发布时间 : 星期五 文章临床微生物实验室细菌鉴定指南更新完毕开始阅读88ef51e7a66e58fafab069dc5022aaea988f4141
c． PH9.6肉汤实验：变浑浊为能在碱性环境中生长（阳性）。
d． 6.5%NaCl心浸液肉汤：由紫变黄为能在高盐环境中生长（阳性）。 e． 精氨酸双水解酶实验：变红色（对照不变色，仍为黄色）为阳
性。
五．奈瑟氏菌属和布兰汉菌属
奈瑟氏菌属主要有脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌；布兰汉氏菌属只有卡
他布兰汉氏菌。两者系需氧革兰阴性球菌。
⑴ 奈瑟氏菌的生物学特性：革兰阴性球菌，需氧，卵圆形或肾形，无动
力，氧化酶及触酶均阳性。培养时对营养要求高，能在巧克力平板或
有丰富营养的血平板上，在5～10%CO2环境中生长。
⑵．鉴定过程：
a． DNA酶实验阳性为布兰汉氏菌，阴性则为奈瑟氏菌。 b． 能在普通血平板上生长的为其他奈瑟氏菌，在巧克力平板上生长
的主要为脑膜炎奈瑟氏菌和淋病奈瑟氏菌。
c． 能使麦芽糖氧化分解产酸的是脑膜炎奈瑟氏菌，不利用麦芽糖的
是淋病奈瑟氏菌。
⑶．几种主要细菌对葡萄糖﹑麦芽糖﹑蔗糖的氧化分解产酸结果如下：
氧化分解产酸
菌种 葡萄糖 麦芽糖 蔗糖 淋病奈瑟氏菌 ＋ － － 脑膜炎奈瑟氏菌 ＋ ＋ － 粘液奈瑟氏菌 ＋ ＋ ＋ 卡他布兰汉菌 － － －
⑷ DNA酶实验：
a． 方法：将待鉴定细菌点种于含0.2%DNA的DNA琼脂平板上，培
养后用1mmol/LHCl覆盖平板，菌落周围出现透明环者为阳性。 b． 原理：某些细菌能产生DNA酶，可使DNA长链水解成由几个单
核苷酸组成的寡核苷酸链；长链DNA可被酸沉淀，而水解后形成后的寡核苷酸链则可溶于酸，故在DNA琼脂平板加盐酸，可在菌
落周围形成透明的溶血环。（肠杆菌科中只有沙雷氏菌和变形杆菌可产生DNA酶，阳性球菌中只有金葡菌能产生DNA酶。）
六．肠杆菌科
肠杆菌科是一大群生物学性状相似的革兰阴性杆菌，其中对人致病性较强的鼠疫耶尔森菌（现已基本没有流行）和伤寒沙门菌；4类常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希氏菌﹑志贺氏菌﹑沙门氏菌﹑耶尔森氏菌）和8种常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属﹑克雷伯菌属﹑肠杆菌属﹑多源菌属﹑沙雷菌属﹑变形
杆菌属﹑普罗威登菌属和摩根菌属）。另外还有很多细菌是肠道的正常菌群，但在一定条件下也可致病（条件致病菌）。
实验过程中对于革兰阴性杆菌首先要做氧化酶实验，阴性为肠杆菌科细菌；阳性的为非发酵菌（我们实验室还没有简单的系统鉴定方法，一般要仪器上卡检
测）或弧菌科细菌。
1． 肠杆菌科的系统生化 ⑴．KIA试验（克氏双糖铁）
组成：乳糖／葡萄糖=10／1（斜面／高层，其长度最好是都是2C
M）
结果判断：斜面或高层变黄色：阳性；不变色（红色）：阴性
高层中出现裂隙：产气阳性
高层中出现黑色（FeS）：产H2S阳性
⑵．苯丙氨酸脱羧酶试验
细菌产生的苯丙氨酸脱羧酶使苯丙氨酸氧化脱羧后生成苯丙酮酸，再与10%的FeCl3试剂产成深绿色反应。（变形杆菌属﹑普罗威登
菌属和摩根菌属为阳性，其他为阴性） ⑶．枸橼酸盐试验（碳源利用实验）
在枸橼酸盐培养基中细菌能利用的碳源只有枸橼酸盐，分解后生成碳酸钠，使培养基变碱性，pH指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿色变为深兰色，即为枸橼酸盐试验阳性。（埃希氏菌属，志贺氏菌属，爱德华菌属为阴性，其他为阳性）
注意：接种时不能被糖，蛋白胨污染，要单独接种）
⑷．甲基红（MR）试验
细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸等，使培养基的pH下降至4.5以下时，加入甲基红指
示剂由桔黄色变桔红色为弱阳性；变红色为阳性。
培养基成分：葡萄糖蛋白胨水
试剂：甲基红0.1g，酒精300ml，水200ml
