发布时间 : 星期六 文章基因工程原理与技术思考题更新完毕开始阅读84485e5127c52cc58bd63186bceb19e8b8f6ec3f
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名称 M13噬菌体载体 来源 M13mp1是构建的第一个M13噬菌体载体，随后构建的一系列M13载体都是在此基础上经改建派生出来的。 特点 可用来克隆具有不同限制末端的外源DNA片段，而且克隆片段插入方向是固定的。 用途 1.可以制备单链DNA进行DNA序列分析。2.可以制备只与外源DNA的任意一条链互补的DNA探针。3.可以在寡核苷酸介导的基因定点突变来制备含有目的基因的单链DNA模板。 可以克隆外源DNA分子比较大的。 黏粒载体（cosmid 先用特定的限制性核vector） 酸内切酶局部消化真核生物的DNA，产生出高相对分子质量的外源DNA片段，与经同样的限制性核酸内切酶切割过的黏粒载体线性DNA分子惊醒体外连接反应。 酵母人工染色体 由酵母的自主复制序列、着丝粒、四膜虫的端粒、以及酵母的选择性标记组成的能自我复制的酵母线性克隆载体。 1.具有λ噬菌体的体外包装、高效感染特性。2.具有质粒载体的易于克隆操作。3.具有高容量的克隆能力。4.具有与同源序列的智力进行重组的能力。 目前克隆最大DNA片段的载体。 目前克隆最大DNA片段的载体。 细菌人工染色体 以细菌F因子为基础除去了F因子的转移构建的细菌克隆载体。 去及整合区等非复制必须片段，并引入了多克隆位点及选择标记BAC克隆容量可以达到300kb. 可用于真核生物重要基因及全基因组物理作图、重要性状基因的图位克隆、基因结构及功能分析。
Chapter Ⅳ The technical principle of genetic manipulation 1) 简述提取基因组DNA的主要步骤和原理？
2) 分离纯化质粒的方法有哪几种？简述CsCl密度梯度分离法、碱变性法的原理，如何选择
合适的分离方法？
3) 简述提取RNA常用的两种方法和相关原理？ 4) 列举三种常用的核酸检测方法和基本原理？ 5) 简述琼脂糖-EB电泳法分离纯化DNA的基本原理？
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6) 名词解释：分子杂交、核酸杂交探针 7) 切口平移标记探针的主要步骤有哪些？
8) 简述Southern印迹杂交的基本原理及其主要步骤？ 9) 简述Northern印迹杂交的基本原理及其应用？ 10) 简述Western印迹的基本原理及其主要步骤？ 11) 简述Sanger碱基顺序分析法的基本原理？
12) 简述酵母双杂交技术的基本原理和在基因工程中的应用？ 13) 简述酵母单杂交技术的基本原理和操作过程？ 14) 什么是噬菌体展示技术？简述其基本操作过程？ 15) 什么是DNA迁移率变动试验？简述其基本原理？ 16) 什么是DNase I足迹实验？简述其基本原理？
Chapter Ⅴ Polymerase Chain Reaction Technology and Application 1) 什么是PCR技术？简述其基本原理？ 2) 简述PCR 反应体系的主要成分与反应流程？ 3) 简述PCR引物设计的目的和一般原则？ 4) 简述提高PCR反应特异性的因素和措施？
5) 什么是巢式PCR、降落PCR、反转录PCR？它们分别有哪些应用？ 6) 简述荧光定量PCR的基本原理？为什么在定量PCR中要引入Ct值的概念？
Chapter Ⅵ RNAi and miRNA regulation 1) 什么是RNA干扰技术？
2) 简述利用RNA干扰技术沉默基因的基本原理和一般操作流程？ 3) 什么是siRNA？如何选择siRNA靶位点？ 4) 简述获得siRNA的途径有哪些？
Chapter Ⅶ Obtaining of target gene
