发布时间 : 星期六 文章基因工程复习题及参考答案更新完毕开始阅读7d8f110b4a7302768e99397b
(3) 没有可供选择的标记；
(4) 野生型的λ噬菌体具有感染性，因此不够安全。 3．什么是蓝白斑筛选法?
4．λ噬菌体载体具有哪些优点与不足?
答：优点：(1) λ基因组中有1／3 的非必需区可以被置换。改造成载体后，克隆的片段较大(可 达
20kb)，而质粒载体的克隆片段只有几个kb；
(2) 用噬菌体λDNA 作为载体，即使不进行体外包装，转染的频率也比质粒转化的效率高，包装
后的效率就更高了；
(3) λ可通过溶原化反应整合到寄主染色体上，当不需要外源基因大量表达时，可让 它以溶原
性存在，若要表达，可通过诱导即可进入裂解途径，释放出大量的噬菌体，得到的重组DNA 的拷贝数 就会很多。
缺点：(1) 包装比较麻烦，包装率不稳定，购买包装蛋白的费用高； (2) 没有质粒的用途广泛。
5．以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体? 答：改造的置换型噬菌体载体，重组入外源片段之后，总体积不能超过入基因组的105％，不能小
于又基因组的75％。以置换型λ噬菌体DNA 作为载体，首先要分离左、右两臂同外源DNA 重组。如
果没有外源片段，仅是两臂连接，长度短于久基因组的75％，不能被包λ噬菌体颗粒，就不能感染寄
主，也就不能形成噬菌斑。如果插入了外源片段后，总长度超过λ基因组105％后，也不能包入噬菌体
颗粒，自然也不能形成噬菌斑。 6．M13 系列载体具有哪些优缺点? 答：M13 克隆系统具有很多优点：
(1) 克隆的片段大：M13 噬菌体的DNA 在包装时不受体积的限制，所以容载能力大。有报道，有
些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA 长6～7 倍的 DNA(插入片段可达40kb)。 (2)可直接产生单链DNA，这对于DNA 测序、DNA 诱变、制备特异的单链DNA 探针都是十分有 用的。
(3) 单链DNA 和双链DNA 都可以转染宿主，并可根据人工加上的选择标记进行筛选。 M13 克隆系列的不足：
(1) 较大的外源片段插入后，在扩增过程中往往不够稳定。一般说，克隆的片段越大，发生丢失的 概率越大。
(2) 单链载体分子感染的细胞中，往往是单链和双链混杂，分离双链比较麻烦。 7．黏粒载体具有哪些特点与不足? 答：主要特点有：
① 柯斯质粒是含有λ噬菌体 COS 位点的质粒载体。柯斯质粒具有质粒的复制子，进入寄
主细胞
后能够像质粒一样进行复制，并且能够被氯霉素扩增。
② 具有质粒载体的抗生素抗性基因的选择标记和克隆位点。
③ 插入片段的消化、连接及后来重组克隆的纯化与质粒载体相同。 ④ 具有λ噬菌体的包装和转导特性。与质粒载体转化细菌细胞不同，重组体像λ 载体一样，需体
外包装后转染细菌。
⑤ 包装后形成的 λ 颗粒用来感染大肠杆菌，重组DNA 像λ DNA 一样注入细菌细胞，并以COS 位点环化。由于缺乏λ 的其他DNA 序列，环化DNA 在细菌体内以质粒一样维持。
⑥ 简化了筛选。载体体积小，承载外源 DNA 片段大。如果载体的分子质量在5kb 的话，得到的
转导子几乎排除由载体自连的可能性，因为要被成功包装，至少要7 个分子的载体自连。尽管
如此，也是不能被包装的，因为COS 位点太多了。重组体只有达到32-45kb 才能有效包装体外
包装，这就提供了对重组体的正向选择。
⑦ 对转化体的选择是基于载体上的抗生素标记。 ⑧ 感染后形成菌落，而不是噬菌斑。 黏粒载体也有如下不足：
① 如果两个黏粒之间有同源序列，可能会发生重组，结果会使被克隆的片段重排或丢失。 ② 含不同重组 DNA 片段的菌落生长速度不同，会造成同一个平板上菌落大小不一。另外由于不
同大小的插入片段对宿主细胞的作用不同，会造成文库扩增量的比例失调。 ③ 包装过程复杂，包装效率不稳定，代价高。
核酸分离、纯化与测序、PCR 技术
一、填空题
1．SDS 是分离DNA 时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用： ① 溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂 ；
② 溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来 ； ③ 对RNase、DNase 有一定的抑制作用 ； ④ SDS 能够与蛋白质结合形成R-O-SO3
-?R+-蛋白质复合物，使蛋白质变性沉淀 。
2．酚是蛋白质变性剂，用酚抽提细胞DNA 时，具有两方面的作用：① 是蛋白质变性 ； ② 由于它能使蛋白质变性，故也能使核小体和核糖体解聚，释放出DNA 和RNA, 提高DNA 的得 率 。
3．用酚—氯仿抽提DNA 时，通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇。这是因为，异戊醇 是一种有
机溶剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产生 。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的
上层含
DNA 的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
4．同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶K 具有两个显著的优点：① 水解能力强，作用范围广 ； ② 在
SDS 和EDTA 中仍保持高活性，可以同SDS 和EDTA 同时使用 。
5．在分离DNA 时要使用金属离子螯合剂，如EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是 螯合Mg2+抑制核酸酶 的活性 。
