发布时间 : 星期五 文章花生油中黄曲霉素B1紫外降解及安全性评价 - 图文更新完毕开始阅读a6f4a8c1ddccda38366baf7c
花生油中黄曲霉毒素Ｂｌ紫外降解及安全性评价毒素进入机体后，主要在多种氧化酶的酶促作用下，产生ＡＦＭｌ、ＡＦＱｌ、ＡＦＰｌ和黄曲霉毒素醇等代谢产物。ＡＦＰｌ和ＡＦＱｌ可直接通过尿液或其它形式排出体外；黄曲霉毒素醇在体内能转化为ＡＦＢｌ，在体内代谢后进而与细胞大分子物质结合形成ＡＦＢｌ．８，９．环氧化物（ＡＦＢｌ．８，９－ｅｐｏｘｉｄｅ，ＡＦＢＯ）的致癌物。ＡＦＢＯ包括两种空间异构体：ｅｘｏ．ＡＦＢＯ与ｉｎｔｒｏ．ＡＦＢＯ。黄曲霉毒素Ｂ１人体内的代谢途径如图１．２。（２）ＡＦＢｌ的人体致癌性黄曲霉毒素是目前致癌性最强的物质之一，ＬＤ５０为Ｏ．３６ｍｅＪｋｇ，是特剧毒范围内的毒物。肝脏为主要损害的器官，临床症状有肝硬化，肝炎和肝坏死等。急性中毒的临床表现为肝部疼痛和消化道不适；严重中毒时会发生昏厥、水肿，甚至抽搐死亡。吸烟者、乙型肝炎病毒携带者同时暴露于黄曲霉毒素时，肝癌的发病率比正常人发病率显著增加。ＡＦＢｌ需要经过ＣＹＰ４５０酶代谢活化为ＡＦＢｌ．８，９．环氧化物才具有损伤细胞ＤＮＡ的能力。ＡＦＢｌ．８，９．环氧化物的８位碳原子与鸟嘌呤碱基的７位氮原子共价结合形成大量的ＤＮＡ加合物，这种ＤＮＡ加合物或随后的ＤＮＡ损伤可以导致遗传基因的改变，从而使细胞沿着这一方式向恶性转变。研究表明，ＡＦＢｌ尤其容易和ＤＮＡ链上的鸟苷酸残基Ｇ位上的Ｎ７发生共价结合，质子场的作用会使它们之间的电子云发生漂移，自发形成许多形式的ＤＮＡ损伤（Ｓｄｕｅｌｂｅｒｅｔａ１．，１９９５；Ｐａｕｌ，１９７７），包括：①碱基损伤及ＤＮＡ加合物形成。ＡＦＢｌ和ＤＮＡ共价结合后形成ＡＦＢｌ．ＤＮＡ加合物，后者可自发形成８，９，二氢．８．（Ｎ７．鸟苷）一９．烃．ＡＦＢｌ．ＤＮＡ加合物和甲酰嘧啶．ＡＦＢｌ．ＤＮＡ加合物，这些碱基损伤易造成基因突变。②形成无嘌呤／无嘧啶位点（ＡＰ），这是一种特殊的碱基损伤形式，多数原因为ＡＦＢｌ．ＤＮＡ自发形成，部分原因为ＤＮＡ糖苷酶作用产生（Ｄｅｎｉｓｓｅｎｋｏ，１９９９）。由于ＡＰ的生成，ＤＮＡ分子链上出现碱基空缺，此时ＤＮＡ复制和转录在该位点极易受阻；③在ＡＦＢｌ作用时，会自发形成ＤＮＡ单链断裂和双链的断裂损伤。李文武等研究表明（李文武等，２００１），在ＡＦＢｌ持久作用于机体时ＤＮＡ断裂现象明显，这同ＡＦＢｌ的摄入量有关，机体暴露在低水平ＡＦＢｌ时ＤＮＡ以断裂单链为主，但暴露在高水平ＡＦＢＩ时则以断裂双链为主；④ＤＮＡ的氧化性损伤。由于ＡＦＢｌ分子的氧化活性，使其作用于ＤＮＡ时产生的８．羟基鸟嘌呤是ＤＮＡ氧化性损伤的一种重要形式，也是目前在流行病学中检测生物体ＤＮＡ氧化性损伤的一种重要的标记因子，也有研究显示，此类氧化损伤与黄曲霉毒素Ｂ１诱发基因突变相关；⑤姐妹染色体交换频率增强，增加基因的不稳定性（Ｈｏｅｉｊｍａｋｅｒｓｅｔａ１．，２００１）；⑥ＤＮＡ的碱基错配损伤。当ＡＦＢｌ与Ｇ结合后，Ｇ容易８山东农业大学硕士专业学位论文同Ｔ互补错配形成Ｇ．Ｔ，经过两个细胞分裂周期后导致Ｇ．Ｔ突变。１．４黄曲霉毒素的污染分布现状１．４．１污染分布状况在各种黄曲霉毒素中，污染最严重的是ＡＦＢｌ。