发布时间 : 星期三 文章党参总酮体外抗氧化活性的研究更新完毕开始阅读58cf6e72910ef12d2af9e7df
2.实验材料与方法
2.1.实验材料
党参购自湖北省金贵中药饮片公司
2.2实验试剂
试剂 芦丁
NaNO2(亚硝酸钠) Al(NO3)3(硝酸铝) NaOH(氢氧化钠) VC(抗坏血酸)
Trolox(奎诺二甲基丙烯酸酯) Na2HPO4(磷酸氢二钠) Na2H2PO4(磷酸二氢钠) Ke[Fe(CN)6](铁氰化钾) FeCl3(三氯化铁) TCA(三氯乙酸) Tris(三羟甲基氨基甲烷) HCl(盐酸)
邻苯三酚(焦性没食子酸) DPPH（1,1-二苯基-2-苦肼基) 无水乙醇
EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠） FeSO4（硫酸亚铁）
厂家 国药集团
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菲咯嗪
ABTS(2 ,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐) K2S2O8(过硫酸钾)
TPTZ（2,4,6-三吡啶基三嗪） DMPD(N,N-二甲基对苯二胺二盐酸盐)
冰乙酸(冰醋酸) 水杨酸钠
H2O2（30%过氧化氢） 甲醇 无水乙酸钠
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2.3实验仪器
仪器 Tμ-1810 实验pH计 旋蒸仪
GZX-9140 MBE数显鼓风干燥箱 RT-02A粉碎机 酶标仪 电子天平
厂家
北京普析通用仪器有限责任公司 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司 巩义市予华仪器有限责任公司 上海博讯实业有限公司 弘荃机械企业有限公司 Tecan
上海精密科学仪器公司
2.4实验方法
2.4.1溶液样品的制备和试剂的配制
(1) 芦丁标准溶液：称取芦丁0.038 g，用30%乙醇溶解定容至250 mL，贴上标签备用。
(2) 30%乙醇：量取16 mL 95%乙醇放置50 mL容量瓶中定容至刻度，贴上标签备用。
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(3) 5% NaNO3溶液：称取5 g NaNO3放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中定容，贴上标签备用。
(4) 10% Al(NO3)3溶液：称取10 g Al(NO3)3放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中定容。
(5) 1 mol/L NaOH 溶液：称取4 g NaOH加热水放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中定容，贴上标签备用。
(6) 2 mg/mL VC溶液：称取0.2 g抗坏血酸放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中定容，贴上标签备用，再根据需要稀释到一定浓度。
(7) 800 μmol/l Trolox溶液：称取0.02 g Trolox放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中定容，贴上标签备用，再根据需要稀释到一定浓度。
(8) 0.2 mol/L PBS（pH6.6）：称取7.163 g磷酸氢二钠和3.112 g磷酸二氢钠，分别用蒸馏水溶于小烧杯，再将两溶液分别定容至100 mL的容量瓶，摇匀。以3:5的比例取37.5 mL磷酸氢二钠溶液和62.5 mL磷酸二氢钠溶液，在烧杯中混合均匀，用pH计测定其pH，用稀盐酸或氢氧化钠溶液微调pH至6.6，贴上标签备用。 (9) 1%铁氰化钾溶液：称取1 g铁氰化钾放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中，贴上标签备用。
(10) 10%三氯乙酸：称取10 g三氯乙酸放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中，贴上标签备用。
(11)0.1%三氯化铁：称取0.1 g三氯化铁放置于烧杯中溶解，移至100 mL容量瓶中，贴上标签备用。
(12) 7 mmol/L邻苯三酚：称取0.0088 g邻苯三酚试剂，取10 mL纯水溶解于10 mL的EP管中，摇匀，贴上标签。需要注意的是，由于邻苯三酚容易发生自氧化，因此，邻苯三酚溶液必须现配现用。
(13) Tris-HCl缓冲液（pH8.2）：称取1.5142 g Tris颗粒，用蒸馏水溶解于小烧杯后转移至250 mL容量瓶，蒸馏水定容。将已定容的液体移至烧杯，加入浓盐酸不断搅拌，用pH计测定其pH，调节pH至8.2，贴上标签备用。
(14) DPPH溶液：称取0.394 g DPPH放置于小烧杯中加入10 mL无水乙醇溶解，放入10 mL的EP管中，贴上标签备用。需注意溶液必须现配现用，避光保存。 (15) EDTA-2Na溶液：称取0.9306 g EDTA-2Na放置于10 mL的EP管中溶解，贴上标签备用。
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(16) 2 mM硫酸亚铁溶液：准确称取2.78 g硫酸亚铁放置于10 mL水的EP管中加入5 mL水溶解，贴上标签备用。
(17) 2 mM菲咯嗪溶液：准确称取4.92 g菲咯嗪放置于放置于10 mL水的EP管中加入5 mL甲醇（5 mM）溶液溶解，贴上标签备用。
(18) ABTS储备液：先配7 mM ABTS溶液，称取0.0960 g ABTS粉末，用蒸馏水25 mL容量瓶定容，溶解，贴上标签备用；再配140 mM K2S2O8溶液，称取0.3782g K2S2O8，5 mL ABTS溶液加上88 μLK2S2O8溶液，用蒸馏水定容至10 mL；再次，避光保存过夜，12~16小时测定（测定时，用无水乙醇或0.1 M pH7.4的磷酸缓冲0.02），贴上标签备用。需注意加入氧化剂后，液稀释至734 nm处吸光值为0.7±
+
ABTS·量减少，吸收值降低，因此要现配现用。
(19) Ferric-TPTZ试剂：300 mM pH3.6的醋酸缓冲液、溶于40 mM HCl 的10 mM TPTZ溶液、20 mM的FeCl3·6H2O溶液按体积比为10:1:1混合
(20) 10 mM DMPD溶液：称取209 mg DMPD,溶于10 mL的去离子水中，取10 mL溶液加入2 mL的0.1M pH6.3醋酸缓冲液，再加入0.2 mL的0.05 M氯化铁中，得到有颜色的自由基阳离子，贴上标签备用。需注意，该溶液要现配现用，室温保存不超过12 h。
(21) 6 mmol/L水杨酸钠溶液：称取0.24 g水杨酸钠，用水溶解，之后定容至250 mL的容量瓶中，贴上标签备用。
(22) 6 mmol/L FeSO4溶液：称取0.083 g FeSO4，用水溶解，之后定容至50 mL的容量瓶中，贴上标签备用。
(23) 6 mmol/L 过氧化氢溶液：量取61 μL 30%过氧化氢放入100 mL的容量瓶中稀释至刻度线，贴上标签备用。 2.4.2芦丁标准曲线的测定
将配制的芦丁标准溶液作为初始浓度。分别吸取1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL标准品溶液分别加入标号为1、2、3、4、5的25 mL容量瓶中，蒸馏水对照为0号瓶，各加30%乙醇至12.5 mL。先加5%亚硝酸钠溶液0.7 mL，震荡摇匀后放置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.7 mL，摇匀后放置6 min；之后依次加入浓度为1 mol/L的氢氧化钠溶液5 mL；最后用30%乙醇定容至25 mL，放置15-20 min。0号作空白对照调零，在510 nm波长下测量其余各瓶的吸光值(OD)。吸光值作为纵坐标，浓度(mg/mL)作为横坐标，绘制标准曲线图[20]。
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