6．用乙醇沉淀DNA 时，通常要在DNA 溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 和NaAc，其目的是 中和
DNA 分子的负电荷，增加DNA 分子间的凝聚力 。
7．通常可在三种温度下保存DNA：4~5℃、-20℃、-70℃，其中以 -70℃最好。
8．引物在基因工程中至少有四个方面的用途：① 合成探针 ；② 合成cDNA ； ③ 用于PCR 反应 ；
④ 进行序列分析 。
9．Clark 发现用Taq DNA 聚合酶得到的PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链
DNA 分子。根据这一发现设计了克隆PCR 产物的 T 载体 。
10．在用SDS 分离DNA 时，要注意SDS 的浓度，0．1％和1％的SDS 的作用效果是不同的，前者 只
将RNA 分离出来 ，后者 可将DNA 和RNA 一同分离出来 。
11．在DNA 分离过程中，通常要进行透析，其目的是 除去小分子的无机离子 。 12．在分离质粒DNA 的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处：① 可以扩增质粒DNA ； ② 抑制菌体数量，有利于裂解 。
13．在DNA 分离过程中造成DNA 分__________子断裂的因素很多，主要有：① 核酸酶降解 ；② 化学降解 ； ③ 物理剪切 。
14．在DNA 保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 抑制真菌污染 的作用。
15．按照人们的意愿，改变基因中碱基的组成，以达到 基因突变 的技术称为 定点突变 。 16．在cDNA 的合成中要用到S1 核酸酶，其作用是切除在 第二链合成时形成的发夹环 。 17．在简并引物的设计中，常常要用到dI (次黄嘌呤)，原因是 dI 可以同任何碱基相配 。 18．在分离DNA 时，要戴手套操作，原因是 手上常有核酸酶 。 19．乙醇沉淀DNA 的原理是 乙醇使DNA 分子脱水 。 20．简并引物PCR 主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 一组混合引物 来合成相应的基因。 21．超离心法纯化质粒DNA 时，选用CsCl 作介质的优点是：① CsCl 与不同DNA 嵌合的能力不同 ；
② CsCl 可以自动形成梯度密度 ，从而使不同分子质量的DNA 分子得以分开。 22．可以用 透析法 除去DNA 溶液中的氯化铯。
二、选择题(单选或多选)
1．从细胞或组织中分离DNA 时，常用蔗糖溶液，目的是 ( B )。 A．抑制核酸酶的活性 B．保护DNA，防止断裂 C．加速蛋白质变性 D．有利于细胞破碎
2．不是所有松弛型质粒都需要进行扩增的，如pBS、pUC 载体系统就不必进行氯霉素扩增，
这是因为
这些质粒的拷贝数很高，达到 ( D )。
A．30~50 B．100~200 C．300~400 D．500~700
3．有两种确定核酸中核苷酸序列的方法：化学序列分析法 (Maxam-Gilbert) 和酶学序列分析法
(Sanger)。酶学测序法的基本原理／优点是 ( B )。
A．碱基与特殊染料间不同的相互作用 B．一个合成引物的延伸和DNA 合成的可靠终止 C．限制性位点与DNA 末端标记的相关性 D．可同时对DNA 双螺旋的两条链进行测序 E．反应是DNA 特异的，RNA 不会带来干扰，既减少纯化步骤，也节约开支 4．CsCl-EB 密度梯度离心法纯化质粒DNA 的原理是 ( C )。
A．氯化铯可以较多地插入到线状DNA 中 B．氯化铯可以较多地插入到SC DNA 中 C．EB 可以较多地插入到线状DNA 中 D．EB 可以较多地插入到SC DNA 中 5．关于cDNA 的最正确的说法是( C )。
A．同mRNA 互补的单链DNA B．同mRNA 互补的双链DNA C. 以mRNA 为模板合成的双链DNA D．以上都正确
6．用碱法分离质粒DNA 时，染色体DNA 之所以可以被除去，是因为 ( C )。 A．染色体DNA 断成了碎片 B．染色体DNA 分子质量大，而不能释放 C．染色体变性后来不及复性 D．染色体未同蛋白质分开而沉淀 7．下面哪一种特性不是密码所具有的? ( C ) A．偏爱性 B．简并性 C．重叠性 D．连续性
8．用SDS-酚抽提DNA 时，SDS 的浓度是十分重要的，当SDS 的浓度为0．1％时， ( B )。 A．只能将DNA 抽提到水相 B．只能将RNA 抽提到水相
C．可将DNA、RNA 一起抽提到水相 D．DNA 和RNA 都不能进入水相 9．关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确? ( D ) A．溶液I 的作用是悬浮菌体 B．溶液II 的作用是使DNA 变性 C. 溶液III 的作用是使DNA 复性
D．质粒DNA 分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性 10．异戊醇的作用是 ( D )。
A．使蛋白质脱水 B．使DNA 脱水
C．帮助DNA 进入水相 D．减少气泡，促进分相
11．关于PCR 扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中，( B )不是主要原因。 A．底物(模板)过剩 B．dNTP 的大量消耗
C．产物的聚集 D．非特异性产物的竞争性抑制
12．Clark 做了一个有趣的实验，发现Taq DNA 聚合酶可以不需要模板在双链DNA 的末端加一个碱基， 主要是加 ( B )。
A．dGTP B．dATP C．dCTP D．dTTP 13．PCR 反应的必备条件是( B )。
A. 至少有100 个起始DNA 分子 B．拟扩增的目的DNA 片段的部分序列信息 C. 扩增需要cDNA 模板 D. 至少100kb 长度的模板 E. 未损坏、未降解的DNA 样品
14．哪项技术适于分离完整染色体长度级别的DNA 分子? ( E )