发布时间 : 星期日 文章深圳市人类间充质干细胞库建设与管理规范更新完毕开始阅读9a5dd4db16fc700aba68fc44
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7.3.11 人类滑膜来源间充质干细胞分离与原代培养
人类滑膜组织样本，以酶消化法分离滑膜间充质干细胞。离心洗涤后，贴壁法培养。定期更换培养基直到贴壁生长的成纤维细胞样的细胞达到汇合。 7.4 换液
为了保证细胞所处环境的稳定，需进行换液操作，并在符合GMP要求基础上严格执行，并有严格的质量控制，需有明确的细胞鉴别特征，无外源微生物污染。 7.5 传代
根据原代细胞融合度，判断是否可以进行传代操作，传代操作应即时、迅速、密度适宜，并在符合GMP要求基础上严格执行，并有严格的质量控制，需有明确的细胞鉴别特征，无外源微生物污染。 7.6 冻存
细胞数目达到冻存要求的细胞系，可进行冻存操作。冻存细胞需加入适当的冷冻保护液，遵循程序降温的原则，并在符合GMP要求基础上严格执行，有严格的质量控制，需有明确的细胞鉴别特征，无外源微生物污染。 7.7 入库
将冻存好的细胞移至液氮罐中（温度为-196～-135 ℃）长期储存。并有严格的过程控
制及完整的的信息录入、档案填写。 7.8 细胞复苏
7.8.1 自液氮或干冰容器中取出冻存管，检查盖子是否旋紧。
7.8.2 将冻存管立即投入37 ℃水浴锅中，轻摇冻存管使其在1分钟内全部融化，以75%酒精擦拭保存管外部，移入无菌操作台内。
7.8.3 取出细胞悬液，将解冻的细胞悬液加入含有培养基的离心管内，离心洗涤2～3次，加入新鲜培养基重选细胞，混合均匀，转移至培养瓶，放入CO2 培养箱培养。 7.9 细胞出库 7.9.1 总则
人类间充质干细胞在需要使用、转移或销毁时，可执行细胞出库。执行细胞出库前应先向伦理审查委员会和科学审查委员会提出申请，通过审核后方可进行。人类间充质干细胞库应建立人类间充质干细胞使用、转移和销毁的标准操作规程。 7.9.2 细胞使用出库
7.9.2.1 临床治疗需使用细胞库内细胞时，实验室出库负责人员需核对库存细胞信息和细胞使用者信息，制定严格的细胞发放计划，由实验室出库负责人员填写能够记录细胞储存位置变更的相关文件后，由质控人员监督从液氮罐中取出需要的细胞进行使用。
7.9.2.2 科研性使用库内细胞时，需保证细胞供者在充分知情并签订知情同意书的情况下完成细胞出库，由实验室出库负责人员填写能够记录细胞储存位置变更的相关文件后，由质控人员监督从液氮罐中取出需要的细胞进行使用。
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7.9.2.3 其他情况有需要使用细胞库内细胞时（如定期检测细胞活力等），由实验室出库负责人员填写能够记录细胞储存位置变更的相关文件后，由质控人员监督从液氮罐中取出需要的细胞进行使用。 7.9.3 细胞转移出库
7.9.3.1 人类间充质干细胞库内部因整改、扩容或评估冻存干细胞质量等情况而需要进行干细胞转移时，按照具体的干细胞转移操作规范进行转移操作。
7.9.3.2 干细胞转移操作所用的时间应在规定时限内，确保干细胞及其冻存容器的温度在-135 ℃以下。
7.9.3.3 转移过程要做好相应记录。 7.9.4 细胞销毁出库
7.9.4.1 储存时限一般应超过20年。
7.9.4.2 当样本提供者提出反悔意见，撤销知情同意书，要求销毁所提供的样本时，应遵从样本提供者的意见将样本销毁，并将样本提供者相关信息和数据从信息系统中清除。 7.9.4.3 样本的销毁应首先提出销毁申请，通过伦理审查委员会和科学审查委员会的审核后方可进行，人类间充质干细胞库应建立销毁的标准操作规范，并按照此规范操作。 7.9.4.4 应对样本的销毁进行记录，包括销毁的原因、批准和执行销毁的日期、销毁的操作人员等。 8 安全管理 8.1 人员管理 8.1.1 人员培训与考核
8.1.1.1 人类间充质干细胞库工作人员应接受专业技能培训，并考核通过后方可上岗。干细胞制备等专业岗位需具备一定的教育背景。培训项目包括但不限于生命伦理、细胞培养基础、相关仪器使用及维护方法、安全管理、质量控制、物料管理及清洁卫生等内容。 8.1.1.2 人类间充质干细胞库人员每年应至少培训并考核一次。考核未通过者，应重新接受培训，成绩合格后方可再次上岗。
8.1.1.3 人类间充质干细胞库人员培训及考核结果应有相关档案记录及查阅制度。 8.1.2 人员出入制度
8.1.2.1 人类间充质干细胞库相关区域应建立实验室人员及外来人员准入制度，并建立相应人员准入登记记录制度。
8.1.2.2 有以下情况者不宜从事人类间充质干细胞库工作，或进入人类间充质干细胞库相关区域：
a) 有严重免疫系统疾病，或正在服用免疫耐受药物者； b) 有呼吸道感染或发热症状者； c) 身体有开放式损伤者；
d) 有传染性疾病或病毒携带者；
e) 如有其他特殊情况，相关人员应征求人类间充质干细胞库主管人员的意见，批准后 方可进入。 8.1.3 人员健康管理
