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X0—风干样的含水率；
D—分取倍数，定容体积/分取体积，100/50。 （6）总磷的测定
样品采用硫酸和过氧化氢消煮，在一定浓度下，待测液中的磷酸根离子与偏钒酸和钼酸反应形成黄色三元杂多酸。在一定浓度范围（1mg/L-20mg/L），黄色溶液的吸光度与含磷量呈正比关系，用分光光度法定量磷。
（7）种子发芽率的测量
称取10g风干样品，按照样品：蒸馏水=1：10（m/V）进行浸提，振荡20min后过滤待用，用黄豆种子发芽率进行实验测量。具体方法如下：
在培养皿内铺入相应大小的滤纸一张，均匀地放入10粒颗粒饱满、大小接近的黄豆种子，用移液管吸取5.0ml堆肥浸提液于培养皿中，以蒸馏水作为对照，每个样品重复2次，置于25℃生化培养箱中培养24h，测量根长，以及种子的发芽率。计算公式如下：
= 发芽指数（GI）样品处理的发芽率?样品处理的平均根长?100%空白的发芽率?空白的平均根长
（8）纤维素酶活性的测定 滤纸酶活（FPA）测定方法： 葡萄糖标准曲线的绘制
基本原理：3，5-二硝基水杨酸与还原性糖在共热的条件下，被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的含量与反应液的浓度呈比例关系。在520nm处测得吸光度即得还原糖的量。
葡萄糖标准液的配制：葡萄糖110℃烘干2h，称取0.1080g溶解后定容至100ml。 3，5-二硝基水杨酸溶液（DNS）的配制：称取3，5-二硝基水杨酸6.3g于500ml烧杯中，用少量的蒸馏水溶解后加入2mol/L的NaOH溶液262ml，然后加入到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水中，再加入5g结晶酚和5g无水亚硫酸钠，冷却后定容至1000ml，贮于棕色瓶中保存。
分别吸取葡萄糖标准液溶液2、3、4、5、6、7、8ml定容至100ml。分别吸取1ml葡萄糖溶液于25ml试管中，加3ml二硝基水杨酸溶液。将试管放在沸水中加热5分钟，冷却后在分光光度计于波长520nm处测定。以OD520为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标，绘
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制标准曲线。
测定方法[19]：称取5g新鲜堆肥样品于50ml三角瓶中，加入浓度为1%的羟甲基纤维素溶液20ml，5mlpH=5.5的磷酸缓冲溶液，再加入1.5ml甲苯，在37℃的恒温培养箱中培养72h。过滤后取滤液1ml于25ml的试管中，加入3ml二硝基水杨酸溶液，然后置于沸水中加热5min，冷却。在分光光度计上设定波长为520nm，测定OD值。
酶活性（mg glucose/（g·d））=c*V/m
其中：c-在标准曲线上查出的葡萄糖浓度（mg/ml）； V-测定溶液的体积（ml）； m-样品的重量。 （9）红外光谱分析
红外光谱分析是利用红外光谱对物质的分子进行分析和鉴定的技术。它的工作原理是将一束特定波长的红外光照射到物质的分子上，属于该分子特定的波长将会被吸收，因此会形成该分子的特定的红外光谱。由于每种分子都有其特殊的机构，因此可以根据红外光谱对分子的结构进行分析。
本实验就是通过测定秸秆在堆肥前后红外光谱的变化，得出秸秆分子结构的变化。将待测样品用水冲洗干净，置于60℃干燥箱中烘干，然后磨成粉，过100目筛，然后通过VERTEX80红外光谱仪进行测定分析。
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3 结果分析与讨论
3.1 固态发酵实验的结果与分析
3.1.1固态试验含水率变化
分别在第0、1、2、3、6、8、11、15天取样，测定固态体系中秸秆粉的含水率，测定结果如图4。从图可以看出，在发酵过程中，随着堆料温度上升，各组含水率因大量蒸发而快速下降。物料的含水率影响堆肥温度的变化，在堆肥中起着一种“热量调节剂”作用进而影响堆肥微生物的活动，所有组合的含水率均呈现下降的趋势，在第11天之后趋于稳定，其中组3堆体水分下降最快，是因为组3所添菌剂作用于物料时其微生物活动比其他处理剧烈，产生大量热，蒸发作用增强，使堆体水分减少。
0.750.70固态发酵试验含水率变化0.650.600.550.500.450.400.350.300246810121416 空白 组1 组2 组3 组4时间/d图4固态发酵试验含水率变化
3.1.2固态试验总有机碳的变化
在堆肥过程中，堆体中的有机物质是微生物赖以生存和繁殖的重要因素，在高温下，有机物质被好氧微生物不断分解，因此，堆肥实际上也是一个有机碳含量减少的过程， 因
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此总有机碳的变化能在一定程度上反映出堆肥的进程。
分别在第0、4、8、12、16天取样，测定固态体系中秸秆粉的总有机碳含量，测定结果如图5所示。从图中可以看出，所有组合的有机碳变化均呈现下降的趋势，表现为组4>组3>组2>组1＞空白。表明微生物种类越多，堆体有机质含量降低越快。
400390固态发酵试验总有机碳变化/g/kg380370360350340330320310300290280270260024681012141618 空白 组1 组2 组3 组4时间/d图5 固态发酵试验总有机碳变化
3.1.3 固态试验总氮的变化
氮是构成蛋白质、核酸、氨基酸、酶等细胞生长必需物质的重要元素。堆肥过程中通过微生物作用可导致氮素的转化，并可决定最终堆肥产品的腐熟度。堆肥过程中氮素的转化与臭气、肥效和氮营养素损失有关。通常随着堆肥时间的延长，有机物质的分解，氮素有一定的损失，这主要是由于堆肥过程中有机氮的矿化、持续性氨的挥发以及硝态氮的可能反硝化造成。
分别在第0、4、8、16、20天取样，测定固态体系中秸秆粉的总氮含量，测定结果如图6所示。从图中可以看出，总氮的变化呈现先下降后上升的趋势，所有组合在堆肥后总氮含量增加。说明在堆肥过程中有机质不断分解成 CO2和H2O 而散失，总干物质的下降幅度远远大于 NH3挥发所引起的下降幅度，最终使得干物质中的总氮含量相对增加。通过显著性分析可知，组4和其他组相比差异显著或极显著，且其总氮含量较其他处理高，因此组4混合堆肥最佳。
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