发布时间 : 星期四 文章细胞工程重点(1)更新完毕开始阅读581e9dd355270722192ef7e5
客观题（选择，填空，判断）
0选择题（细胞培养基；细胞培养的几个概念：克隆培养、传代培养、次代培养；细胞生存的PH值、细胞生存的温度）
1基本细胞培养的操作（超净台有哪些，消毒） 2细胞融合常用的方法和特点
3细胞培养中用的瓶皿，清洗方法，泡酸（酸是浓硫酸和重铬酸钾），生理盐水在细胞培养中叫BBS 4精子受精前要获能
5卵细胞的基本结构（两极，卵黄在哪个极？） 6囊胚期和桑葚期的区别
7胚胎工程中超速排卵用的是什么激素 8体外受精的方法，应用
9胚胎移植（手术方法：肺部开口动物、腹部开口动物；非手术方法：） 10体外转化（概念，方法，）
11细胞凋亡（概念，方法，涉及的酶，因子，癌基因：癌基因家族）
12细胞生长过程中的监测方法（细胞计数，细胞污染，细胞克隆等知识） 13单克隆抗体用什么筛选？
14细胞染色（MTT染细胞的什么成分，台盼蓝染什么细胞？） 15细胞培养的正确过程 16常用的冷冻剂
17干细胞的定义，分类，分化潜能，组织来源
18细胞污染（支原体发生在？季节，主要来自于血清，检测方法、处理和预防；真菌发生在？季节；霉菌的处理和预防）
19单克隆抗体支原体污染时，把细胞注射入小鼠腹部 20哪种氨基酸是控制氨基酸转移的（谷氨酰胺） 名词解释
组织工程、细胞融合、干细胞、克隆、克隆培养、传代培养、次代培养、胚胎干细胞、体外转化、细胞凋亡、细胞培养、
简答（要点） 细胞培养基制备的条件 冻存的步骤
转基因动物的目的基因转入的方法 胚胎干细胞的特点和定义 体外受精的过程（精子有顶体反应、卵子有？反应）也可出选择和判断 论述绪论（细胞工程的主要研究领域，应用前景） 单克隆抗体（应用以及人源化抗体的问题）
名词解释
传代：用胰酶等将原代细胞消化分散后，再培养一代。此操作过程叫传代。 细胞培养：将组织分散或从组织中分离活的细胞，在体外进行培养和传代。 组织工程学：应用工程学和生命科学的原理和方法来研究正常或病理状况下哺乳动物组织的结构、功能和生长机制，研究开发能够修复、维持或改善损伤组织的人工生物替代物的一门学科。
细胞融合：又称体细胞杂交，是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的过程。 干细胞：干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
细胞发生转化的本质：由原癌基因激活或者抑癌基因失活而引起的细胞周期调控紊乱和分化受阻，使细胞生长不受控制，无限增殖。
细胞系(Cell line)： 原代细胞中超过此极限的一些细胞建立形成了一种确定的细胞株。它们能无限制地存活。 致癌病毒：RNA病毒(逆转录病毒)和DNA病毒
细胞株(cell strain)：通过选择法或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特定性质或标志的细胞群。细胞株的这种特定性或标志必须在整个培养期间始终存在。
克隆(clone)：由同一个祖先细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。 （凋亡复合体）：细胞色素C、Apaf-1和pro-caspase 9 组成了“Apoptosome” 细胞培养从环境、设施以及操作各个方面实行对污染的防护与控制 细胞活性的化学检测方法：四氮唑盐（MTT）比色法 细胞生长状况有关指标的检测方法技术基础——细胞计数
干细胞分化潜能：干细胞分成全能性干细胞、 多能性干细胞、单能干细胞。
简答题
1．细胞培养基制备的条件：
1、营养物质 2、缓冲能力 3、等渗性 4、无菌
2．冻存的步骤：
1、常规技术消化并收集细胞于离心管中离心。
2、去上清，加入4 ℃预冷的冻存液，轻轻重悬细胞后，均匀分装于冻存管中，做好标记。 3、尽快将冻存管装于纱布袋中，悬于液氮液面上方（-70 ℃）过夜。 4、次日转入液氮中。
3．转基因动物的目的基因转入的方法： 外源目的基因的制备
外源目的基因有效导入生殖细胞或胚胎干细胞 选择获得携有目的基因的细胞
选择合适的体外培养系统和宿主动物 转基因细胞胚胎发育及鉴定 筛选所得的转基因动物品系
4．胚胎干细胞的特点和定义：
1.概念:简称ES细胞,是由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞，是能在体外培养的一种高度未分化的多能干细胞。 2.特点:
1)形态:体积小.细胞核大,核仁明显.
2)功能:具有发育的全能性.可分化为成年动物体内任何一种组织细胞.体外培养可增殖不分化.
