发布时间 : 星期四 文章基因工程复习题及参考答案更新完毕开始阅读7d8f110b4a7302768e99397b
去，
再进行连接反应。②DNA 和RNA 脱磷酸，然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。 6．切口平移法制备DNA 探针的原理是什么？
答：在Mg 离子存在时，用低浓度的DNA 酶I（DNase I）处理双链DNA，使之随机产生单链断
裂。然后用DNA 聚合酶I 的 5'→ 3'外切酶活性可以从断裂处的 5' 端除去一个核苷酸，而其聚合酶活
性则将一个单核苷酸添加到断裂处的 3' 端。随着反应的进行，即5' 端核苷酸不断去除，而 3' 端核
苷酸同时掺入，导致断裂形成的切口沿着DNA 链按合成的方向移动，这种现象称为切口平移。如果在
反应体系中加入放射性同位素标记的核苷酸，则这些标记的核苷酸将取代原来的核苷酸残基，产生带
标记的DNA 分子，用作DNA 分子杂交探针。
质粒及质粒载体
一、填空题
1、基因工程中有三种主要类型的载体： 质粒DNA 、 病毒DNA 、质粒和病毒DNA 杂合体 。 2．由于不同构型的DNA 插入EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同。 SC DNA
的泳动速度 最快 ，OC DNA 泳动速度 最慢 ，L DNA 居中，通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将
不同构型的DNA 分别开来。 3．就克隆一个基因 (DNA 片段)来说，最简单的质粒载体也必须包括三个部分： 复制子（含有复制起
点）、选择标记（主要是抗性基因）、克隆位点（便于外源DNA 插入）。另外，一个理想的质粒载体
必须具有低分子质量。
4．如果两个质粒不能稳定地共存于一个寄主细胞中，则属于同一个不亲和群，这是因为它们的复制机 制相同所致。
5．质粒拷贝数是指细胞中 质粒的份数同染色体的比值，即质粒／染色体 。
6．一个带有质粒的细菌在有EB 的培养液中培养一段时间后，一部分细胞中已测不出质粒，这种现象
叫质粒消除（或治愈）。
7．pBR322 是一种改造型的质粒，它的复制子来源于 pMB1 ，它的四环素抗性基因来自于 pSC101 ，
它的氨苄青霉素抗性基因来自于 pSE2124 (R 质粒) 。
8．YAC 的最大容载能力是 1000~2000kb ，BAC 载体的最大容载能力是 300kb 。 9．把那些没有可检测表型的质粒称为隐蔽性质粒。
10．pUCl8 质粒是目前使用较为广泛的载体。pUC 系列的载体是通过 pBR322 和 M13 两种质粒改造
而来。它的复制子来自 pMB1 ，Amp 抗性基因则是来自 转座子 。
11． Ti 质粒 是自然界存在的植物基因工程的天然载体。
12．既能在E．coli 又能在S．cerevisiae 中自我复制的载体DNA 称为 穿梭载体 。
二、选项题（单选或多选）
1．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( C )是不正确的。
A．质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，而不受染色体复制机制的制约，因而有较多的拷贝数
B．可以在氯霉素作用下进行扩增 C. 通常具有较少的拷贝数
D．同严紧型质粒整合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子
2．基因工程中所用的质粒载体大多是改造过的，真正的天然质粒载体很少，在下列载体中只有( B )
被视为用作基因工程载体的天然质粒载体。 A．pBR322 B．pSC101 C．pUB110 D．pUC18
3．下列哪种克隆载体对外源DNA 的容载量最大？ ( C )
A．质粒 B．黏粒 C．酵母人工染色体(YAC) D．λ噬菌体 E．cDNA 表达载体 4．松弛型质粒（ D ）。
A．在寄主细胞中拷贝数较多 B．可用氯霉素扩增 C．一般没有选择标记 D．上述A、B 两项正确
5．Col El 是惟一用作基因工程载体的自然质粒，这种质粒 ( ACD )。 A．是松弛复制型 B．具有四环素抗性 C．能被氯霉素扩增 D．能产生肠杆菌素
6．同一种质粒DNA，以三种不同的形式存在，电泳时它们的迁移速率是( B )。 A．OC DNA>SC DNA>L DNA B．SC DNA>L DNA>O CDNA C．L DNA>OC DNA>SCDNA D．SC DNA>OCDNA>LDNA 7．关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确? ( B )
A．在不同的宿主中具有不同的复制机制 B．在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点 C．在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶 D．在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率 8．Ti 质粒 ( ACDE )。
A．可从农杆菌转到植物细胞中 B．作为双链DNA 被转移
C．在植物中导致肿瘤 D．介导冠瘿碱的合成，作为细菌的营养物和植物的生长激素 E．需要细菌的vir 基因帮助转移 F．在植物细胞中作为染色体外质粒
9．下列哪些属于重组DNA 分子? ( C )
A．PCR 扩增的DNA 片段 B．单链RNA 与单链DNA 杂交得到的产物
C．人基因组片段与质粒载体连接的产物 D．存在于细菌细胞内的λ噬菌体染色体 E．质粒经限制性内切核酸酶酶切后的产物
10．LacZ 基因通常用于构建质粒载体的目的是什么?( E )
A．编码一种限制性内切核酸酶，在转化细胞时用于切割载体 B．编码蓝色色素产物，可用于示踪转化的细胞
