发布时间 : 星期日 文章分析化学实验指导书 - 图文更新完毕开始阅读53de29f1f705cc1755270918
秒表、微量注射器、填充101白色担体载5-10%PEG-6000的?4mm x 200mm不锈钢分离柱。
乙醇，正丁醇和异戊醇混合液。
四、实验步骤：
1、
确定实验条件：柱温90℃、气化室文度20℃、检测器温度150℃、桥流130mA、载气：氢气、记录仪纸速1200mm/小时、衰减1/4—1/8。
2、
打开实验室排气扇，在教师指导下检查仪器电炉连接是否正常，气路系统有无漏气。然后打开氢气瓶的高压阀（手柄逆时针转动为开，此时低压阀须处于关闭状态），再缓缓打开低压阀（顺时针转动为开）调节压力到2—3Kg/ cm，再调节针形阀使载气流速达到测定要求。
3、
接通总电源，开启控温箱电源开关、柱温控温开关、气化室开关、检测器开关，并将柱温、气化室温度、检测器温度调到所需的值上；打开热导池控温箱电源开关，将切换开关扳到“调零”位置、池平衡开关调到中间（顺传5圈）、桥流调到最小、衰减放到1/6档；再打开记录仪开关，将记录仪纸速调到1200mm/小时，待仪器稳定后将桥流加到150mA、衰减放到1/4档进行调零，记录仪调零后，将切换开关扳到“测量”档，等基线稳定后进行实验。
4、
进样2μL，在20mL/min、40mL/min、60mL/min、80mL/min、120mL/min几种不同的流速下测异戊醇的保留时间，并用皂角流量计准确测得相应的体积流速。
一、 数据处理：
以异戊醇的保留时间计算理论塔板高度，再以H~F0作图，并对此图加以讨论。
2
实验23 气相色谱法测定醇的同系物
一、目的要求：
1.熟悉色谱分析的原理及色谱工作站的使用方法。
2.用保留时间定性；用归一化法定量；用分辩率对实验数据进行评价。 二、实验原理
基于不同物质在相同条件下对同一色谱柱的保留时间Rt可能不同赖以定性；物质的量
与色谱峰面积呈Wi～?iAi 的关系用归一化公式定量：
wi?fisAAiAf1sAA1?f2AA?...?fs2nsAn×100%
三、实验内容：
本实验以前是用气相色谱对苯、甲苯、二甲苯、乙基苯及其混合试样用TCD检测、用
记录仪采谱、用秒表计时，让学生掌握用已知物对照定性、用归一化法测定混合物组分定量的实验。据文献报导，苯、甲苯等都是易挥发有毒且能致癌的物质，而TCD检测又使被测物质直接放空，这就必然影响到实验环境和师生的健康；另外，以前所使用的“手工测量”、“剪纸称重”等实验手段，功效之低、误差之大对现代仪器分析而言已经落伍到匪夷所思的地步。
基于以上原因，测定试剂改用乙醇、丙醇、丁醇、异戊醇及其混合试样，检测器改用FID。和苯、甲苯、二甲苯、乙基苯相比，乙醇、丙醇、丁醇、异戊醇的刺激气味和毒副作用要小得多，改TCD为FID，又避免了这些有机物的直接放空，从而大大减少了实验师生对有机蒸气的接触，增加了实验的“绿色”成分；同时，原色谱仪升级为色谱工作站，用色谱软件进行谱图处理和定量计算，以提高实验的功效和时效。
用乙醇、丙醇、丁醇、异戊醇及其混合物为测定试剂，经大量实验优化筛选，此时用HMDS : PEG-20000 = 100 : 15为固定相，分析效果良好。将填充好的长2m内径2mm的色谱柱的进口端接入色谱仪，出口端放空，在0.3Mpa的载气和200 C的柱温下老化8h。老化好的色谱柱出口端接通FID。
将计算机、打印机、软件狗、色谱数据采集单元和原有的1001型、SP—2305型色谱仪各一用相应的信号线连好，将色谱数据处理程序装入计算机，打开信号采集单元开关，等指示灯不闪烁即可运行该程序进行实验。
1、打开1001气相色谱仪电源，调节 ① 柱温：135C ②离子化室温度：135C ③ 进样器温度：135C ④ 载气压力：0.4MP ⑤氢气压力：0.1MP ⑥ 空气压力：0.15MP ⑦ 灵敏度: 10 ⑧ 衰减: 4。
2、打开“HW-色谱工作站中文版”，从“参数表”中选择信号通道：A；采集时间：60分钟； 时间计量：绝对；起始峰宽水平：3；最小峰面积：20；噪声滤出强度：3；峰宽水平增速：10。
3、用1μL的进样器分别将纯的乙醇、丙醇、丁醇、异戊醇进样0.2μL，在各自所得峰区域内用右键快捷菜单中的“自动填写时间表”和“自动填写组分表”，将各组分的保留时间和校正因子添入“时间表”和“组分表”，并键入相应组分的名称作为定性依据。 4、注进混合样0.8μL，采谱。
5、定性：根据“时间表”和“组分表”，程序自动给出混合样各峰相应组分的名称。 6、定量：在“定量方法”中选“归一”、“定量根据”选“峰面积”，单击“计算器”按钮，即得如下“定量结果表”（例值）： 序号 1 乙醇 名称 保留时间 1.819 12.33 2.43 1286739 81082 14.491 浓度 校正因子 峰面积 峰高 半高峰宽 峰分离度 1.8 10o
o
o
o
