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试验方法标准操作规程
编号 生效日期 编写/修订 QAU确认
一、 目的：使本实验室试验方法的标准操作有章可循。 二、 关键词：试验方法
三、 适用范围：实验室内所有环境行为试验、环境毒理试验的方法、操作步骤。 四、 内容： 1.环境行为试验 1.1土壤降解试验 （1）试验目的
土壤降解指在土壤中残留农药逐渐由大分子分解成小分子，直至失去毒性和生物活性的全过程，农药在土壤中的降解特性是评价农药对整个生态环境影响的一个重要指标，农药在土壤中的降解速率通常用降解半衰期t0.5表示。 （2）试验材料
供试土壤：采集3种有代表性的新鲜农田耕层土壤，经风干、过2mm筛，贮于5℃冰箱内备用，并测定土壤pH、有机质、阳离子代换量和机械组成。
供试农药：将农药纯品（或原药）溶于水中，难溶于水的农药，可用少量对农药降解无干扰影响的有机溶剂助溶(如乙醇、丙酮等)，加量不超过1%。
主要仪器设备：培养箱、气相色谱、液相色谱等分析仪器。 （3）试验方法
称20g土壤于三角瓶中，先加入一定量的农药拌匀后，加水将土壤含水量调节到田间持水量的60%，塞上棉塞，不同土壤均重复处理10份样品，置于25?1℃黑暗的恒温箱中培养，定期取样，分别测定土壤中农药残留量，至土壤中农药的降解率达90%以上时终止。培养过程中及时调节三角瓶内水分含量，以保持原有持水状态。用于水田的农药，须增加渍水条件下的降解试验，即在上述试验处理基础上，三角瓶中的持水量加大到土壤表面有1cm水层，其它条件相同。
HZSHJ-SOP-B-002-0101 替代 发布日期 审核 批准 （4）数据处理
试验结果采用指数回归方程，求农药在土壤中的降解半衰期，最常用的计算公式如下：
Ct=C0e t0.5?Ln2
k-k t
C0：土壤中农药初始浓度(mg/kg) Ct：t时土壤中农药残留浓度(mg/kg) k：降解速率常数 t：培养时间
t0.5：降解半衰期 （5）质量要求
① 土壤中农药残留量分析方法回收率为70~110%，最低检测浓度满足检测要求。
② 初始浓度1~10mg/kg。
③ 降解动态曲线至少7个点，其中5个点浓度为初始浓度的20~70%。 ④ 试验时间至农药降解率90%以上；对难降解农药，试验时间至少180天。 （6）评价标准
根据农药在土壤中降解(或消解)半衰期的长短，及其可能对生态环境造成的影响，将农药在土壤中的残留性划分成五个等级，见表1。
表1 农药在土壤中的残留性等级划分
等级 I II III IV V
（7）试验报告
试验报告须包括下列内容：
① 供试农药：通用名、化学名称、结构式、CAS号、纯度、基本理化性质。 ② 供试土壤：pH、有机质含量、阳离子代换量、机械组成。
半衰期t 0.5(月) <1 1~3 3~6 6~12 >12
降解性 易降解 较易降解 中等降解 较难降解 难降解
③ 主要仪器设备：培养箱、分析仪器等。
④ 试验条件：温度、持水量、初始浓度、取样时间。
⑤ 土壤中农药残留量分析：样品前处理、测定条件、线性范围、添加回收率、相对标准偏差、最小检测量、谱图等。
⑥ 试验结果：降解曲线、半衰期、相关系数及土壤降解性评价。 1.2水解 （1）试验目的
水解是指物质在水中引起的化学分解现象，是农药非生物降解的主要形式之一。农药的水解速率，通常用水解半衰期t0.5表示。 （2）试验材料
供试农药：采用农药纯品（或原药）溶于水中，难溶于水的农药，可加少量对农药降解无干扰影响的有机溶剂助溶(如乙醇、乙腈和丙酮等)，加量不超过1%（V/V）。
主要仪器设备：培养箱、pH计、灭菌锅、气相色谱、液相色谱等分析仪器。 不同酸碱度的缓冲溶液：
pH5.0：500 mL 0.10 mol/L 苯二甲酸氢钾溶液加239 mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液，再加蒸馏水定容至1000mL。
pH7.0：500 mL 0.10 mol/L 磷酸二氢钾溶液加296 mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液，再加蒸馏水定容至1000mL。
pH9.0：500 mL 1?1的 0.10 mol/L 硼砂与0.10 mol/L氯化钾溶液中，加 213mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液，再加蒸馏水定容至1000mL。 （3）试验方法
① 预试验
分别用pH 5.0、7.0和9.0的缓冲溶液配制浓度 ? 0.01mol/L或50%饱和浓度的农药水溶液于具塞三角瓶中，难溶于水的农药助溶剂加量不超过1%。置于50?1℃恒温条件下培养5d测定农药含量，如水解率小于10%，可认为该农药具有化学稳定性，无须进一步做水解试验；如水解率大于等于10%，则须进一步进行25℃与50℃时的水解试验。
② 正式试验
配制2组pH 5.0、7.0和9.0的农药水溶液系列，分别置于25?1℃及50?1℃的培养箱中，从开始培养起，定期采集水样7次以上，测定水样中农药含量，确定其水解动态，至水解率达90%以上终止。
上述缓冲溶液与供水解试验用的容器均须经高温高压灭菌。灭菌后的溶液需重新校正pH，整个试验过程中须避光及避免氧化作用等的影响。 （4）数据处理
大多数农药的水解规律遵循一级动力学方程，试验结果可按下列公式求得水解半衰期t0.5。
Ct=C0e t0.5?C0：农药的起始浓度(mg/L) Ct：t时的农药浓度(mg/L) k：水解速率常数 t：反应时间 t0.5：水解半衰期 （5）质量要求
① 水中农药残留量测定方法回收率为70~110%，最低检测浓度满足检测要求。
② 试验温度误差要求?1℃。
③ 降解动态曲线至少7个点，其中5点浓度值为初始浓度的20~70%。 （6）评价标准
根据农药水解半衰期的大小，及其可能对生态环境造成的影响，将农药的水解特性划分成五个等级（表2）。
表2 农药水解特性等级划分
等级 I II III IV V
半衰期t 0.5(月) <1 1~3 3~6 6~12 >12
降解性 易水解 较易水解 中等水解 较难水解 难水解
-k t
Ln2 k