发布时间 : 星期三 文章2010年实验室考核理论试题库20100428更新完毕开始阅读a90da17401f69e314332940a
2、简述采集活体牛、羊O-P液（咽食道分泌物）的技术要求？
答：牛、羊O-P液的采集技术要求：被检动物在采样前禁食（可饮少量水）12小时；采样探杯在使用前经装有0、2%柠檬酸或1%-2%氢氧化钠溶液的塑料桶中浸泡5分钟，再用与动物体温一致的清水冲洗探杯后使用，每采完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物应站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10-15厘米处，轻轻来回抽动2-3次，然后将探杯拉出。如采集的0 -P液被反当胃内容物严重污染，要用生理盐水或自来水冲洗口腔后重新采样。取出8-10毫升O-P液，倒入含有等量细胞培养液或磷酸缓冲液的灭菌广口瓶中，充分摇匀加盖封口，放冷藏箱及时送检，未能及时送检应臵于-30℃。
3、采样的一般原则
（1）凡是血液凝固不良，鼻孔流血的病死动物，应耳尖采血涂片，首先排除炭疽，炭疽病、死的动物严禁剖检。
（2）采样时应从胸腔到腹腔，先采实质器官做到无菌，避免外源性的污染，最后采集污染的组织，如胃肠组织、粪便等。
（3）采取的病料必须有代表性，采取的组织器官应病变部位明显。采取病料时应根据不同的疫病或检验目的，采其相应血样、活体组织、脏器、肠内容物、分泌物、排泄物或其他材料。病因不明时，应系统采集病料。
（4）病料应在使用治疗药物前采取，用药后会影响病料中微生物的检出。死亡动物的内脏病料采取，最迟不超过死后6 h(尤其在夏季)，否则，尸体腐败，难以采到合格的病料。
（5）血液样品在采集前一般禁食8 h，采集血样时，应根据采样对象、检验目的及所需血量确定采血方法与采血部位。
（6）采样时还应考虑动物福利，并做好个人防护，预防人畜共患病感染。 （7）防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和废弃物的处理。 4、采样前应当准备好哪些用品、材料和试剂？
答：1、器械：采样箱、保温箱或保温瓶、解剖刀、剪刀、镊子、酒精灯、酒精棉、碘酒棉、注射器及针头等；样品容器包括小瓶、玻片、平皿、离心管及易封口样品袋、塑料包装袋等；试管架、铝盒、瓶塞、无菌棉拭子、胶布、封口膜、封条、冰袋等。 2、采样记录用品：不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、采样登记表等。3、保存液：甘油盐水缓冲液、肉汤、PBS液、双抗、抗凝剂等。4、防护用品 。
5、在口蹄疫诊断中，应采集哪些组织样品？
用于病毒分离、鉴定的样品以发病动物(牛、羊或猪)未破裂的舌面或蹄部、鼻镜、乳头等部位的水泡皮和水泡液最好。对临床健康但怀疑带毒的动物可在屠宰后采集组织样品如淋巴结、脊髓、肌肉等作为检测材料。
6、高致病性禽流感病原学检测采集什么(部位)样品？
活禽病料应包括喉气管拭子和泄殖腔拭子，最好是采集喉气管拭子。小珍禽用拭子取样易造成损伤，可采集新鲜粪便。死禽采集气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品。
7、进行疑似高致病性禽流感样品采集时，应准备哪些器具和试剂？
（1）采样器具：解剖刀、剪刀、镊子、酒精灯、酒精棉、碘酒棉、注射器及针头、无菌棉拭子、动物检疫器械箱等。
（2）样品容器：西林瓶、平皿、离心管、易封口样品袋、塑料包装袋等。 （3）运输容器：试管架、塑料盒（离心管专用）、铝饭盒、瓶塞、胶布、
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封口膜、封条、冰袋。
（4）记录用具：不干胶标签、签字笔、圆珠笔、记号笔、采样单、记录本等。
（5）防护材料：一次性手套、乳胶手套、防护服、防护帽、胶鞋等。 8、当疑似有新城疫发生时，应从发病禽或死亡禽采集哪些病料进行检测？病料如何保存？
发病禽：采集气管拭子和泄殖腔拭子（或粪便）； 死亡禽：以脑为主；也可采集脾、肺、气囊等组织。
采集的样品应尽快处理，如果没有处理条件，样品可在4℃ 保存4天；若超过4天，需臵-20℃保存。
9、动物结核病进行细菌性检查时，可采集哪些样品？
死畜可采淋巴结及其他组织。活畜可采其痰、乳、精液、子宫分泌物、尿和粪便。
10、如何采集畜禽肠管及肠内容物样品？
肠管的采集：用线将病变明显处（约5-10厘米）的两端双结扎，从两端剪断，臵于灭菌容器中，冷藏送检。
肠内容物样品的采集：选择肠道病变明显部位，取内容物，用灭菌的生理盐水轻轻冲洗；也可烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取肠内容物，放入盛有灭菌的30%甘油盐水中。
11、采集全血时的注意事项有哪些？
血样品必须是脱纤血或是抗凝血。抗凝剂可选肝素或 EDTA，枸橼酸钠对病毒有微毒性，一般不宜采用。以冷藏状态立即送实验室。必要时，可在血中按每毫升加入青霉素和链霉素各 500-1000 IU，以抑制血源性或采血中污染的细菌。
12、对牛、马、羊、猪、家禽的采血部位各有哪些？
牛、马、羊从颈静脉、尾静脉、乳房静脉采血；猪从前腔静脉、股静脉、桡头静脉、隐静脉采血，用量少时也可以从耳静脉抽取；家禽从翅膀静脉或心脏用注射器抽取血液。
