发布时间 : 星期二 文章中国药典中药质量标准研究制定技术要求更新完毕开始阅读72e239343968011ca30091df
采用相似度评价软件计算相似度时，若峰数多于10个，且最大峰面积超过总峰面积的70%，或峰数多于20个，且最大峰面积超过总峰面积的60%，计算相似度时应考虑去除该色谱峰。
对于用于鉴别的指纹图谱，若能够提供对照提取物，则优先考虑采用对照提取物作对照，也可以采用标准中给出的对照指纹图谱作对照进行目测比较，比较其色谱峰的峰数、峰位、峰与峰之间的比例等简单易行的方法。
为确保特征或指纹图谱具有足够的信息量，必要时可使用二张以上特征或指纹图谱。
（二）检查
检查项主要包括安全性、有效性、均一性与纯度要求四个方面，应根据中药材（包括饮片）、提取物（包括植物油脂）、中药制剂的具体情况，研究建立合理的检查项目。
《中国药典》附录收载的检查方法根据药品的不同情况有的会按序排列多个方法，制定各品种质量标准时，应考察每种方法对所测品种的适用性，一般应明确规定使用第几法并说明使用该方法的理由。
对于需要根据品种情况制定检查限度的项目，应按要求收集足够量有代表性的样品，根据实测数据制定限度。
（三）、含量测定 1、 测定成分的选择
一般应根据中药的功能主治或活性试验结果来选择相应的专属性成分、活性成分作为含量测定的指标；避免选择无专属性的指标成分或低活性的微量成分，同时应首选样品中原含成分，避免选用水解成分作为测定指标。
当单一成分不能反映该药的整体活性时，应采用多成分或多组分的检测方法。
2、供试品溶液制备方法选择
（1）提取条件的确定,应对不同溶剂、不同提取方式、不同时间及不同温度等条件进行比较，确定最佳条件，并提供研究数据。
（2）分离纯化条件的确定，根据被测成分的性质，对样品溶液可进行适当的分离纯化以排除干扰物质，如采用液-液萃取及聚酰胺、氧化铝、硅胶、大孔吸附树脂等色谱纯化方法，并提供方法选择的依据及相应的研究数据。
3、含量测定方法的选择及研究内容要求
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含量测定方法应具有专属性，如测定方法无法做到专属性而采用了某一种非专属性的方法，则应用其他的分析方法来达到总体的专属性。比如，可附加一种合适的鉴别试验（如特征或指纹图谱等）。
选用的分析方法应符合“中药质量标准分析方法验证指导原则”的要求。 （1）容量法
主要用于含矿物类药材的含量测定，常用中和法、碘量法、银量法、络合量法等。 应注意对样品必要的处理、破坏，取样量应满足精度要求，消耗滴定液控制在10－20ml；确定滴定液、滴定度及指示剂等，指示剂对终点变色应敏锐、易观察、无其他颜色干扰。
（2）重量法
选择供试品用量、提取、分离、纯化及干燥等条件，必要时提供换算因子（四位有效数字）。
（3）氮测定法
主要用于含较多蛋白质或氨基酸中药的含量测定。根据品种情况确定使用常量法或半微量法，照现行版《中国药典》附录收载的氮测定法测定并规定限度。
（4）紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法用于在特定波长处对光有吸收或通过加入一定的显色剂后有吸收的单一成分或类别成分的含量测定，常用方法有对照品比较法和比色法。中药成分复杂、干扰因素不易排除，成分含量变化幅度大，因此紫外-可见分光光度法中的吸收系数法一般不宜采用。
建立方法时应确定供试品溶液及对照品溶液的制备方法，选择最佳的测定波长，配制供试品溶液时，提取、转移、稀释次数应尽量少；取样量应适宜，一般吸光度应在0.3-0.7之间。
注意，采用比色法测定时供试品溶液与对照品溶液的最大吸收波长也应一致；制备标准曲线时至少应取5份以上对照品溶液进行测定。
（5）薄层色谱扫描法
薄层色谱扫描法用于中药含量测定时，应选择在一定条件下能产生荧光的化学成分，需要显色后进行扫描测定的成分一般不提倡使用该方法。
应采用预制的商品薄层板；扫描方式一般选用反射方式，采用吸收法或荧光法；扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描。
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①应优化选择供试品提取与纯化方法；供试品取样量应能使被测成分的含量在对照品高低浓度的范围内，并注意避免点样量超载。