3）在体外培养的条件下，ES细胞可以增殖而不发生分化。对它可以进行冷冻保存，也可以进行遗传改造。
5．体外受精的过程：
成熟或未成熟的卵母细胞获得、体外培养系统的建立、处理附睾内和射出精子、使精卵结合——受精、受精卵的体内或体外培养、移植妊娠和产仔 。
6.核移植应用
1．制备转基因克隆动物，进行生物药物生产； 2．培育优良畜种，扩大良种种群 ； 3．开展异种动物克隆，拯救濒危动物； 4．与干细胞技术结合，开展治疗性克隆
5．利用核移植技术，研究生物学的基本问题 。
7.转基因方法（两个都放上来了。偏向第一种）
A转基因动物方法 反转录病毒法 基因显微注射法 胚胎干细胞移植法 精子载体导入法
YAC介导的基因转移 B目的基因的转移 电穿孔法 显微注射法
裸露DNA直接注射 磷酸钙—DNA共沉淀法 脂质载体包埋法
病毒介导的生物学方法
8.胚胎移植生理学基础
1)供体和受体相同的生理环境
2)早期胚胎处于游离状态,为胚胎的收集提供了可能 3)受体对移入子宫的胚胎基本上不发生免疫排斥 4)胚胎与受体建立正常的联系,但遗传物质没有改变.
9.细胞融合（这个自己觉得要背神马都好） 融合剂的种类
细胞融合剂 DNA病毒：水痘和疱疹病毒，天花（兔天花）病毒 RNA病毒：仙台(HVj)病毒,NDV，腮腺炎病毒,SV5,麻疹及呼吸道合胞病毒 RNA致癌病毒：Rous肉瘤病毒，Visna病毒 冠状病毒：禽类感染性气管炎病毒 病毒类 化合物 水溶性：聚乙二醇（PEG）、二甲亚砜（DMSO）、ConA 脂溶性：溶血卵磷脂、磷脂酰丝氨酸 生物制剂
昆虫Paederus fuscipes（隐翅虫）提取物 细胞融合的方式
(一)完整细胞之间的融合
两种亲本细胞之间的融合成的杂种细胞，保留双亲染色体，具有双亲的特性。 (二)核体、胞质体与完整细胞的融合作用
核体与完整细胞或另一胞质体融合构成的杂种细胞，也可使胞质体/完整细胞或胞质体中的线粒体、mRNA移至完整细胞，使完整细胞获得新的特性。 (三)微小细胞与完整细胞的融合
采用秋水仙碱和CB脱核处理所获得的微小细胞，胞质体包裹一个或多个染色体将微小细胞和完整细胞融合成杂种细胞，改变完整细胞的特征。 (四)脂质体介导的细胞融合
细胞器/DNA（RT-PCR产物）用脂质体包装后与另一个完整细胞融合。 细胞融合的常用方法
一、仙台病毒法。原理：两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近；通过病毒与原生质体或细胞膜的作用，使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相渗透；两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体
二、聚乙二醇（PEG）法。原理：PEG分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成H键，从而在质膜之间形成分子桥，其结果是使细胞质膜发生粘连进而促使质膜的融合；另外，PEG能增加类脂膜的流动性，也使细胞的核、细胞器发生融合成为可能。
三、电融合法。原理：在直流电脉冲的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位发生改变，使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。
论述题
细胞工程的主要研究领域，应用前景： 一、主要领域：
1．动植物细胞与组织培养
2．细胞融合 新的物种或品系、单克隆抗体 3．细胞核移植 无性繁殖、克隆动物
4．染色体工程 多倍体育种，例：八倍体小黑麦 5．胚胎工程 优良品种、试管婴儿
6．干细胞与组织工程 胚胎干细胞、组织干细胞
7．转基因生物与生物反应器 转基因动物、转基因植物 二、发展前景：
1、优质植物培育与繁殖
植物胚胎或器官离体培养，再生成新植株，快速、大量繁殖有价值的苗木、花卉、药材和濒危植物。 2、动物胚胎工程繁殖濒危品种
利用人工受精、胚胎移植、无性繁殖等细胞工程技术进行濒危灭绝珍奇动物的繁殖研究。 胚胎、精子等冷冻保存技术也为人工保存自然界珍稀动物成为可能。 3、生产活性产物、药品
疫苗、菌苗、抗生素、生物活性物质、抗体等。活细胞疗法、基因治疗。转基因动物生产蛋白质药物。 4、新型动植物品种开发与培育
不同种、属间的细胞或原生质体进行融合获得杂交体细胞。通过染色体人工诱变、胚胎融合、转基因等技术创造具有新遗传性状的个体生物。
5、供医学器官修复或移植的组织
运用细胞工程技术，从人体功能受损或被手术切割的器官获取残余的少量正常细胞在体外繁殖，获得患者所需的具有正常功能又不存在排斥反应的器官供器官移植之需。 6、能源、环保等领域的应用