发布时间 : 星期三 文章植物根系PI染色方法更新完毕开始阅读945c7ea070fe910ef12d2af90242a8956becaa06
水稻幼苗根尖PI染色
一、原理
PI：英文名：Propidium iodide 中文名：碘化丙啶 染色原理：碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶（EB）的类似物。 PI在540nm波长（绿色光）的激发下，会在600nm（红色光）处发出明亮的荧光。PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。它能与细胞壁上的碳水化合物共价结合，对细胞壁进行标记。
Standard confocal laser microscopy was performed using a Leica SP5laser point scanning microscope. propidium iodide was excited using the 488 nm argon laser, and fluorescence emissions were captured between 580 nm and 640 nm for propidium iodide.
二、染色过程
1 固定：材料置于固定液（50%甲醇+10%醋酸）中，4℃放置至少12h (最长可放置1个月)
2 用水清洗材料，置于1%高碘酸溶液中，室温放置40min。（使细胞壁上的碳水化合物形成醛基）
3 用水清洗材料，置于希夫试剂（含PI）1-2h或直至肉眼可见材料染上红色为止（醛基与PI共价结合）
希夫试剂(含PI)：焦亚硫酸 100mM HCl 0.15N
PI 100μg/ml（现加）
4 取出样品置于载玻片上，用水合氯醛溶液覆盖样品，室温放置过夜（置于密闭容器中，防止溶液挥发）
水合氯醛溶液： 水合氯醛 4g 甘油 1ml H2O 2ml
5 除去多余水合氯醛溶液，滴数滴Hoyer’s solution，盖上盖玻片，放置3天后显微镜下观察。
Hoyer’s solution： 水溶性阿拉伯胶 30g 水合氯醛 200g 甘油 20g H2O 50ml 三、注意事项：
（1）由于PI可能具有致癌性，请小心操作。 （2）保存条件：4℃避光保存
（3）对人体有刺激性，请注意适当防护