仿抽提。适用于大质粒DNA的提取。
3. 简述哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有哪几种？ [本题答案]哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有： 酚提取法、甲酰胺解聚法 、玻棒缠绕法和异丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。
4. 简述从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的主要方法有哪几种？ [本题答案] 从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法主要包括 DEAE-纤维素膜插片电泳法、电泳洗脱法、低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法、冷冻挤压法及现在有试剂盒供应的以硅为基础的纯化系统等。