C．编码一种酶，将RNA 转化为DNA D．编码一种抗生素抗性的酶
E．编码一种可检测的酶,当基因内部的位点插入任何外源片段，ORF 遭到破坏时，产物即不能表达
11．一个质粒含有四环素抗性基因( tetr )和LacZ 基因，tetr 内有一Hind III 位点，LacZ 中
有一Eco RI
位点。如用这两种切割载体一并连接入相应的外源片段，则带有该重组质粒的细胞将 ( D )。 A．有四环素抗性，在X-gal 平板上呈现蓝色 B．对四环素敏感，在X-gal 平板上呈现蓝色 C．有四环素抗陛，在X-gal 平板上呈现白色 D．对四环素敏感，在X-gal 平板上呈现白色 12．质粒具备下列特征，因此适合作为克隆载体，除了 ( E )。
A．赋予宿主细胞某种可检测的特性 B．可通过一定的纯化步骤与宿主细胞基因组分离 C．独立复制的能力 D．可复制自身DNA 以及插入的外源DNA E．甲基化防止宿主的限制性内切核酸酶对其降解 13．下列对质粒特性描述中，不正确的是 ( AC )。
A．既能以单链环状又能以双链环状的形式存在。 B．是独立于细菌染色体DNA 以外的复制子
C. 没有线性的质粒DNA D．能够自我复制
三、判断题
1．迄今发现的质粒DNA 都是环状的。错误。链霉菌属质粒为线状
2．一个带有反向重复序列的双链DNA 经变性后，复性时其单链可形成发夹环。正确 3．能够在不同的宿主细胞中复制的质粒叫穿梭质粒。正确
4．任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法，增加它的拷贝数。错误，对氯霉素抗性质粒不能 5．只有完整的复制子才能进行独立复制，一个失去了复制起点的复制子不能进行独立复制。正确
6．CsCl-EB 密度梯度离心法纯化SC DNA 的原理是根据EB 可以较多地插入到SC DNA 中，因而沉降
速度较快。错误，EB 插入SC DNA 量少，密度改变较小，离心后停留在较高部位密度小的地方
7．质粒ColE1 同pSC101 共整合后，得到的重组质粒pSC134，具有两个复制起始点，这两个起始点在
任何细胞中都是可以使用的。错误，一般使用ColE1 的复制起始点
8．所谓穿梭质粒载体是能够在两种以上的不同宿主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。正确
9．一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。错误，主要是独立存在 10．ColE1 是惟一用作基因工程的自然质粒载体，它具有四环素抗性标记，因而很容易选择。错误，
其无四环素抗性基因
11．某一染色体DNA 经内切酶Sal I 切割后，产生了若干个具有黏性末端的DNA 片段，将这些片段分
别在T4 DNA 连接酶的作用下自身连接成环，然后导入受体细 胞，这些片段都可以进行独立地复
制。错误，无复制子
12．基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。错误，对有剂量限制的基因克隆需用低拷贝质粒 载体
四、问答题
1．YAC 载体具有什么样的？为什么在克隆大片段时，YAC 具有优越性？ 答：（1）功能性DNA 序列:
①来自于酵母的125bp DNA 片段的着丝点序列 (CEN4)。
②来自酵母的自主复制序列 (ARS1)，起始在酵母中的DNA 复制。
③来自酵母的端粒序列，它是 (5-TGTGGGTGTGGTG-3) 的多拷贝重复，它对染色体的复制和维
持是必需的。
④在酵母中进行选择的标记基因，URA3（尿嘧啶生物合成基因）和TRP1（色氨酸合成基因）。寄
主是这些基因的营养缺陷性，只有带有这些基因的转化体才能在选择培养基上生活 ⑤具有细菌的复制起始点和选择标记基因。YAC 载体通常含有ColE1 的ori 和氨苄青霉素抗性标
记基因，可以在大肠杆菌中复制和繁殖，所以它也是一种穿梭载体。
（2）优越性：YAC 能够容纳长达上千kb 的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入
更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库
所需的克隆数目。
2．列举质粒载体必须具有的基本条件。 答：(1)能独立复制； (2)具有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不扩散。
3．举例说明什么是穿梭载体？
答：穿梭载体是含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA 片段的杂种质粒，有两个复制起点和能在两
种不同细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主 (来回穿梭)。 4．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全。进行严格地监控对质
粒载体的安全是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面?
答：(1) 非传递性和不被带动转移。对于多数基因克隆操作来说，都不希望载体能够进行自主传递，
也不希望被带动转移。
(2) 具有条件致死突变，如温度敏感质粒pJC307 (ColE1 的衍生质粒) 在哺乳动物正常体温下就丧
失复制能力，可防止克隆基因扩散，只存在于限定的宿主细胞中。
(3) 一般情况下不希望与宿主染色体发生重组，因为重组后有可能给宿主带来突变。 (4) 有较小的宿主范围。
5. 什么是YAC？YAC 克隆载体常出现哪些问题？
答：YAC 即酵母人工染色体（Yeast Artificial Chromosome）的缩写，是人工构建的染色体样大容
量克隆载体，基本组成有着丝点、能在细菌和酵母中进行复制的复制起始点和选择标记及端