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8.1.3.1 人类间充质干细胞库人员录用之前应进行严格体检，条件合格者方可录用。 8.1.3.2 人类间充质干细胞库人员应建立员工健康档案，并至少每年体检一次。
8.1.3.3 人类间充质干细胞库若发生生物安全暴露，相关人员应接受必要救治并制定医学观察方案。对于出现异常情况者，应暂时调离工作岗位，或永久调离。再次上岗应体检合格，并取得主管人员的批准。 8.1.4 供者健康管理
8.1.4.1 间充质干细胞供者需提供一般信息、既往病史、家族史等。信息登记可参考附录B。
8.1.4.2 供者必须经过检验筛选证明无人源特定病毒，结果应符合GB 18467-2001的规定。 8.2 实验室安全管理 8.2.1 消防安全
8.2.1.1 人类间充质干细胞库需配备必要的防火系统及灭火装置。特定区域如档案储存区域应配备相应的特殊灭火装置如干冰灭火器。
8.2.1.2 人类间充质干细胞库应定期对消防系统和消防装置进行检查，以确保其处于随时可用状态。
8.2.1.3 人类间充质干细胞库的防火系统建设应符合GB 19489-2008的规定。 8.2.1.4 人类间充质干细胞库灭火器的配置应符合GB 50140的规定。 8.2.2 压力容器安全
8.2.2.1 压力容器指压力气瓶及高压灭菌装置。
8.2.2.2 压力容器应由专业人员操作，并需持有压力容器资格证明文件。压力容器使用应建立使用记录档案。
8.2.2.3 压力容器安全应符合《中华人民共和国特种设备安全法》的规定。 8.2.3 化学用品安全
8.2.3.1 人类间充质干细胞库涉及到的有毒有害物质，应设立相应的储存制度，包括储存条件、储存地点和指定的管理人员；并有相应的记录登记制度。
8.2.3.2 人类间充质干细胞库涉及到的有毒有害物质，应制定明确的使用及管理制度；并有相应的记录登记制度。
8.2.3.3 人类间充质干细胞库应建立危险化学用品事故危险评估和应急预案，以应对可能发生的危害性事故。
8.2.3.4 人类间充质干细胞库内涉及有毒有害物质的工作区域，应符合AQ 3013的规定。 8.2.4 液氮安全
8.2.4.1 液氮罐和管道系统需设置减压阀，以防止爆炸。 8.2.4.2 应用到大量液氮罐储存时，需安装氧浓度检测器。
8.2.4.3 人类间充质干细胞库工作人员在操作中接触到液氮时，需使用防护面罩和防冻手套并做好其它防冻措施。
8.2.4.4 人类间充质干细胞库应确保维持正常功能至少3天的液氮供应量。人类间充质干细胞库应定期检查液氮容量，并建立相应的检查登记制度。
8.2.4.5 人类间充质干细胞库的液氮安全，应符合GBT 5458-1997的规定。
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SZDB/Z 126—2015 8.2.5 生物安全
8.2.5.1 人类间充质干细胞库应建立严格的生物安全及危害性评估方案、生物安全审查制度及生物安全事故应急预案。
8.2.5.2 人类间充质干细胞库的生物安全制度应通过生物安全委员会及生命伦理委员会的批准后方可实行。
8.2.5.3 涉及到感染性物质的操作、运输等行为，应由受过培训的专门人员进行，并使用特定的操作或运输工具；并需建立完善的记录文件。 8.2.5.4 人类间充质干细胞库的生物安全制度应符合《WHO生物安全手册》和GB 19489-2008的规定。 8.2.6 安全标识
8.2.6.1 人类间充质干细胞库相关区域及相关设施应具有安全标识，包括标识的形式如颜色、图标、光信号等和标识内容如危险品、消防设施、洁净区等应清晰明确。
8.2.6.2 人类间充质干细胞库中相关安全标识的设计和编写应符合GB 15258和GB 2894的规定。
8.3 物料仪器管理 8.3.1 物料管理 8.3.1.1 物料采购
a) 人类间充质干细胞库所用物料需从具备专业资质并经过验证核实的供应商处采购，
且具备检验合格证明文件。
b) 物料的采购信息应具有严格的记录登记制度，采购信息包括但不限于采购人员和物
料的名称、编号、数量、规格、供应商、生产商、产地、批号、有效期、运输条件、注意事项等。 8.3.1.2 物料标识
物料应具有清楚明确的标识，包括物料的编号、名称、规格、数量、供应商、批号、有效期、储存条件、运输条件、使用方法以及注意事项。 8.3.1.3 物料库存管理
a) 人类间充质干细胞库应具有物料管理系统和相应的物料信息管理系统。
b) 物料应严格按照储存条件正确储存。对于物料的储存条件和有效期，应具有定期的
审查制度和特殊情况下的应急预案，并具有记录登记文件。
c) 物料的库存管理应符合人类间充质干细胞库的工作实际，在具备一定量物料储备的
同时，避免物料长期积压导致的效力下降或过期使用。
d) 物料的出入库应具有严格的记录登记制度，包括:物料的标识、物料出入库经手人
员姓名、岗位以及出库用途等信息。 8.3.1.4 物料使用管理
a) 物料应严格按照使用方法正确使用。
b) 物料的使用应具有严格的文件记录制度，包括物料的标识、使用范围、使用时间
等信息。物料的使用信息要做到可溯源。
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