2 3 4 丙醇 丁醇 异戊醇 2.755 4.432 5.958 20.49 22.32 44.86 1.85 1.69 1.59 2138960 2329144 4681673 85172 63921 91981 22.497 34.535 46.320 2.1 1.3 7、混和试样的成功分离是气相色谱法定量分析的前提和基础，衡量一对色谱峰分离的程度可用分离度：R?tR1?tR21?(Y1?Y2)2，式中tR1、tR2和Y1、Y2分别指两组分的保留时间和峰底宽
度，R=1.5时两组分完全分离，实际中R=1.0(分离度98%)即可满足要求。
四、数据处理：
定性：程序可通过对储存在“组分表”中的纯物质的信息的对比、分析，自动给出混合样中相应组分的名称，使色谱定性简单、准确。
定量：归一化法是最简便、最常使用的色谱定量方法，归一法的条件要求是被测样品中的所有组分都必须出峰，要得到某组分的含量：wi?fisAAifA?fA?...?fAA1s1A2s2Ansn× 100%，就必须
Afis知道所有组分的峰面积Ai和相应的校正因子。
五、注意事项：
1.为加强学生的参与，计时仍然可用秒表；在打印谱图之后，定性、定量可由学生自己完成。 2.工作站各设备开、关次序。
3.注射器的正确使用：小心插针/快速注入/匀速拔出/及时归位。 4.掐表与注入的同步性。 5.氢气使用安全事宜。
实验24 苯甲酸、山梨酸的酯化衍生物及高相液相色谱测定
1. 内容提要：将苯甲酸和山梨酸在酸性介质中酯化，用液相色谱分离与测定。
2. 实验目的： ① 掌握苯甲酸和山梨酸的酯化方法及条件；② 熟悉液相色谱操作条件的选择，以达到化合物的良好分离效果；③ 将有机酸的酯化化学与仪器分析紧密结合，准确测定食品中两种酸的含量。
3. 实验关键： ① 样品中胶质、色素、糖要除干净，否则严重干扰后续反应与测定；② 酯化要完全，否则影响分析结果。
4. 思考题：① 在酯化过程中为什么要加入分子筛？② 对有机酸还可采用哪些方法进行酯化？酯化条件如何？③ 除内标法外，还可用什么方法测定其含量？
实验25 荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸
一.目的要求
1.掌握荧光分析法的基本原理和操作。 2.用荧光分析法进行多组分含量的测定的
二.实验原理
邻-羟基苯甲酸（亦称水杨酸）和间-羟基苯甲酸分子组成相同，均含一个能发射荧光的苯环，但因其取代基的位置不同而具有不同的荧光性质。在pH=12的碱性溶液中，二者在310nm附近紫外光的激发下均会发射荧光；在pH=5.5的近中性溶液中，间-羟基苯甲酸不发射荧光，邻-羟基苯甲酸由于分子内形成氢键增加了分子刚性而有较强的荧光，且荧光强度与pH=12时相同。利用这一性质，可在pH=5.5测定二者混合物中邻-羟基苯甲酸的含量，间-羟基苯甲酸不干扰。另取同样量的混合物溶液，测定pH=12的荧光强度，减去pH=5.5时测得的邻-羟基苯甲酸的荧光强度，即可求出间-羟基苯甲酸的含量。
三.仪器与药品
WFY-28型荧光分光光度计；10ml比色管；分度吸量管；
邻-羟基苯甲酸标准溶液：60?g/ml(水溶液)；间-羟基苯甲酸标准溶液：60?g/ml(水溶液)；NaOH水溶液：0.1mol/L；
pH=5.5的HAc-NaAc缓冲溶液：47gNaAc和6g冰醋酸溶于水并稀释至1L即得。
四.实验步骤
1. 标准系列溶液的配制：
（1）分别移取0.40，0.80，1.20，1.60，2.00ml邻-羟基苯甲酸标准溶液于已编号的10ml比色管中，各加入1.0ml pH=5.5的HAc-NaAc缓冲溶液，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
（2）分别移取0.40，0.80，1.20，1.60，2.00ml间-羟基苯甲酸标准溶液于已编号的10ml比色管中，各加入1.2ml0.1mol/L的NaOH水溶液，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
（3）取未知溶液2.0ml于10ml比色管中，其中一份加入1.0ml pH=5.5的HAc-NaAc缓冲溶液，另一份加入1.2ml0.1mol/L的NaOH水溶液，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 2．荧光激发光谱和发射光谱的测定：测定（1）中第三份溶液和（2）中第三份溶液各自的激发光谱和发射光谱，先固定发射波长为400nm，在250-350nm区间进行激发波长扫描，获
max得溶液的激发光谱和荧光最大激发波长?maxex；再固定激发波长?ex，在350-500nm区间进
行发射波长扫描，获得溶液的发射光谱和荧光最大发射波长?max此时，在激发波长?maxem。ex处和发射波长?maxem处的荧光强度应基本相同。