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? 思考题： 一、名词解释：
1. PAS反应 2. Feulgen法
3. PAP法
4. 核酸探针 是指能与特定核酸序列发生特异性互补的已知标记的核酸片段，可检测
待测样品中特定的基因序列。
5. 核酸分子杂交 指具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基配对原则形
成双链的过程。
6. 质量控制 质量控制是指组织化学反应各环节中获得最佳效果的技术把握，是组织
化学的关键环节，是取得满意效果的必要条件，是提高结果可信度的根本保证。 7. 诱发荧光 8. 定量分析
9. 固定 为保持细胞和组织的原有形态结构，防止组织自溶，最大限度的保存细胞和
组织的抗原性，用固定剂对组织和细胞进行固定。
10. 组织化学 组织化学是对组织或细胞内的化学成分和活性进行定性、定位、定量研
究的学科 ，是一门方法学。 11. ABC法
12. 细胞骨架 指细胞内的机构网络，由一些细丝成分组成，包括微丝、微管、中间丝
和微梁网格。 ? 二、问答题
1. 简述酶组织化学的基本原理。
通过酶与底物反应，使原本无色的底物经显色剂作用后，显示出肉眼可见的各种颜色，以便于抗原分析和定位。
2. 用箭头表示免疫电镜技术（包埋前法）的过程。
1.取材→ →固定→ →冰冻切片（40~150μm） 2.免疫染色 3.电镜技术
3.简述核酸分子原位杂交组织化学 的过程。
1. 杂交前准备：取材和固定、玻片及盖片的处理、 器皿处理和溶液配制容器的处理、增加组织的通透性和核酸探针的穿透性、减低背景染色、防RNA酶污染 2. 杂交过程：包括变性（denaturation）与杂交（hybridization）。
3. 杂交后处理：去除未参加杂交体形成的过多的探针、去除探针与组织之间的非特异性杂交。
4. 显示系统：
4.组织化学质量控制有哪些方法？ 1.试剂的质量控制
2．操作步骤的质量控制 a.组织标本的质量控制 b.操作过程的质量控制 3.背景染色的控制
5.比较PAP法和ABC法的异同。 6.简述PAP法的过程 。
1.取材→ →固定→ →冰冻切片（40~150μm） 2.免疫染色 3.电镜技术
7.定量分析有哪些方法？ （一）人工定量分析： （二）仪器定量分析：
1. 显微荧光分光光度计： 2. 显微分光光度计/仪： 3. 显微图像分析仪：
灰度、长度、周边、面积、曲线长等
4. 流式细胞计数仪：(Flow Cytometry,FCM 8.增强组织化学染色的方法有哪些？ ①蛋白酶消化法：暴露抗原，增加细胞和组织通透性。 ②合适的抗体稀释液：确定稀释度的依据有以下三点 a. 抗体效价的高低。 b. 温育时间的长短。 c. 抗体的纯度。
d.稀释液的种类、标本制作等方面。 ③温育的时间长短 30~60℃ 4 ℃ 过液。 ④多层染色，提高敏感度。
9.简述结果的判断的类型及意义。
定性判断：也就是实验结果真实性判断。
定位判断：结果出现的部位，协助定性判断。 定量判断：其判断结果有助于统计学的分析处理。 10.简述核酸原位杂交技术的特点。 a.特异性、敏感性高。
b.可检测的靶序列在组织细胞内定位。
c.能够将组织学表现与基因功能的变化相结合。 d.可完好的保存组织、细胞的形态结构。
e.不需要从组织细胞中提取核酸,避免了抽提中核酸量的损失
f.对组织中含量极低的靶序列具有极高的敏感性，可在1%细胞中检出目的核酸序列。 g.可用于研究个别细胞中的核酸,而不受组织中其它细胞的影响。 h.不需破裂细胞,经适当处理后探针可进入细胞,与细胞内核酸杂交。
11.用箭头表示石蜡切片技术的步骤。
