发布时间 : 星期日 文章高产淀粉酶芽孢杆菌菌株的筛选更新完毕开始阅读76201c0f4a7302768e9939dc
安徽农业科学．Jcxlmal 0fAnhui姆．Sci．2009。37(12)：5362—5363。5371 责任编辑张杨林责任校对傅真治 高产淀粉酶芽孢杆菌菌株的筛选
唐丽江，王振华，王迪(成都农业科技职业学院畜牧兽医分院，四川温江6lll30)
摘要[目的]筛选高产淀粉酶的芽孢杆茵菌株。[方法]选用10株芽孢杆菌，采用染色法初选和3，5一二硝基水杨酸显色法复选对其产
淀粉酶的能力进行测定，筛选高产淀粉酶的芽孢杆菌茸株。【结果]lo株芽孢杆菌菌株中有9株具有产淀粉酶能力，其中编号为Pah03、
PatlY2的2株枯草芽孢杆菌产酶活性最高，染色圈直径／茵落直径分别为2．284、1．961；在未作发酵条件优化的前提下，其酶活力分别达到
(31．33l±0．985)、(21．521±1．390)u，在作为新型的消化酶饲料添加刺方面具有广阔的应用前景。而菌株凝结芽孢杆菌PsAFl和枯草芽
孢杆菌PJl 分别为Pal】03和Pab02。． 关键词淀粉酶；芽孢杆菌；酶活力；筛选 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称，是用于酿酒、食 品、医药、纺织、饲料等具有商业价值的重要酶类。目前，在 饲料行业由于芽孢杆菌对动物独特的生物学效应，对于高产 淀粉酶的芽胞杆菌在动物饲料上应用的研究取得一定进展。 配合饲料中含有淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、半纤维素、果胶 等多种营养成分，这些营养成分都是由生物多聚物组成，必 须依靠水解酶类将其酶解，才能被动物肠道吸收。在饲料中 起作用的淀粉酶主要是a-淀粉酶和糖化酶(葡萄糖淀粉酶)， a-淀粉酶是将大分子淀粉水解成中等和低分子物质，产生大 量新的非还原性末端，有利于糖化酶进一步水解，糖化酶则 将a-淀粉酶水解出的一些中、低分子产物，从非还原性末端 开始，逐次切下一个个能被动物直接吸收利用的葡萄糖。以 芽孢杆菌作为饲料添加剂，一方面芽孢杆菌产生淀粉酶促进 饲料中含淀粉营养成分的降解，充分被动物吸收利用；另一 方面芽孢杆菌进入消化道能提高内源酶的活性。尤其在动 物开始断奶时，因其体内淀粉酶等含最低，不能满足生长发 育的需求，若不及时补充淀粉酶等，则会造成消化不良，影响 生长发育。所以高产淀粉酶芽孢杆菌的选育已成为饲料行 业的一个新突破点。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1选育菌种。枯草芽孢杆菌(Bac／／l珊s出妇)6株，菌种 编号分别为Pl(伪l、踟Kol、PabOl、Pah02、Pah03、Patl)4；地衣芽 孢杆菌(Badll凇l记heniforrnis)l株，菌种编号为PsA06；蜡样芽孢杆菌(Bacil如删)2株，菌种编号分别为PsA38、PD帅423； 凝结芽孢杆菌(BaciU珊倒洳)l株，菌种编号为PSAFI。 作者简介唐丽江(19r78一)．女，四川成都人．硕士讲师，从事动物传 染病学和微生态制荆的开发与应用研究。 收稿日期2009．01．20 所有菌种均由四川农业大学生物医学工程实验室保存。 1．1．2培养基。淀粉培养基：可溶性淀粉1％、蛋白胨l％、 葡萄糖0．5％、Nacl 0．5％、牛肉膏0．5％、琼脂粉0．8％；种子 培养基：牛肉膏0．5％、蛋白胨l％、Naa 0．5％、可溶性淀粉 0．5％，pH值7．O；发酵培养基：玉米粉2％、黄豆饼粉1．5％、 caCl20．02％、MgS04 0．吆％、Nacl 0．25％、K2HP04 0．2％、柠檬 酸钠O．2％、硫酸氨0．cr75％(溶解后加)、Na2HP04 0．2％，pH 值7．O。 1．1．3主要试剂和溶液的配制。①O．1％葡萄糖溶液。称取 踟℃烘干至恒重的无水葡萄糖0．1 g，用去离子水溶解，定容 至100 rnl。00．1％标准麦芽糖溶液。称取100懈麦芽糖，用 蒸馏水溶解并定容至100 rnl。③1％3，5．二硝基水杨酸试剂。 称取1 g 3，5．二硝基水杨酸，溶于20“浓度2眦∥L氢氧化 钠溶液中，加入50 Tnl蒸馏水，再加入30 g四水酒石酸钾钠(c4H4僦·4H20)，待溶解后用蒸馏水定容至100 lTll，盖紧 瓶塞，勿使C02进入。④2％淀粉溶液。称取2 g淀粉溶于 100 rnl浓度0．1 n彬111l pH值5．6柠檬酸缓冲液中。 1．2方法 1．2．1芽孢杆菌淀粉酶活性测定。 1．2．1．1初选“-2j。将芽孢杆菌菌种活化，接种在营养肉汤 培养剂中，37℃培养12 h，芽孢杆菌液用滴种法接种在淀粉 培养基平皿上培养2～4 d，采用革兰氏碘液染色，在菌落周 围有透明圈产生证明芽孢杆菌产淀粉酶。用游标卡尺分别 测量透明圈直径和菌落直径，根据两者比值大小初步确定纤 维素酶活性的高低。 1．2．1．2复选。采用3，5．二硝基水杨酸显色法【3-5]。 (1)标准曲线的制作(表1)。①取19支20 rnl具塞刻度 试管，预先洁净灭菌干燥，编号，按表3加入试剂(每个浓度 做3个平行)。②摇匀，至沸水浴中煮沸5血n。取出后流水 万方数据 37卷12期唐丽江等高产淀粉酶芽孢杆茵菌株的筛选5363 冷却，加蒸馏水定容至20 rnl，以l号管作为空白调零点，在