主要用于大肠埃希菌（＋）和产气肠杆菌（－）的鉴别；常与V-P实验联合使用，一般情况下两者结果正好相反，但也有例外如奇变两者同为阳性。
⑸．MIU（动力－靛基质－尿素）试验
①．动力：在半固体培养基中穿刺接种细菌培养后，若穿刺线周围
有细菌扩散生长，则为动力（＋）；清晰则为动力（－）。 ②．靛基质试验（吲哚试验）：某些细菌有色氨酸酶，能分解培养
基中的色氨酸生成吲哚。吲哚再与试剂对位二氨基苯甲醛作用
形成玫瑰吲哚而呈红色。
③．尿素试验：某些细菌能产生尿素酶，分解尿素产生大量的氨，使培养基变碱，再使培养基中的指示剂（0.4%酚红）变红色即
为阳性。
⑹．硝酸盐还原试验
NO3ˉ→→NO2ˉ（大肠）
NO3ˉ→→NH4＋
NO3ˉ→→N2（沙雷氏菌属） 试剂甲：对氨基苯磺酸
试剂乙：α-萘胺
观察结果时甲液和乙液要等量加入，立即或10min内出现红色为阳性。若不变色，则要加入锌粉：①变红色，说明硝还试验为真阴性
②仍不变色，说明硝还试验真阳性，但原先还原产物不是NO2ˉ。 阴性结果出现时有三种可能：①细菌不能还原硝酸盐②亚硝酸盐继
续分解生成氨或氮③培养基不适合细菌生长 肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐。
⑺．氨基酸脱羧试验
细菌产生脱羧酶分解氨基酸使其脱羧生成胺和CO2，虽然各种细菌所产生的脱羧
酶不一定相同，但最后都能生成胺（赖氨酸→尸胺，鸟氨酸→腐胺，精氨酸→精胺）和CO2。然后胺能使培养基变碱性，通过指示剂（溴甲酚紫）由黄变紫即为阳性。对照管（无氨基酸）为黄色。 注意：①微量管接种好后要加石蜡，使培养基造成厌氧环境。（生成的胺更稳定，
还能诱导氨基酸脱羧酶的产生）
②对照管如果不显黄色，则结果不能判断。
应用：除伤寒沙门氏菌，鸡沙门氏菌外，其他沙门氏菌鸟AA，赖AA均为阳性；
除宋氏和鲍氏志贺菌外其他志贺菌也菌为阳性。
⑻．葡萄糖酸盐试验
微量管在培养18～24h后，加班氏试剂，水浴煮沸10min，由兰色变黄绿色到砖
红色即为阳性，不变为阴性。
1． 肠杆菌的鉴定流程
⑴．根据苯丙氨酸脱羧酶实验：
（＋）：变形杆菌属，普罗威登斯菌属，摩根氏菌属
（－）：埃希氏菌属，志贺氏菌属，沙门氏菌属，枸橼酸杆菌属，爱德
华菌属；克雷伯菌属，肠杆菌属，沙雷氏菌属，哈夫尼亚菌
属。
⑵．苯丙氨酸脱羧酶实验阴性，加做葡萄糖酸盐实验
（＋）：克雷伯菌属，肠杆菌属，沙雷氏菌属，哈夫尼亚菌属
a． 动力（－）：克雷伯菌属，属内种的鉴定主要根据吲哚试验（肺克吲哚实验阴性，三个亚种鉴别试验IMViC：肺炎－－＋＋，臭鼻－＋－d，鼻硬结－＋－－） b． 动力（＋），DNA酶（＋）：沙雷氏菌属 动力（＋），DNA酶（－），枸橼酸盐（＋）：肠杆菌属（主要是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌，前者赖氨酸阴性，而后中为阳性） 动力（＋），DNA酶（－），枸橼酸盐（－）：哈夫尼亚菌属 （－）：加做IMViC（靛基质-甲基红-VP-枸橼酸盐）试验 a． IMViC（＋＋－－）：大肠埃希菌（H2S－）或爱德华菌属（H2S＋）。 b． IMViC（－／＋＋－＋）：枸橼酸杆菌属 ⑶．苯丙氨酸脱羧酶实验阳性，根据产H2S可分 （＋）：变形杆菌属 属内主要鉴定试验如下 普变 奇变 产粘变 潘尼氏 尿素酶 ＋ ＋ ＋ ＋ 鸟氨酸 － ＋ － － 靛基质 ＋ － － － 麦芽糖 － － ＋ ＋ 木 糖 ＋ ＋ － ＋
（－）：普罗威登氏菌属，摩根氏菌属
普罗威登氏菌属：鸟氨酸：－；枸橼酸盐：＋（属内鉴定尿素酶
及一些碳水化合物的产酸试验，如甘露醇﹑阿拉伯糖﹑
海藻糖等）
摩根氏菌属：鸟氨酸：＋；枸橼酸盐：－（只有一个种：摩氏摩
根氏菌）
⑷．志贺氏菌属和沙门氏菌属 这两种菌属在肠道选择性培养基（SS、麦康凯）形成不发酵乳糖的透明或半透明的无色菌落，但一些沙门氏能产H2S就会形成中心黑色的菌落，鉴定时在选择性培养基上挑选可疑菌落进行鉴定。
a．志贺氏菌属
主要系统生化：KIA：K/A（只有福氏6型能产气），H2S（－）；
MIU：－+/-－；
苯丙：－；枸橼酸盐：－。