发布时间 : 星期四 文章微生物学实验更新完毕开始阅读7faca1d249649b6648d7472e
倒平板：将融化的琼脂培养基冷却至45℃左右，在酒精灯火焰旁，以右手的无名指及
小指夹持
棉塞，左手打开无菌培养皿的盖的一边，右手持三角瓶向平皿里注入10-15ml培养基。将培养皿稍加旋转
摇动后，置于水平位置待凝。
划线分离：在酒精灯火焰上灼烧接种环，待其冷却后，以无菌操作取一环分离菌液。划
线时，
琼脂平板可放在台面上也可以持在手中。左手握琼脂平板，在火焰上方稍抬起皿盖，右手持接种环伸入
皿内，在平板上第一个区域沿“Z”字形来回划线。划线时，使接种环与平板表面成30－40°角轻轻接触
，以腕力使接种环在琼脂表面作轻快地滑动，勿划破表面。灼烧接种环，待其冷却后，将手中平皿旋转
约70°角，用接种环在划过的第一区域接触一下，然后在第二区域进行划线，并依次对第三和第四区域
进行划线。划线完毕后，在平皿底用记号笔注明样品名称、日期、姓名（或学号），将整个平皿倒置放
入28－30℃恒温培养箱中培养。18－24小时后观察并记录单菌落的生长和分布情况。
②倾注平板法： 编号：取6支盛有4.5ml无菌水的试管排列于试管架上，依次标上10－1，10－2，10－3，10－4
，10－5，10－6字样。 稀释：以1ml无菌吸管按无菌操作从样品中吸取0.5ml菌液于10－1试管中，然后用另一吸管在10
－1试管中吹吸三次，使其混合均匀，制成10－1稀释液。再用此吸管从10－1管中吸取0.5ml稀释液注入
10－2管中，依次制成10－2，10－3，10－4，10－5，10－6稀释液。 加样：用1ml无菌吸管分别吸取10－4，10－5，10－6稀释液1ml注入已编好号的10－4，10－5，
10－6号无菌培养皿中。
倾注平板：将融化后冷至45℃左右的琼脂培养基，向加有稀释液的各培养皿中分别倒
入10－
15ml，迅速旋转培养皿，使培养基和稀释液充分混合，水平放置，待其凝固后，倒置于28－30℃恒温箱
中培养。18－24h后，观察并记录各平板上菌落生长和分布情况。哪个稀释度最合适？
③涂布平板法：
平板制备：制备三套无菌平板，并分别写上10－4，10－5，10－6。 稀释：同倾注平板法。
加样：用无菌吸管分别吸取10－4，10－5，10－6稀释液0.2ml对号注入编好号的琼脂
平板中。 涂布：用无菌棒在各平板表面进行均匀涂布。待涂布的菌液干后，将培养皿倒置于28－30℃恒
温培养箱中培养。18－24小时后观察并记录单菌落的生长和分布情况。 4. 实验作业
⑴为什么要把培养皿倒置培养？
⑵记录你所做的试验中各种微生物在斜面上的培养特征。 ⑶用各种方法接种时，怎样才能更好地保证菌种不被污染？ （4）描述三大类微生物的菌落特征、及微生物的种类。 （5）计算每g土壤各类微生物的数量。
实验8：微生物的生理生化特性反应 （大分子水解实验）（3学时） 1、目的要求
掌握细菌坚定中常用的生化反应及其原理。 2、基本原理
由于各种微生物的新陈代谢类型不同，因此对各种物质利用后所产生的代谢产物也不同，我们可以用化
学反应来测定微生物的代谢产物，这种反应称之为生理生化反应。生理生化反应常用来鉴别在形态或其
他方面不易区别的微生物。
3、材料及器材
⑴菌种：大肠杆菌、产气杆菌、变形杆菌。