①取材→ → ②固定→ → ③脱水→ →④浸蜡、包埋→ → ⑤切片 12.简述免疫组织细胞化学技术的全过程。 1. 抗原提取和纯化 2. 免疫动物
3. 抗体的分离、提取、纯化和效价的确定 4. 标记抗体 5. 标本制备
6. 免疫反应过程
7. 观察及结果判断与分析
13.常见的免疫组织化学方法有哪些？
a.免疫荧光组织化学技术 b.免疫酶标组织化学技术 c.过氧化物酶—抗氧化物法（PAP法） d.抗生物素-生物素复合法（ABC法）e.SPA免疫组织化学技术 f.免疫电镜技术 14.影响核酸杂交的因素有哪些？ 1.核酸分子的浓度和长度 2. 温度
3. 离子强度
4.杂交液中的甲酰胺 5.核酸分子的复杂性 6.非特异性杂交反应
15.简述核酸分子原位杂交的基本原理。
核酸分子杂交是依据DNA双链碱基互补、变性和复性的原理，用已知碱基序列的单链核酸片段作为探针检测样品中是否存在与其互补的同源核酸序列的方法。 16.简述组织化学的基本要求。
a.保持组织细胞良好的形态结构。 b.具备高度的特异性。 c.应有一定的灵敏性。 d.可重复性。
f.生物反映的产物必须在原位沉淀、色深、不溶和具有稳定性的特点。 17.简述免疫组化在人体研究中的主要用途。
1. 免疫组化在肿瘤病理学的研究和诊断中的主要应用： （1）组织起源不明肿瘤的研究： （2）研究病原体与肿瘤的关系： （3）协助确定肿瘤的良恶性： （4）测定肿瘤细胞的增殖活性： （5）分化差的癌和肉瘤的鉴别： （6）确定转移性恶性肿瘤的原发灶： （7）恶性淋巴瘤的诊断和分型：
（8）为制定肿瘤的治疗方案提供依据：
2. 免疫组化技术在病原微生物的鉴定中的应用： 3. 免疫性皮肤疾病在诊断中的应用：
三、填空题
1. 影响酶催化反应的因素是( 酶浓度 ), ( 底物浓度 ) ,( 激活剂浓度) ,( 酶抑制剂影响 ), ( 温度 ) , ( PH值 )。
2.核酸杂交的一般步骤是(待测核酸的制备与变性 ) ,( 探针的制备及标记 ) , ( 固相支持物的选择与处理 ) ,( 预杂交、杂交、漂洗 ) 。
3.增强特异免疫染色的方法有( 蛋白酶消化法) ,(合适的抗体稀释度) ,(温育时间 ) ,( 多层染色法) 。
4. 常用的固定剂是 ( 醛类 ) ,( 非醛类 ) ,( 金属类 )。
5.核糖体是( 核酸 ) ,( 蛋白质 ) 组成。
6.抗体常用的标记物有( 荧光抗体) , ( 酶标记抗体 ) , ( 抗生物素-生物素-HRP ) , ( 金属 ) 。
7.根据探针的核酸性质分( 双链DNA探针 ) , ( cDNA探针) , ( RNA探针 ) , ( cRNA探针) 四类。
8.仪器定量分析技术有(显微荧光分光光度计) , (显微分光光度计) , (显微图像分析仪 ) , ( 流式细胞计数仪 ) , ( ) 。
9.组织化学的基本要求是(保持组织细胞良好的形态结构 ), (具备高度的特异性 ) ,( .应有一定的灵敏性 ) ,( 可重复性 ), (生物反映的产物必须在原位沉淀、色深、不溶和具有稳定性的特点) 。
10.石蜡切片的5大步骤是( 取材 ) ,( 固定 ) ,( 脱水 ) ( 包埋 ) ,( 切片 ) 。
11.组化中常用的酶类是( 辣根过氧化物酶（HRP）) ,( 小牛肠碱性磷酸酶 ) ,( 葡萄糖氧化酶 ) ,( β-半乳糖苷酶 ) 。
12. 固定基本原则是 (组织块要尽量小) ,( 固定要及时和适时) ,( 选择合适的固定剂), (要注意固定剂的浓度、PH值和温度) 。
13.固定方法是( 侵入法 ) ,( 灌注法 ) 。
