发布时间 : 星期四 文章动物实验设计更新完毕开始阅读611fbbf1590216fc700abb68a98271fe900eaf3b
实验技术方法 (1) 随机抽样：选正常成年健康重量相近的SD大鼠100只，从造模成功的大鼠中选出 80只大鼠按体重由小变大编号后，从随机数字表中查取随机数字，依次抄录于SD大鼠编号。 (2) 实验编号与分组：先将试验大鼠称重，然后先按体重每10g为一个重量级， 从小到大排列为若干个组，随后用龙胆紫和苦味酸将大鼠进行标记，龙胆紫表示个位，苦味酸表示十位，从大鼠的左爪开始标记，记为1，随后依次将左侧腹部，左后爪，右前爪，右侧腹部，右后爪，颈部，背部，尾部记为2，3，4，5，6，7，8，9。随后得到大鼠1至80的编号，再在随机数表中查询数字并分组。 (3) 实验手术：抓取手术大鼠，观察其是否健康，如果老鼠身体状况有异，应要更换老鼠。然后在电子称上称其重量，并做好记录，根据体重严格计算麻醉剂量，采用胸部注射麻药。大约三分钟左右，大鼠出现站立不稳，醉酒样步态。四肢固定与手术台上，松紧适中，手术过程中注意观察四肢是否出现瘀血，注意按摩。此时，可用大头针刺激大鼠尾巴，如果大鼠的反应不强烈，预示着可以开始手术。首先剪除大鼠前胸区域毛，而后均匀喷洒碘伏溶液于备皮区域。开通人工呼吸，BL一410生物机能实验系统行心电监测，从左胸纵切口分层开胸。 (4) 模型复制： 于胸骨左缘第4肋间用血管弯钳稍用力穿透肋间肌进入胸腔，并迅速沿肋间隙方向撑开血管钳而钝性分离肋间肌;术者用另一血管弯钳垂直肋间隙撑开肋骨，暴露心脏。在肺动脉圆锥和左心耳之间，距左冠状动脉起始2mm处穿5—0号无创伤丝线，结扎该段冠状动脉。结扎后可见左室前壁失去原有光泽，变苍白，并出现搏动减弱，心电监测可见肢体导联R波振幅明显升高，随后出现I、aVL导联ST段明显抬高，证实制作AMI模型成功。术后注射青霉素预防感染。 (5) 处理措施： 1.奥扎格雷注射液：建模成功后即刻注射奥扎格雷注射液0.2mg/100g，以后每隔24h按[10] 上述剂量注射一次。2.损伤组：建模成功后不给予任何治疗措施。 (6) 取材：将压力传感器与BL-410生物信号采集系统连接，测量并记录所需要的各项指标。经股静脉注入10%KCl 2 ml，使心脏停搏于舒张期，迅速取出心脏，用PBS液洗去血液，滤纸吸净水分后用电子天平(精确到0.1 mg)分别称取左、右心室实际重量(LVAW、RVAW)，计算其与体质量(BW)的比值，得到左、右心室相对重量(LVRW、RVRW)。将心脏从心尖到心底沿长轴横切4等分，用4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。各取一张5 μm的病理切片作HE染色。[11]用HPIAS彩色病理图文分析系统测量每张切片的心内膜缘总长及心梗部位心内膜缘长度，计算梗死面积。 (7) 指标检测： ①心电图：于术后0h、24h、1w、2w、3w、4w，分别观察其心电图的变化。 ②HE染色切片观察：在24h、1w、2w、3w、4w，时分别从5组中每组随机取出4只大鼠处死，并迅速取出心脏，PBS液洗去血液。用甲4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。各取一张5 μm的病理切片作HE染色并观察。 ③血流动力学检查（SBP、DBP、LVSP、LVEDP、左室内压最大上升和下降速率) 在24h、1w、2w、3w、4w，时分别从5组中每组随机取出4只大鼠，用3%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，气管切开插管，保持呼吸道通畅。分离右侧颈总动脉，插入2F聚乙烯
导管，0.3%肝素生理盐水抗凝，将压力传感器与BL-410生物信号采集与处理系统连接，测量并记录颈总动脉收缩压(SBP)和舒张压(DBP)，向前推送导管至左心室测量左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)等参数。 测定SBP、DBP、LVSP、LVEDP、左室内压最大上升和下降速率的意义：这些指标能直接反应出心脏的恢复情况，从而了解到各种处理措施对大鼠恢复心脏功能的作用。 4梗死面积大小、梗死区室壁厚度变化、心室肌质量／体重指标的测定：在24h、1w、○2w、3w、4w，时分别从2组中每组随机取出4只大鼠，处死大鼠后用滤纸洗净，用电子天平分别称取左、右心室实际重量(LVAW、RVAW)，计算其与体质量(BW)的比值，得到左、右心室相对重量(LVRW、RVRW)。将心脏从心尖到心底沿长轴横切4等分，用尺子测量心室的厚度，并用4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。用HPIAS彩色病理图文分析系统测量每张切片的心内膜缘总长及心梗部位心内膜缘长度，计算梗死面积。[12] 从梗死面积的变化情况可以知道该处理措施是否减小了梗死面积，从梗死区室壁的厚度变化我们可以知道各种药物处理是否对心室壁的重构有影响，从心室肌质量/体重可以知道心肌代偿肥大的程度。 （三）可行性分析 1、SD大鼠易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。 2、手术器材、设备、仪器、药品均为实验室常用或易于得到。 3、实验药品较便宜，且选用大鼠使实验成本较低。 （四）预期效果 1、奥扎格雷注射液治疗急性心肌梗死疗效更明显。 2、为临床上进一步应用奥扎格雷注射液治疗急性心肌梗死提供可靠依据。 3、奥扎格雷注射液可以考虑作为临床上治疗急性心肌梗死的一线用药。 （五）实验设计工作时间安排 1、共计2d完成分组及编号 2、共计7d完成模型复制 3、共计35d完成实验 三、完成实验的条件 1、仪器设备情况：本实验采用机能实验室常用手术器械、大鼠板、2F聚乙烯导管、注射器、电子秤、鼠笼、显微镜、高压灭菌锅、尺子、BL-410生物信号采集系统、HPIAS彩色病理图文分析系统等。 2、实验动物情况：健康SD大鼠100只。 3、药品试剂来源：戊巴比妥钠、75%消毒酒精、碘伏、生理盐水、0.3%肝素生理盐水、4%多聚甲醛、青霉素、复方丹参注射液、黄芪注射液、阿托普利、苏木精 — 伊红试剂、龙胆紫、苦味酸等。