发布时间 : 星期一 文章2015-2016高中生物 专题2 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数练习 新人教版选修1更新完毕开始阅读64e820f4f01dc281e53af0d2
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、筛选菌株 1．原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
2．途径
用选择培养基筛选。
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。用其培养的目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。
二、统计菌落数目的方法和注意事项 1．常用方法：稀释涂布平板法 (1)统计依据：
①当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。 (2)计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M。
C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。 V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积。 M：代表稀释倍数。
(3)注意事项：
①一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ②统计菌落数往往比活菌的实际数目低。 ③统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
④设置对照：目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
2．计数方法
利用显微镜直接计数。
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三、实验设计 1．土壤取样
从富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤中取样。取样时，一般要铲去表层土，在距地表的3～8 cm的土壤层取样。
2．样品的稀释
样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300之间，便于计数。
3．细菌的培养与观察
将培养基平板倒置于30～37 ℃温室中培养1～2 d，每隔24_h统计一次菌落数目，最后选取数目稳定时的记录作为结果。
4．细菌的计数
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中的细菌数目。
一、选择题
1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(A)
A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水 B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水 C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水
D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
解析：能选择出分解尿素的细菌的培养基必须是以尿素为唯一氮源，B、D不符合。C没有有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。
2．从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有(A) ①尿素 ②有机氮化物 ③无机盐 ④有机碳化物 ⑤水 ⑥无机碳化物
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A．①③④⑤ B．②③④⑤ C．①③⑤⑥ D．②③⑤⑥
解析：分离能分解尿素的细菌，故培养基中一定有尿素，一定没有有机氮化物；另外，水、无机盐和碳源、能源也是细菌生长所必不可少的。有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，不能利用无机碳化物。
3．关于土壤取样的叙述错误的是(C) A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B．先铲去表层土3 cm左右，再取样 C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D．应在火焰旁称取土壤
4．取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是(D) A．活细胞数 B．死细胞数 C．菌落数 D．细胞总数
解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。
5．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有(A)
①由于土样不同 ②由于培养基被污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照 A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④ 6．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是(C) A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数 B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落 C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数
D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果
解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。涂布三个平板，作为重复组，取其平均值作为统计结果能增强试验的说服力与准确性。
7．请选出分离土壤细菌的正确操作步骤(C)
① 土壤取样 ② 称取10 g土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中 ③ 吸取0.1 mL
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进行平板涂布 ④ 依次稀释至10、10、10、10、10、10、10稀释度
A．①→②→③→④ B．①→③→②→④ C．①→②→④→③ D．①→④→②→③
解析：在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。
8．下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法中，错误的是 (D)
A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离
B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同
C．如果得到了2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数
D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落
解析：样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在30～300之间适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用10、10和10倍的稀释液；测定放线菌的数量一般选用10、10和10
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倍的稀释液；测定真菌的数量一般选用10、10和10倍的稀释液。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基的筛选作用。
9．“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中以土壤中的细菌为研究对象，要达到的目的是(B)
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②从土壤中分离出能够分解氨的细菌 ③统计每克土壤样品中究竟含有多少分解尿素的细菌 ④统计所取土壤样品中究竟有多少分解尿素的细菌
A．①② B．①③ C．②④ D．③④
解析：该实验是为了分离出能分解尿素的细菌，根据活菌计数法，计算出的是每克土壤样品中的菌株数。
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