发布时间 : 星期一 文章基因工程复习题及参考答案更新完毕开始阅读7d8f110b4a7302768e99397b
A．由两个亚基组成，仅识别半甲基化位点。甲基化位点相对于限制位点的位置（上游或下游）决定
了DNA 是被甲基化还是被限制
B．不同亚基的识别位点甲基化和限制活性相互排斥：MS 亚基促使甲基化，R 亚基促使限制
C．由两个亚基组成，在识别位点附近识别并进行甲基化或限制
D．在错配修复中起关键作用，因为酶结合到DNA 上是以结构扭曲为基础而不是序列错误识别
5．分析限制性内切核酸酶切割双链DNA 所得到的DNA 片段的长度有助于物理作图，这是因为( C )。
A．即使只用一种限制酶，因为DNA 是线性的，所以也可以迅速确定限制性片段序列 B．内切核酸酶在等距离位点切割DNA，同时对于每个生物体的长度是特异的 C、DNA 的线性意味着单限制酶切片段的长度之和等于DNA 的总长，而双酶切产生的重叠片段则产 生模糊的图谱
D．这些内切核酸酶的消化活性是物种特异的 E．这一技术同时为核苷酸序列提供了广泛信息
6、通过限制性片段分析，可以对等位基因进行精确的分析比较，其原因是( BD )。 A．限制性内切核酸酶只切割两个变异等位基因中的一个 B．它利用限制性位点作为遗传标记
C、一个特定细胞中等位基因的核苷酸序列不会是相同的 D．它不依赖于变异等位基因产物的功能
E．限制性内切核酸酶的切点被限制在DNA 的编码区域内 7、限制性片段长度多态性 (RFLP) 是( C )。 A．用于遗传的“指纹结构”模式分析的技术
B．二倍体细胞中的两个等位基因限制性图谱的差别 C．物种中的两个个体限制性图谱间的差别 D．两种物种个体间的限制性图谱差别
E．两种酶在单个染色体上限制性图谱的差别
8. 下面有关限制酶的叙述哪些是正确的？（ BCDE ） A. 限制酶是外切酶而不是内切酶
B. 限制酶在特异序列（识别位点）对DNA 进行切割 C. 同一种限制酶切割DNA 时留下的末端序列总是相同的
D. 一些限制酶在识别位点内稍有不同的位置切割双链DNA，产生黏末端 E．一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端
9．因研究噬菌体的限制与修饰现象的本质而获得诺贝尔奖的科学家是（ C ）。 A. Lederberg J B. Arber W C. Smith H D. Sanger F 10．第一个被分离的II 类酶是( C )。 A．Eco K B．Hind III C．Hind II D．EcoB
11．双链DNA 中一段自我互补的序列被称为回文序列，这种序列一般具有 ( ABC ) 特征。 A、有对称轴 B．两条链的5’→3’方向的序列相同 C．是Ⅱ类酶的识别序列 D．可增强基因的表达
12．在下列进行DNA 部分酶切的条件中，控制哪一项最好?( B )
A．反应时间 B．酶量
C．反应体积 D．酶反应的温度
13．在下列试剂中，哪一种可以螯合Ca2+？( D ) A．EDTA B．柠檬酸钠 C．SDS D．EGTA
14．BstB I (TT↓CGAA) 消化可产生怎样的末端? ( C )
A．含5'CGAA3'序列的黏末端 B．含5'CG3'序列的黏末端 C．含5'AAGC3'序列的黏末端 D．平末端 E．含5'GC3'序列的黏末端
15．限制性内切核酸酶可以特异性地识别( B )。
A．双链DNA 的特定碱基对 B．双链DNA 的特定碱基序列 C．特定的三联密码 D．以上都正确
16. 下面关于限制性核酸内切酶的表示方法中，正确的一项是（D ）。 A. Sau 3A I B. E.coR I C. hind III D. Sau3A I
17．限制性内切核酸酶的星号活性是指 ( A )。
A. 在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性 B．活性大大提高 C．切割速度大大加快 D．识别序列与原来的完全不同 18．下面哪一种不是产生星号活性的主要原因? ( D ) A．甘油含量过高 B．反应体系中含有有机溶剂
C．含有非Mg2+的二价阳离子 D．酶切反应时酶浓度过低
19. DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能？( A )
A．酶失活 B．蛋白质(如BSA)同DNA 结合 C．酶切条件不合适 D．有外切核酸酶污染
20．关于回文序列，下列各项中 ( ABC ) 是不正确的。
A．是限制性内切核酸酶的识别序列 B．是某些蛋白质的识别序列 C．是基因的旁侧序列 D．是高度重复序列
21．为什么使用限制性内切核酸酶对基因组DNA 进行部分酶切？( E ) A．为了产生平末端 B．为了产生黏末端
C．只切割一条链上的酶切位点，产生开环分子 D．可得到比完全酶切的片段略短的产物 E．可得到比完全酶切的片段略长的产物
22. BamH I、Xba I、Bgl II 的识别位点分别是：G↓GATCC、T↓CTAGA、A↓GATCT，哪些酶切结果
可产生互补的末端?( C )
A．以上几种酶切结果产生的末端都可互补 B．产生的末端都不能互补
C．仅BamH I 与BglII 的酶切末端互补 D．仅BamHI 与Xba I 的酶切末端互补 E．仅Xba I 与Bgl II 的酶切末端互补
23．从细菌中分离基因组DNA，经过识别GAATTC 序列的6 碱基酶长时间消化后，发现DNA 分子未
被切动，基因组大小为4Mb，造成该结果的原因是什么? ( C )
A．基因组中没有G B．基因组中没有A C．该细菌的DNA 已经过甲基化修饰
D．所有酶切位点都位于基因内，而该限制性内切核酸酶不作用于基因内