②应优化选择薄层色谱条件，如薄层板型号（注意对不同厂家及不同批号的薄层板进行分离效果比较）、薄层板的预处理、展开溶剂、展开条件、检视条件、扫描条件等。
③要关注实验环境（例如，温度、湿度）对结果的影响，对温、湿度敏感的品种应将温、湿度要求列入标准正文。
④计算方法一般采用线性回归二点法或多点法校正多项式回归计算。 （6）高效液相色谱法
高效液相色谱法具有分离性能高、分析速度快、灵敏、操作简便等特点，已成为中药含量测定的首选方法。测定方法有内标法和外标法，一般首选外标法。流动相组成可采用固定比例（等梯度洗脱）或按程序改变比例（梯度洗脱）。常用的检测器为紫外检测器（UV）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸法光散射检测器（ELSD）、质谱检测器等。
建立方法时应以二极管阵列检测或质谱检测对所测定的样品峰进行单一性验证，并将验证结果列入起草说明中。
①根据被测成分的性质选用适宜的色谱柱，一般首选C18柱，注意色谱柱的性能、适用范围、适宜的pH值范围等。
②优化色谱条件，如色谱柱、流动相组成及比例(尽量避免使用缓冲溶液)、洗脱程序、检测波长等；确定系统适用性试验参数（理论板数、分离度等）。
③选定供试品取用量、提取及纯化方法（采用超声处理时，应规定超声功率、频率，必要时注明超声温度），稀释体积、定容体积等；选定对照品溶液配制用溶媒、配制浓度、配制方法等。
④利用蒸发光散射检测器（ELSD）检测时，应根据供试品中被测成分的峰面积积分值或响应值进行数学转换后进行计算。
（7）气相色谱法
气相色谱法用于含挥发性成分的含量测定，测定方法有内标法、外标法，中药含量测定首选外标法。检测器有火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、质谱检测器（MS）等。
①建立方法时可选择填充柱或毛细管柱，一般中药测定宜选用毛细管柱；选用毛细管柱时应考察确定毛细管柱种类、柱长、内径、膜厚度等；选用填充柱
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应考察确定固定相种类及涂布浓度。
②选择进样口温度、柱温（若为程序升温应确定初始温度、程序升温速度、达到温度、保持时间等）、检测器温度、分流比、理论板数等有关参数。
③采用内标法时，应选定适宜的内标物质及校正因子的测定方法，内标物质的峰应能与样品中的被测成分及杂质峰达到较好的分离。
④采用外标法定量时，为保证进样误差符合规定，宜采用自动进样，提高进样重复性。
⑤选定供试品取量、提取及纯化方法（采用超声处理时，应规定超声功率、频率，必要时注明超声温度），稀释体积、进样体积等；选定对照品溶液配制用溶媒、配制浓度、配制方法等。
（8）电感耦合等离子体质谱法
电感耦合等离子体质谱法灵敏度高，可用于多种元素的同时测定，分析效率高，是目前国际公认的最先进的元素分析方法。测定模式有一般模式和氦气碰撞反应模式及氢气碰撞反应模式。定量方法有工作曲线法、标准加入法，一般首选工作曲线法。
① 建立方法时应根据元素的特性选择测定模式（例如测定砷应选用氢气或氦气碰撞反应模式）；选择合适的测量质量数。
② 测定前应对仪器进行灵敏度和干扰物调谐，达到要求后方可进行测定。 ③ 考察工作曲线的线性浓度范围，相关系数不得小于0.9990。
④ 实验用器皿以免被污染，均应事先洗干净并用10％硝酸浸泡过夜后再用去离子水冲洗干净备用。
⑤ 实验用试剂应选择优级纯或更纯级别，水为去离子水（电阻率应大于18MΩ）
⑥ 选择供试品溶液的制备方法取样量、消化试剂、消化方法（推荐使用微波消解方法，该方法不易污染，样品消解过程元素不易损失，亦可采用干法消解或湿法消解，但应对消解方法和温度进行方法考察）等。上机溶液应澄清，酸度一般不大于10％。供试品溶液中元素的浓度应在工作曲线的浓度范围之内，否则应调整取样量或稀释倍数，并同法制备空白溶液作为试样空白。
⑦ 制备并测定空白样品溶液，考察各待测元素的检测限。
⑧ 标准物质测定值应为参考值的70％～130％；加标回收试验结果应为60％～140％。
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