13、进行蓝耳病的RT-PCR检测可采取哪些样品？
肺、扁桃体、淋巴结和脾等组织样品；新鲜精液或冷冻精液；血清、血浆、全血或细胞培养物。
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（六）检测技术基础 A选择题
1．下列哪种试剂不常用作抗凝剂？（B） A. 柠檬酸钠 B.硫酸钠
C.肝素 D.乙二胺四乙酸
2．ELISA试验中常用底物哪种最佳？ (C) A. OPD B. OT C. TMB D. ABTS
3．斑点-ELISA是指ELISA实验在 上进行，抗原（体）点样呈斑点，反应结果观察斑点的呈色。（A）
A. 硝酸纤维膜 B.玻璃板
C.琼脂 D. 96孔ELISA板
4．分离新城疫病毒时，一般可通过接种 日龄的鸡胚尿囊腔来获取。（B） A．5-7 B. 9-11 C. 13-15 D. 15-17
5．下列哪种方法是实验室检查微量抗原或抗体的最敏感的方法？（D） A.直接凝集 B.单向琼脂扩散 C.金标试纸条 D.ELISA
6．下列哪种方式不适用病毒培养? （D） A.细胞培养 B.组织培养 C.动物接种 D.培养基培养
7、目前实验室禽流感病毒血清学检测、诊断最常用方法是：(C) A.中和试验 B.补体结合试验 C.血凝和血凝抑制试验 D. ELISA试验 8、一般保存病毒毒种的最佳温度是： (D) A. 37℃ B. 4℃ C. -20℃ D. -70℃
9、 布病试管凝集试验中出现前带现象的原因是（B） A.颗粒性抗原过多 B.血清中抗体过多 C.颗粒性抗原过少 D.血清中抗体过少 10、PCR反应分哪三个步骤？（D）
A.变性、解链、退火 B.变性、退火、复性 C.退火、复性、延伸 D.变性、退火、延伸 11、 ELISA有哪三种基本反应类型？（A） A.间接ELISA、夹心ELISA、竞争ELISA B.直接ELISA、阻断ELISA、竞争ELISA C.夹心ELISA、竞争ELISA、阻断ELISA D.捕捉ELISA、直接ELISA、阻断ELISA
B判断题
1、口蹄疫病毒3ABC非结构蛋白抗体检测方法用于区分感染与免疫动物。动物在感染FMDV后既产生结构蛋白抗体，也产生非结构蛋白抗体，而接种纯化灭活病毒后，几乎只产生结构蛋白抗体。（√）
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2、实验室细菌分离、鉴定常用的简单染色法有美蓝染色法、瑞氏染色法、姬姆萨氏染色法、革兰氏染色法。（×）
3、布病试管凝集试验中出现前带现象的原因是由于血清中存在不完全抗体（也有人认为是IgA）竞争抗原而造成抗原抗体比例失调。（√）
4、凡能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释倍数代表1个血凝单位（HAU）。（√）
5、对口蹄疫疫苗多次重复免疫的动物进行非结构蛋白(NSP)抗体检测，出现阳性反应很可能是由于疫苗的纯度问题；由于疫苗制备时痕量NSP的存在，可导致阳性反应。（√）
6、PCR聚合酶链式反应体系的基本成分由耐热的DNA聚合酶、引物、 dNTP、 Mg2+、缓冲液、模板组成。（√）
7、评价疫苗保护率可以通过免疫抗体监测，一般认为疫苗的保护率达到50%以上，认为该疫苗的质量较好，可以有效抵御疾病的侵袭。（×）
8、在对未免疫动物种群进行流行病学调查时，抗体水平应该作为主要的感染依据。（√）
9、提取病原核酸，经氯仿去除蛋白质时，离心后上清应小心操作，靠近沉淀的那层膜，一定不要吸取，以免蛋白质污染。（√）
10、PCR引物长度一般为15～30个核苷酸。过短影响PCR的特异性，过长会提高相应退火温度，使延伸温度超过TaqDNA聚合酶最适温度74℃,影响产物的生成。（√）
11、尿素酶试验原理是有些细菌能产生尿酶分解尿素产生氨，使培养基呈碱性，从而通过酚红指示剂变为红色。（√）
12、正向间接血凝试验是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体；反向间接血凝试验是将抗体致敏于红细胞表面，用以检测相应抗原。（√）
13、分子生物学实验室布局应该各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。 （√）
14、琼脂平板划线的主要目的是获得单个菌落。（ × ） 15、革兰氏染色的关键步骤是酒精脱色。（ √ ）
16、培养细菌时，培养基中的营养越多细菌生长得越快。（ × ）
17、链球菌在自然界中广泛存在，所以猪链球菌的培养要求不高，一般培养基都能生长的十分茂盛。（ × ）
18、沙门氏菌在SS培养基上菌落为无色，而大肠杆菌为红色（ √ ） 19、将获得的单个空斑制作悬液，梯度稀释后再作空斑，最终可获得只含一个病毒颗粒及其子代的空斑，这就是病毒克隆。（ √ ）
C简答题
1、简述实验室检测的目的与意义？ 答：（1）确诊疾病
（2）检测、监测和流行病学调查 （3）检测疫苗免疫效果和母源抗体 （4）疾病检测净化
2、什么是PCR，有什么特点，扩增反应有哪几个步骤？
答：PCR即聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)，具有特异、
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