发布时间 : 星期四 文章基因工程考试复习资料更新完毕开始阅读5e2b842c5b8102d276a20029bd64783e09127d3d
二，包涵体：在一定条件下，外源基因的表达产物在E.coil中积累并致密的集中在一起形成无膜的裸露结构，这种结构称为包涵体。
三，融合蛋白(fusion protein)是将两个或多个基因的编码区首尾连接,由同一调控序列控制构成的基因表达产物。
四，非融合蛋白（no-fusion protein）：不与细菌的任何蛋白或多肽融合在一起的表达蛋白称为非融合蛋白
五，原核生物作为受体细胞的优势及其存在问题（未找到） ① 优点:使重组蛋白易于分离、免受蛋白酶降解、不损害寄主细胞 ② 缺点:回收的蛋白生物活性差。
分子伴侣共表达（一类能促使其他蛋白质按正确的方式组装或折叠，本身却不是最终形成的功能蛋白质的组成部分的多功能蛋白质） 硫氧还蛋白还原酶基因缺陷的寄主菌株 降低蛋白质的合成速率
六，如何提高外源基因在原核中的表达
① 通过表达载体将外源基因导人宿主菌，并利用宿主菌的酶系统合成外源蛋白； ② 外源基因不能带有间隔顺序(内含子)，因而必须用cDNA或全化学合成基因，而不能用基因组DNA；
③ 必须利用原核细胞的强启动子和S-D序列等调控元件控制外源基因的表达；
④ 外源基因与表达载体连接后，必须形成正确的开放阅读框架(open reading frame，ORF)； ⑤ 利用宿主菌的调控系统，调节外源基因的表达，防止外源基因的表达产物对宿主菌的毒害
七，原核细胞表达真核基因的缺陷及解决措施 <1>原核细胞表达真核基因的缺陷
①没有真核转录后加工的功能，只能表达cDNA而不能表达真核的基因组基因； ②没有真核翻译后加工的功能，因而产生的蛋白质常没有足够的生物学活性； ③表达的蛋白质经常是不溶的，会在细菌内聚集成包涵体
④RNA聚合酶不能识别真核生物的启动子
⑤产生的真核生物的蛋白质产物可以被细菌的蛋白酶所识别和降解 <2>避免外源基因表达蛋白降解的对策 构建融合蛋白表达系统 构建分泌蛋白表达系统 构建包涵体表达系统
选择蛋白水解酶基因缺陷型的受体系统
八，会设计典型的原核表达载体的形体图 （有图） 1. 非融合型表达蛋白载体pKK223-3
2．分泌型克隆表达载体pinⅢ系统
作为分泌克隆表达载体中关键的编码信号肽的序列，是取自于大肠杆菌中分泌蛋白
的基因ompa (外膜蛋白基因)。
3．融合型蛋白表达载体pGEX系统
这类载体与其他表达载体不同之处在于S-D序列下游是谷胱甘肽巯基转移酶基因，而克隆的外源基因则与谷胱甘肽巯基转移酶基因相连。当进行基因表达时，表达产物为谷胱甘肽巯基转移酶和目的基因产物的融合体。
GST融合蛋白用谷胱甘肽琼脂糖 (Glutathione Sepharose)亲和层析柱分离纯化
九，提高细胞外源基因在动植物的表达水平的策略 <1>提高外源基因在植物中表达的策略 1、启动子优化 2、转译序列的修饰
3、构建含 Ｍ Ａ Ｒｓ的表达载体
4、降低外源基因的拷贝数 5、利用引导肽进行表达产物的定位 <2>提高外源基因在动物中表达的策略 1、导入大片段 2、添加基质附着区
3、利用具有组织与发育特异性调控作用的启动子和增强子. 启动子是RNA聚合酶进行精确有效转录必需的。 4、添加内含子
5、利用基困打靶系统实现染色体定位整合
十，多型汉森酵母母表达系统常用受体细胞 酵酵母基因表达系统宿主菌
酿酒酵母 巴斯德毕赤酵母 乳酸克努维酵母
十
一，基因敲除（knockouts）：通过同源重组使特定基因失活，以研究该基因的功能。
二，基因敲入（knockin）：通过外源基因来代替宿主基因中相应的部分，以便测定他们是否具有相同的功能，或将正常基因引入宿主基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗的目的。
三，基因打靶（gene targeting）: 利用细胞染色体DNA可与外源性DNA同源序列发生同源重组的性质，以定向修饰改造染色体上某一基因的技术叫基因打靶。其理论基础就是基因同源重组。它是80年代后半期发展起来的一门按预期方式精细改造生物遗传信息的试验手段。