发布时间 : 星期日 文章生物化学实验指导更新完毕开始阅读690df678852458fb760b560a
1．实验材料：
（1）酵母片（药用）
（2）精密试纸pH0.5～5.0 2．仪器
研钵；恒温水浴；10mL量筒一只；50mL小烧杯；滴管和玻棒；试管及试管架、试管夹；离心机和离心管。 3．试剂
（1）10% NaCl溶液；1 （2）6N HCl溶液 （3）95%乙醇
（4）0.1M AgNO3溶液 （5）3N硫酸 （6）浓氨水
（7）FeCl3浓盐酸溶液：将2ml10% FeCl3溶液加入400ml浓盐酸中成。
（8）苔黑酚乙醇溶液：将6克苔黑酚溶于100ml 95％的乙醇中（可在冰箱中保存1个月）
（9）定磷试剂：
17％硫酸：17ml浓硫酸（比重1.84）缓缓加入到83ml水中。 2.5％钼酸铵溶液：2.5克钼酸铵溶于100ml水中。
10％抗坏血酸溶液：10克抗坏血酸溶于100ml水中，棕色瓶中保存。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则失效。
临时用时将上述三种溶液与水按如下比例混合：
17％硫酸：2.5％钼酸铵溶液：10％抗坏血酸溶液：水＝1：1：1：2（V/V）
四、实验步骤
1. 取酵母片3粒放入研钵内，加入少量10% NaCl溶液研磨均匀，再用NaCl溶液将匀浆全部冲洗转移至试管中，加入10% NaCl的总体积应控制在10mL。
2. 将试管放入100℃水浴中提取20分钟，冷却后将提取液转入离心管，3500转/分钟离心10分钟，离心后上清液转入50ml烧杯中，置冰水中冷却5分钟，搅拌下加入6N 的HCl溶液约1～2滴，调节pH为2.0～2.5，继续在冰水中冷却静置10分钟，以充分沉淀。
3. 离心3分钟，去掉上清液，向沉淀中加入95％乙醇5ml，搅拌均匀，再离心3分钟，去掉上清液，并用干净滤纸条吸去残余液体，即是RNA沉淀。
4. 向沉淀中加入3N硫酸6ml，搅匀在沸水浴上加热10分钟即成RNA的水解液。 5. 取水解液按下述操作进行组分鉴定：
(1）嘌呤碱：取水解液1ml加入过量浓氨水，随后加入约1ml 0.1M AgNO3溶液，观察有无嘌呤碱的银化物沉淀出现。
(2）核糖：取试管一只加入1ml 水解液、2ml FeCl3浓盐酸溶液和0.2ml苔黑酚乙醇溶液，在沸水浴上加热10分钟，若溶液变成绿色，则说明有核糖存在。
(3）磷酸：在一支试管内加入1ml水解液和1ml定磷试剂，在沸水浴中加热后溶液变成蓝色，说明有磷酸存在。
试从上述反应的情况，说明从酵母中提取的物质是否是RNA。
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实验七、酶的基本性质实验
一、目的和要求：
通过酶的基本性质实验了解酶催化的高效性、特异性以及pH、温度、抑制剂和激活剂对酶活力的影响，初步了解酶与代谢反应及其调控机理的关系。
二、原理：
过氧化氢酶广泛分布于生物体内，能将代谢中产生的有害的H2O2分解成H2O和O2，使H2O2不至在体内大量积累。其催化效率比无机催化剂铁粉高出10个数量级，反应速率可观察O2产生情况。
酶与一般催化剂最主要的区别之一是酶具有高度的特异性，即一种酶只能对一种或一类化合物起催化作用。如：淀粉酶和蔗糖酶虽然都催化糖苷键的水解，但蔗糖酶只催化蔗糖的水解，而淀粉酶只催化淀粉的水解。还原糖产物可用本乃狄试剂鉴定。
通过比较淀粉酶在不同pH、不同温度、以及有无抑制剂或激活剂时水解淀粉酶的差异，说明这些环境因素与酶活性的关系。
三、仪器、试剂和材料
１．仪器
(1) 恒温水浴（37℃，70℃）、沸水浴（100℃）、冰浴（0℃） (2) 试管18×180共19支
(3) 吸管1mL 7支、2mL 3支、5mL5支 (4) 量筒100mL 1个 (5) 白瓷板
(6) 胶头滴管3支 ２．试剂 (1) Fe粉
(2) 2%H2O2（用时现配）
(3) 唾液淀粉酶溶液：稀释200倍的新鲜唾液。 (4) 蔗糖酶溶液：取1g鲜酵母或干酵母放入研钵中，加入少量石英砂和水研磨，加50mL蒸馏水，静置片刻，过滤即得。
(5) 2％的蔗糖溶液：分析纯蔗糖新鲜配制。
(6) 1%淀粉溶液：1g淀粉和0.3g NaCl，用5mL蒸馏水悬浮，慢慢倒入60mL沸腾的蒸馏水中，煮沸1min，冷却至室温，加水到100mL，冰箱储存。