经黄曲霉菌或者寄生曲霉菌污染的粮食、食品利原料等有可能产生ＡＦＢｌ。即使在食品及农副产品中未发现真菌、菌丝体或孢子的，也能检测到ＡＦＢｌ。黄曲霉毒素主要污染花生、玉米、大豆、椰子、咖啡等食物或者此类食物的加工制品，如花生粕、饲料、豆粕、食用油等，由于在农作物生长期间能感染真菌，所以在土壤中也会检测到黄曲霉毒素。据报道，在经济欠发达的发展中国家如肯尼亚、乌干达、印度等国经常出现黄曲霉毒素急性中毒。主要原因是在热带和亚热带地区，食物中黄曲霉毒素的含量非常高，另一方面原因是这些国家的粮食及食品安全管理水平、政府监管水平有待提高。在我国，黄曲霉是产生黄曲霉毒素的主要菌种，极少分离检测到寄生曲霉菌。先前有学者从１７个省粮食中分离到１６６０株黄曲霉菌，其中产毒菌种以广西地区的最多，平均检出率为５８％。（梁月秋等，２０００）。李娟（李娟，２０１１）研究了中国２００９年１２省份花生中黄曲霉毒素污染情况，结果显示，２００９年中国花生ＡＦＴ污染普遍，东北产区和北方产区的阳性率分别高达４２．３７％和２２．４０％，长江流域产区花生ＡＦＴ阳性率为３７．８３％，南方产区更是高达８３．１５％。ＡＦＴ．阳性率高低顺序为：南方产区＞东北产区／长江流域产区＞北方产区；各产区花生ＡＦＢｌ阳性率两两比较结果显示，除东北产区与长江流域产区差异显著外∽＜０．０５）其他各产区之间均具有极显著性差异俨＜０．０１），ＡＦＢｌ阳性率高低顺序为南方产区＞长江流域产区＞东北产区＞北方产区。由于防止真菌污染食物的工作非常困难，因此人们长期食用低剂量黄曲霉毒素污染食品的可能性相对较高，而且在发展中国家超过２５％粮食农作物存在真菌毒素的污染。鉴于黄曲霉毒素对人体及动物体危害的严重性，针对食品黄曲霉毒素的污染与防治工作就显得尤为重要。因此，寻找一种简单、实用、高效、快捷去除食品或饲料中黄曲霉毒素的材料与方法，有重要的理论与实际意义。１．４．２黄曲霉毒素Ｂ１对食品的污染世界许多国家的食品原料和制成品均遭受不同程度黄曲霉菌污染。在亚热带和热带地区的污染程度比较严重，此类地区同时也是肝癌的高发区。我国曾于１９７２．１９７４年进行了食品中黄曲霉毒素Ｂ１的全国普查，发现污染黄曲霉毒素跟所处地区和食品种类也９花生油中黄曲霉毒素Ｂ１紫外降解及安全性评价有关系。长江以南以及长江沿岸地区黄曲霉毒素污染较为严重，北方各省份黄曲霉毒素污染较轻。各类食品中，玉米、花生、花生油等相关制品中污染严重，小麦、面粉、大米等污染较轻。１９９２年在我国部分省市调查粮油食品中黄曲霉毒素Ｂｌ的含量，结果发现，花生样品被检出率高达５５．６％。李可等（李可，２０１３），以分层随机抽样得到的２３８份粮油食品作为研究对象，调查分析深圳地区市售粮食和食用油中４种黄曲霉毒素（ＡＦｓ）的污染状况。结果显示大米、米制品、小麦粉、玉米粉、食用油中总黄曲霉毒素阳性率分别为３５．３％、３３．８％、１３．９％、４６．７％和２４．５％。其中定型包装大米ＡＦｓ阳性率２６．５％与散装大米ＡＦｓ阳性率５６．３％）俨＜０．０５）；长江以北地区出产的大米ＡＦｓ阳性率２７．３％与长江以南地区出产的大米ＡＦｓ阳性率４１．４％差异有统计学意义伙０．０５）。米制品、小麦粉和玉米粉仅检出黄曲霉毒素Ｂｌ和Ｂ２。食用油中ＡＦＢｌ、ＡＦＢ２、ＡＦＧｌ和ＡＦＧ２阳性率分别为２４．５％、２４．５％、１１．３％和３．８％。