E．所有酶切位点都位于启动子及调控区内，而该限制性内切核酸酶只作用于基因内 24. 关于限制性内切核酸酶的来源及其天然存在的意义，下列哪种说法是正确的? ( D )
A．来自噬菌体，用于复制病毒DNA B．来自噬菌体，具有抗微生物作用 C．来自酵母菌，参与DNA 复制 D．来自细菌，有防御病毒侵染的意义 E．是细菌内的DNA 复制酶
25. 识别10 碱基序列的限制酶，大约每隔( A )进行一次切割。 A．4l0 B．104 C．2l0 D．102 E．24
三、判断题
1．限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA 的修饰和对自身DNA 的限制实现
的。错误，正相反
2．限制性内切核酸酶在DNA 中的识别／切割位点的二级／三级结构也影响酶切效率。一般来说，完
全切割质粒或病毒DNA，要比切割线状DNA 需要更多的酶，最高的需要20 倍。正确 3．如果限制性内切核酸酶的识别位点位于DNA 分子的末端，那么接近末端的程度也影响切割，如Hpa II 和Mbo I 要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。正确
4．能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。 正确
5．限制性图谱与限制性片段长度多态性 (RFLP) 图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者
是一个连锁图。正确
6．用限制性内切核酸酶Hae III 分别切割载体DNA 和供体DNA 后，可用E．coli DNA 连接酶进行连
接。错误，Hae III 产生平末端，此酶不能连接平末端
7．已知某一内切核酸酶在一环状DNA 上有三个切点，因此，用此酶切割该环状DNA，可得到三个片 段。正确
8．迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。错误 9．基因工程中使用的II 类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。错误，
II 型无甲基化活性
10．DNA 多态性就是限制性片段长度多态性。错误，RFLP 只是DNA 多态性一部分 11．甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，这是导致一些酶的星活性的主要原因之一，
防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5％以下。正确
12．具有EcoR II 末端的外源片段只能以一个方向插入到EcoR II 末端的载体中。正确，↓CCWGG， W=A 或T？
13．从Escherichia coli K 中分离的限制性内切核酸酶命名为E．coK。错误，EcoK 14．同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA, 得到的片段的两个末端都是相同的。错误，如果识别的不
是完整的回文序列，末端不同
15．在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制酶就不能切割
了。错误，甲基化不能被同一系统限制酶识别
16．稀有酶是指那些识别序列很长又不常用的限制性内切核酸酶。错误，指在某种事物基因组DNA 中
切割频率很低的酶
17．EGTA 是镁离子螯合剂，加入反应液后，可以抑制所有需要镁离子作为辅助因子的酶活性。错误，
是钙离子螯合剂，可抑制需钙离子作为辅助因子的酶活性，如Bal 31
四．问答题 （一）简答
1．现分离到ΦX82 噬菌体的—个突变型，它同野生型的噬菌斑相当不同，并已分离到这两 种噬菌体
的DNA。请设计一个实验，初步鉴定是点突变、插入突变还是缺失突变? 提示：用RFLP 方法。
2．说明Sanger DNA 测序法的原理。
答：Sanger DNA 测序法建立在两个基本原理之上：①核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’
端向3’端聚合；②可延伸的引物必须能提供游离的3’羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基
末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用四种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得四组长度不同
的DNA 片段。通过比较所有DNA 片段的长度可以得知核苷酸的序列。 3．在酶切反应缓冲液中加入BSA 的目的是什么？机制是什么？
答：目的是保护酶的活性，机制是通过提高溶液中蛋白质的浓度，防止酶的失活。 4．某学生在用EcoR I 切割外源DNA 片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因。 答：盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。 5．在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp 的II 类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的
序列可能是什么？
答：回文序列是5’-CATATG-3’。
6．下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II 类酶的识别序列：GAATCG、AAATTT、GATATC、