(7) 0.1％淀粉溶液：0.1g淀粉，用5mL蒸馏水悬浮，慢慢倒入60mL沸腾的蒸馏水中，煮沸1分钟，冷却至室温，加水到100mL，冰箱储存。
(8) 本乃狄试剂：17.3g CuSO4·5H2O，加100mL蒸馏水加热溶解，冷却；173g柠檬酸钠和100g Na2CO3· 2H2O，以600mL蒸馏水加热溶解，冷却后将CuSO4溶液慢慢加到柠檬酸钠－碳酸钠溶液中，边加边搅匀，最后定容至1000mL。如有沉淀可过滤除去，此试剂可长期保存。
(9) 碘液：3g KI溶于5mL蒸馏水中，加1g I2，溶解后再加295mL水，混匀储存于棕色瓶中。
(10) 磷酸缓冲液：
A液：0.2mol/L Na2HPO4
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称取28.40g Na2HPO4或（71.64g Na2HPO4·12H2O）溶于1000mL水中。 B液：0.1mol/L 柠檬酸
称取21.01g柠檬酸（C6H8O7·H2O）溶于1000mL水中。 pH5.0缓冲液：10.30mL A液＋9.70mL B液 pH7.0缓冲液：16.47mL A液＋3.53mL B液 pH8.0缓冲液：19.45mL A液＋0.55mL B液 (11) 1% CuSO4·5H2O溶液 (12) 1% NaCl溶液 ３．材料
每边约0.5cm的马铃薯方块（生、熟）。
四、操作步骤
1.酶催化的高效性
取4支试管，按下表操作：
操作项目 2％ H2O2(mL) 生马铃薯小块（块） 熟马铃薯小块（块） 铁 粉 现 象 解释实验现象
2.酶催化的专一性
取六支干净试管，按下表操作： 操作项目 1％淀粉（mL） 2%蔗糖（mL） 唾液淀粉酶原液（mL） 蔗糖酶溶液（mL） 蒸馏水（mL） 酶促水解 本乃狄试剂（mL） 反 应 现 象 解释实验现象
3.温度对酶活力的影响 取3支试管，按下表操作：
2 管 号 1 1 0 1 0 0 2 1 0 0 1 0 2 3 0 1 1 0 0 2 4 0 1 0 1 0 2 5 1 0 0 0 1 2 6 0 1 0 0 1 2 管 号 1 3 2 0 0 2 3 0 2 0 3 3 0 0 一小匙 4 3 0 0 0 摇匀，37℃水浴中保温10min 摇匀，沸水浴中加热5－10min 14
操作项目 唾液淀粉酶溶液（mL） pH7.0磷酸缓冲液（mL） 温度预处理5min 1%淀粉溶液（mL） 管 号 1 1 2 0℃ 1 2 1 2 37℃ 1 3 1 2 70℃ 1
摇匀，保持各自温度继续反应，数分钟后每隔半分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2min，各加1滴碘液，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。
4．pH对酶活力的影响
取3支试管，按下表操作： 操作项目 pH5.0磷酸缓冲液（mL） pH7.0磷酸缓冲液（mL） pH8.0磷酸缓冲液（mL） 1%淀粉溶液（mL） 预保温 唾液淀粉酶溶液（mL） 检查淀粉水解程度 1 管 号 1 3 0 0 1 2 0 3 0 1 混匀，37℃水浴中保温2min 1 1 摇匀，37℃水浴中继续反应，每隔半分钟从第2号管中取出1滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应情况，直至反应液不再变色，即可停止反应，取出所有试管。 1 1 1 3 0 0 3 1 碘液（滴） 现 象 解释实验现象
5.酶的抑制与激活
操作项目 1%NaCl（mL） 1% CuSO4（mL） 蒸馏水（mL） 唾液淀粉酶溶液（mL） 0.1％淀粉溶液（mL） 保温反应并检测淀粉水解程度 管 号 1 1 0 0 1 3 2 0 1 0 1 3 3 0 0 1 1 3 摇匀，37℃水浴反应1min左右即可用碘液检查1号试管淀粉水解程度，待1号试管的反应液不再变色时取出所有试管。 1 15
碘液（滴）
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