14.免疫组织/细胞化学特点是( 高度特异性 ) , ( 高度敏感性 ) , ( 方法和过程统一 ) , (形态、机能、新陈代谢等生命活动相结合) 。 15.核酸原位杂交技术的特点是 (特异性、敏感性高 ) , (可检测的靶序列在组织细胞内定位 ) , ( 能够将组织学表现与基因功能的变化相结合 ) , (可完好的保存组织、细胞的形态结构 ) , (不需要从组织细胞中提取核酸,避免了抽提中核酸量的损失) , (对组织中含量极低的靶序列具有极高的敏感性，可在1%细胞中检出目的核酸序列 ) , (可用于研究个别细胞中的核酸,而不受组织中其它细胞的影响 ) , (不需破裂细胞,经适当处理后探针可进入细胞,与细胞内核酸杂交 ) 。 16.内质网分( 粗面内质网 ) , ( 滑面内质网 )两类 。
17.根据试剂或标记物的不同分( ) , ( ) , ( ) , ( ) 四类。 18.核糖体分( 游离核糖体 ) , ( 附着核糖体 ) , ( 多聚核糖体 ) 三类。 19.溶酶体分( 初级溶酶体 ) , ( 次级溶酶体 ) , ( 残余体 ) 三类。 20.细胞骨架是( 微丝 ) , ( 微管 ) , ( 中间丝 ) , ( 微梁网格 )组成。 21.确定最适PH的方法是( 查阅文献 ) , ( 实验测定PH ) 。
22.实验过程的质量控制是( 试剂的质量控制 ) , ( 操作过程的质量控制 ) , ( 背景染色的质量控制 ) 。
23.在酶组织化学中，根据其反应原则，显示酶的方法，可分为( 沉淀反应法 ) , ( 电子传递法 )两大类。
24.辣根过氧化物酶（HRP）显色原有( DAB ) , ( AEC ) , ( CN ) , ( H-Y试剂 ) 。
25.荧光组织化学分分为( 自发荧光 ) , (诱发荧光 )， ( 荧光染色 ) , (免疫荧光 ) , (酶促荧光 ) 。
26.荧光图象的记录方法有( 描述法 ) , ( 荧光照相 ) , ( 曝光时间测定法 ) , ( 强弱表示法 ) , ( 显微荧光测定法 ) 。
27.免疫反应的形成可分( 致敏阶段 ) , (反应阶段 ) , ( 效应阶段 )三个阶段。 28.PAP法的特点是( 稳定性高 ) , (特异性强 ) , ( 灵敏度高 ) 。
29.ABC 法的优点是( 敏感度高) , ( 特异性高) , ( 方法简单) , ( ABC试剂盒价位适中 ) , (生物素可多重染色) 。
30.免疫电镜技术的基本要求是( 保持超微结构完好 ) , (保存尽量多的抗原及抗原活性) 。
31.免疫电镜技术分(铁蛋白标记免疫电镜技术) , ( 酶标记免疫电镜技术) , (PAP法 ) , (胶体金免疫电镜技术 ) 四类。
32.胶体金免疫电镜技术优点是(金颗粒电子密度高，清晰可辩，形态规则 ) , (方法简单一些，不如PAP法复杂 ) , (同一组实验，可用不同直径的金颗粒可作多种抗原的区别研究，双标 ) , (金标抗体能发生二次电子，可作用扫描电镜观察) 。
33.免疫电镜技术包埋后法缺点是(抗原及活性损失 ) , ( 部位不准 ) , ( 得到阳性结果难度更大) 。
四、实验设计题
1. 某实验室拟采用ABC法研究缺血 性心肌损伤时ANP（ANF）的变化。请设计此课题。
(1) 准备哪些试剂和药品。
(2) 写出实验的思路或过程。
2. 某实验室拟采用PAP法研究缺血 性脑损伤时NPY的变化。请设计此课题。 (1) 准备哪些试剂和药品 (2) 写出实验的思路或过程。
3. 某实验室拟采用核酸原位杂交技术研究缺血 性脑损伤时SPmRNA的变化。请设计此课题。
(1) 准备哪些试剂和药品。 (2) 写出实验的思路或过程。
4. 某实验室拟采用免疫电镜技术（包埋前法）研究缺血 性脑损伤时NPY的变化。请设计此课题。
(1) 准备哪些试剂和药品。
(2) 写出实验的思路或过程。 终期考试 填空题(15): 名词解释(15): 问答题(30):
实验设计题(40) :