1) 目的基因克隆时常用哪些方法分离和获得基因？ 2) 什么是基因文库？简述构建基因文库常用的载体有哪些？ 3) 什么是基因组文库？ 简述构建基因组文库的一般步骤？
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4) 什么是cDNA文库？简述构建cDNA文库的主要步骤？
5) 目的基因与载体的连接方法有哪些？各有哪些优点？基因重组时在两个酶切位点中其
中有一个不相匹配时，你如何解决连接问题？
6) 如果目的基因的基因结构中有内含子存在，而且要采用原核表达系统，你应如何分离克
隆基因？
Chapter Ⅷ Recombination and gene transfer 1) cDNA克隆较之基因组克隆的优越性体现在哪里? 2) 试述T-A克隆法的原理和用途？ 3) 基因工程宿主菌必需具备哪些特性？
4) 名词解释：受体细胞、感受态细胞、转化、转染、转导 5) 简述将重组DNA导入原核细胞的方法有哪些？ 6) 简述将重组DNA导入真核细胞导的方法有哪些？ 7) 外源基因导入植物的方法？
8) Ti 质粒的结构特点？Ti 质粒介导植物基因转移的过程？
Chapter Ⅸ Screening and identification of recombinant clones 1) 如何从所克隆到的基因重组载体中鉴定目的基因的存在和正确性 2) 重组子的筛选与鉴定主要有哪些方法？ 3) 重组子的遗传学检测法主要包括哪两类？
4) 简述根据载体表型特征进行重组子筛选的常用方法及其基本原理？ 5) 如何利用抗性标记基因筛选阳性克隆？ 6) 名词解释：插入失活效应
7) LacZ 基因通常用于构建质粒载体的目的和原理？如何利用LacZ标记基因筛选阳性克
隆？
8) 报告基因检测法筛选重组子对报告基因有哪些基本要求?举例说明重用的报告基因有哪
几种？
Chapter Ⅹ Expression of cloning gene
1) 大肠杆菌作为基因工程受体菌有哪些优缺点？
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2) 实现真核基因在大肠杆菌表达系统的正确表达需要哪些基本条件？ 3) 名词解释：启动子、终止子、SD序列、包涵体 4) 蛋白质包含体复性的方法有哪些？
5) 可使外源基因在大肠杆菌中高水平表达的启动子应具备哪些条件？
6) 常用大肠杆菌表达载体有哪些？简述λPL启动子表达载体和T7噬菌体RNA聚合酶/启
动子表达载体的主要特征？
7) 原核表达系统常采用的启动子有哪些？ Lac、Tac、trp启动子各自有何特点？ 8) 在大肠杆菌中表达外源基因的表达载体需具备哪些条件？
9) 利用大肠杆菌进行外源蛋白质主要有哪几种表达部位？采用相应表达形式有何优缺
点？
10) 名词解释：融合基因、融合蛋白
11) 提高外源基因表达效率一般从那几个方面进行考虑？
12) 从提高转录启动效率及翻译起始效率角度考虑，可通过哪些措施构建高效率表达载体，
提高外源基因表达效率？
13) 避免外源基因表达蛋白被宿主细胞内源蛋白水解酶降解的主要措施有哪些？ 14) 简述大肠杆菌表达外源基因产物的检测方法有哪几种？
15) 与原核细菌相比，酿酒酵母做为外源基因表达受体菌有哪些优点？ 16) 酵母表达系统有哪些优缺点？
17) 酵母基因表达系统主要有哪些基本结构？常采用的选择标记基因有哪些？ 18) 简述酵母表达载体的种类和主要特征？ 19) 甲醇酵母表达系统的主要特点？ 20) 酵母DNA转化的方法有哪几种？
21) 酵母菌的蛋白修饰分泌系统有哪些功能？对外源基因的蛋白表达有何作用？
根据课堂讨论题目扩增思考题目
1) 基因芯片技术的概念、原理和主要的应用？ 2) 基因治疗的概念与策略？基因治疗的基本程序？
3) 转基因动物的概念，显微注射法制备转基因动物的主要过程 4) 何谓动物克隆技术？有何应用价值？ 5) 转基因植物有哪些应用价值？
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