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实验部分
对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%（V/V）盐酸中，混匀后，至棕色瓶中，避光保存；
盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中混匀后，至棕色瓶中，避光保存；
亚硝酸钠标准溶液（5mg /L）：准确称取0.5g亚硝酸钠，加水移入1000mL容量瓶，加水稀释至刻度，混匀。然后用移液管移取1mL该溶液于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀；
供试食品：从荆州的一家超市任意购买一种酸菜作为检测样品。
4.3 仪器与设备
所有玻璃仪器都要用玻璃仪器冲洗，以保证不带有亚硝酸盐。
（1） UV-1201紫外-可见分光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公司） （2） KQ 3200DE型数控超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司） （3） 组织捣碎机（金坛市晶玻实验仪器厂） （4） HH-2恒温干燥锅（常州国华电器有限公司）
（5） LAC214电子分析天平（常熟衡器工业公司）：感量为0.1mg和1mg （6） 烧杯、移液管、比色管、容量瓶、锥形瓶、漏斗
4.4 实验方法
4.4.1 样品的预处理
将50g的酸菜除去烂叶后用清水洗净，然后用超纯水再清洗一次，捞出后用滤纸吸干水分。将酸菜切成碎块，放入组织捣碎机加100mL的水打成匀浆。 4.4.2 亚硝酸盐的提取 （1）超声提取剂的确定
1.水浴提取法：称取5g匀浆样品（如制备过程中加水，应按加水量折算）置于烧杯中，加入100 mL纯水，用超声波提取设备进行提取。提取温度为60℃，提取功率为60%，超声提取10min后，冷却至室温，静置过滤，即得提取液。 2.乙醇提取法：称取5g匀浆样品（如制备过程中加水，应按加水量折算）置于烧杯中，加入100 mL体积分数为10%的乙醇溶液，用超声波提取设备进行提取。
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食品中亚硝酸盐的提取优化及含量检测
提取温度为60℃，提取功率为60%，超声提取10min后，冷却至室温，静置过滤，即得提取液。
3.氨缓冲溶液提取法：称取5g匀浆样品（如制备过程中加水，应按加水量折算）置于烧杯中，加入5mL的NH3-NH4Cl缓冲溶液，然后加入95mL超纯水，用超声波提取设备进行提取。提取温度为60℃，提取功率为60%，超声提取10min后，冷却至室温，静置过滤，即得提取液。
4.KCl提取法：称取5g匀浆样品（如制备过程中加水，应按加水量折算）置于烧杯中，加入100mL浓度为2.0mol/L的KCl溶液，用超声波提取设备进行提取。提取温度为60℃，提取功率为60%，超声提取10min后，冷却至室温，静置过滤，即得提取液。
5.国标提取法：称取5g匀浆样品（如制备过程中加水，应按加水量折算）于烧杯中，加入5mL饱和硼砂溶液，60℃纯水100 mL，用超声波提取设备进行提取。提取温度为60℃，提取功率为60%，超声提取10min后，冷却至室温，静置过滤，即得提取液。
（2）超声提取温度的确定
本实验在确定了用10%的乙醇作为提取剂的前提下，将提取温度分别设定为
30，40，50，60，70℃，提取功率设定为60%，对匀浆样液进行超声10min后，取出冷至室温，静置过滤，得5份提取液。 （3）超声提取时间的确定
本实验在确定了用10%的乙醇作为提取剂的前提下，将提取时间分别设定为2，
5，10，15，20min，提取功率设定为60%，于60℃下对匀浆样液进行超声提取，取出冷至室温，静置过滤，得5份提取液。 （4）超声提取功率的确定
本实验在确定了用10%的乙醇作为提取剂的前提下，将提取功率分别设定为40%，50%，60%，70%，80%，提取功率时间设定为10min，于60℃下对匀浆样液进行超声提取，取出冷至室温，静置过滤，得5份提取液。 4.4.3 提取液净化
向上述三种不同提取条件下所得的各5组提取液中加入2 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2 mL的乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30min，
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实验部分
除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，滤液待测。 4.4.4 亚硝酸盐的测定 （1）标准曲线的绘制
吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5 mL的5mg/L亚硝酸钠标准使用液（相当于 0.0μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、5.0μg、7.5μg、10.0μg、12.5μg 亚硝酸钠），分别置于50 mL带塞比色管中。于标准管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置5min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，摇匀，静置15min，用2cm比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度，绘制标准曲线。 （2）样液测定
吸取40mL上述待测滤液于50mL带塞比色管中，于标准管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置5min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，摇匀，静置15min，用2cm比色皿，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度并记录下来，查标准曲线得到亚硝酸盐含量，计算出实际样品中的亚硝酸盐的含量，空白试样用蒸馏水代替样品以相同步骤测定。 4.4.5 加标回收率实验
在运用紫外可见分光光度法对样品进行测定时，通常需要测出所用方法的待测元素的回收率，以此评价方法的可靠性和准确度，回收率越接近1，则方法的可靠性越高，本实验采用标准加入法测定：取同一种4.4.3制备的样品溶液40mL3份于50mL比色管中，分别加入5.0ug/mLNaNO2标准溶液0.6、0.8、1.0mL，分别按实验方法中步骤进行测定。 4.4.6 计算公式
（1）样品中亚硝酸盐的含量：
X = ——————— × 1000 V2 m1 × —— × 1000 V1
式中：
m2
X：试样中亚硝酸盐含量，mg/Kg；
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