⑵培养基：葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、淀粉水解培养基、明胶水解培养基。 2. 接种用具：接种环（针、钩），酒精灯，镊子，消毒棉球，打火机，标签贴纸，废物杯，一次性口
罩，纸巾，油性笔、水浴锅、厌氧罐、带帽试管、摇床、试管架
3. . 配置培养基的工具：1套
4、方法步骤：
明胶液化实验
（1）以穿刺接种法分别接种枯草杆菌和大肠杆菌于明胶培养基中。 （2）接种后置于20℃恒温培养箱，培养2-5d。
（3）观察结果时，注意培养基有无液化现象。（以“+”、“—”表示有无液化现象） 注意：
如果细菌在20℃时不能生长，则必须培养在所需的最适温度下，观察结果时需将试管从
恒温箱里取出，置于冰浴中，才能观察液化程度。
实验9: 理化因素对微生物的影响（3学时） 1. 目的要求
了解紫外线、化学试剂、抗生素的杀菌作用 2. 基本原理
各种外界因素如紫外线、化学试剂、抗生素对微生物的生长有抑制甚至杀灭作用。紫外线具有杀菌能力
，但穿透力不强。许多化学试剂能使蛋白质变性、妨碍代谢中某些重要酶的活力或损毁细胞膜等。抗生
素能选择性的妨碍细菌代谢过程中某一或几个环节。 3. 材料及器材
⑴菌种：大肠杆菌、葡萄球菌
⑵培养基：营养琼脂培养基 ⑶试剂：碘伏、过氧乙酸，、龙胆紫、84消毒液、青霉素、庆大霉素、HgCL2 ⑷其它：星形黑色亮光纸片、无菌滤纸片、镊子、无菌棉签、紫外灯、接种箱 4. 方法与步骤
⑴紫外线
①用棉签蘸取菌液致密接种于营养琼脂平板上。
②把镊子在火焰上迅速通过2－3次以杀灭其表面杂菌，镊取“H”形黑纸片贴于培养基的中央。
③打开平皿盖，至于紫外灯管下直接照射30min。
④揭去黑纸片，把纸片丢弃于消毒缸内。盖好皿盖，28－37℃培养18－24h后观察结果。可见到培养基上
出现与黑纸片形状相同的“H”形菌苔，其余部分没有细菌生长。 ⑵化学试剂
①用棉签蘸取菌液致密接种于营养琼脂平板上。
②用无菌镊子夹取4个圆形无菌滤纸片，分别浸于碘伏、过氧乙酸、龙胆紫、84消毒液内，再一一取出，
分别放在已接有细菌的平板上，各纸片间距离大小大致相等。
③28－37℃培养18－24h后观察各消毒纸片周围有无抑菌圈，并比较抑菌圈大小。 ⑶抗生素
①用棉签分别蘸取两种菌液接种于营养琼脂平板上，一个平板接种一种菌。
②用无菌镊子夹取2个圆形无菌滤纸片，分别浸于青霉素、庆大霉素内，再一一取出，分别放在已接有细
菌的平板上，各纸片间距离大小大致相等。
③28－37℃培养18－24h后观察结果，测量抑菌圈直径。 5. 实验作业
记录抑菌圈大小 青霉素 庆大霉素 大肠杆菌 葡萄球菌
实验10、水中细菌总数的测定
（3学时） 一、目的要求 ? ?
1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定方法 2、了解水源水的平板菌落计数原则
碘伏
过氧乙酸
龙胆紫 84消毒液
mm mm mm mm mm mm mm mm mm mm mm mm
二、基本原理
水中细菌种类繁多，一种培养基平板上细菌总数仅为一种近似值，一般采用肉膏蛋白胨琼脂培养基。
三、材料及器材
(3) 肉膏蛋白胨斜面培养基，
(4) 放大镜、、水采样器、计数器、涂布棒、接种环，接种针，无菌吸管，无菌平皿，电子秤、三
角瓶、、纱布、瓷盘、酒精灯、接种工具、打火机、、培养箱、灭菌锅、冰箱、超净工作台、等