ＡＦＢｌ超标率为５．６６％，超标样本全部为作坊生产的无牌散装自榨花生油。结论深圳市售大米、食用油存在４种黄曲霉毒素联合污染的状况，污染以黄曲霉毒素Ｂｌ和Ｂ２为主。何建忠研究了贵港市２０００至２００４年贵港市各榨油作坊中黄曲霉毒素Ｂ１含量情况，检测结果显示，２００１年和２００２年的油样黄霉毒素检出和超标率均高，原因可能是由于２００１年２００２年在花生收获季节碰到了雨水天气，容易导致花嫩发芽、发霉，其他年份没有这种天气现象（何建忠，２００７）。说明花生油中黄曲霉毒素含量受气候影响大，在雨水比较充沛的地区污染黄曲霉毒素较严重。１．５食品中黄曲霉毒素的限量标准近年来，国内外食品安全问题严重威胁着人们的身体健康，食品安全问题也成为当今世界各国面临的又一大难题，为此，各国纷纷制定了严格的毒素限量标准来保障人民安全以及维护各自在国际贸易中的利益。我国有１２项行业和国家标准规定了花生及其制品中黄曲霉毒素的最大限量，有２项国家产品标准，２项国家强制性标准，３项轻工行业标准和５项农业行业标准（丁小霞等，２０１１）。我国规定花生及花生制品中黄曲霉毒素含量不得超过２０“ｇ／ｋｇ。欧盟、日本等国家为保护本国人民消费安全，在进口贸易中对进口食品制定了严格的限量标准，表１为世界部分国家对食品中黄曲霉毒素的限量标准。尽管日本规定的限量标准为１０ｐｇ／ｋｇ，但在进口贸易中，日方规定进口食品中黄曲霉毒素“不得检出”。１０山东农业大学硕士专业学位论文刘晓莉等（刘晓莉，２０１２）对近千个传统烹调用油样和３００余个新兴功效油样进行为时两年的检测，结果显示：２０１１年传统烹调用油检测合格率为９９．２２％，新兴功效油样品合格率为９５．０３％；２０１２年传统烹调用油检测合格率为９９．３７％，新兴功效油样品合格率为９６．９０％。表明中国食用油中黄曲霉毒素的合格率逐年提升。表ｌ部分国家对食品中黄曲霉毒素的限量标准Ｔａｂｌｅ１ＬｉｍｉｔｌｅｖｅｌｓｏｆＡＦＢＩｉｎｆｏｏｄｓｓｅｔｂｙｓｏｍｅｃｏｕｎｌｒｉｅｓ１．６黄曲霉毒素的检测方法国内外对黄曲霉毒素的检测研究较多，其从定性分析的研究逐渐发展至精确定量研究。黄曲霉毒素的检测方法概括起来主要有三类：第一类是物理化学检测方法，主要包括薄层分析法（ＴＬＣ）、高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）等；第二类是免疫化学检测方法，主要包括竞争性酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）、免疫亲和柱法（队Ｃ）等；第三类是联用方法，主要包括金标免疫层析法（ＧＩＣＡ）、液相色谱．质谱联用法（ＬＣ．ＭＳ）等（马志科，２００９）。１．６．１薄层分析法（ＴＬＣ）薄层层析法（ＴＬＣ）是测定ＡＦ的经典方法，我国食品行业国标以及美国药典都采用了ＴＬＣ法检测。本方法具有操作显色比较方便，斑点集中，定性结果比较直观，操作容易，耗费时间短等优点。缺点是操作繁杂，受人的主观因素影响较大，精密度低，重复性差，容易受到其它物质干扰，所用的有机试剂有害操作人员的身体健康（马涛，２００７）。其原理是样品经提取、柱层析、洗脱、浓缩后进行薄层分离，然后在３６５ｎｌｎ紫外光下ＡＦＧｌ、ＡＦＧ２，ＡＦＢｌ和ＡＦＢ２分别显示绿色，紫色和蓝紫色荧光并根据其在薄１１