发布时间 : 星期二 文章各种酶活性测定方法更新完毕开始阅读a92431c56fdb6f1aff00bed5b9f3f90f76c64dbc
(3) 750mmol/L NBT: 0.06133g用PBS定容至100ml(避光保存)
(4) 100umol/L EDTA-Na2: 0.03721g用PBS定容至1000ml
(5) 20umol/L核黄素: 0.0753g用蒸馏水定容至1000ml(避光保存)
注：（1）对照：以加缓冲液、不照光为空白；照光的为最大还原管
(2) 照光后至显蓝色要立即避光放置、迅速测定A560值 的测定方法 试剂配制：
（1）5% TCA： 5g用蒸馏水定容至500ml （2）% TBA：2.5g用TCA定容至500ml 方法：
酶液1ml—%TBA和5%TCA—混合后在100度水浴煮沸15min—迅速冷却，
10000r/min离心10min—用蒸馏水调零分别测定上清液在532nm、600nm处的吸收值
的测定方法 试剂配制：
（1）L的醋酸缓冲液：+得到的醋酸缓冲液
AL的HAc溶液)—6ml冰醋酸溶到494ml蒸馏水中
BL的NaAc溶液)—（2）%愈创木酚溶液—125um愈创木酚溶于50ml 50%乙醇中（临用前配制） （3）%H2O2溶液： 30% H2O2定容至50ml（临用前配制）
方法：比色杯中依次加入2ml L的醋酸缓冲液—1ml %愈创木酚溶液—xml酶液（5min值为500-800即可）— %H2O2溶液—迅速巅到混匀把A460调零并开始计时—1次/30s,连续读取3min 的测定方法 试剂配制：
(1) 50mmol/L的PBS（） (2) % H2O2—1ml H2O2定容至100ml 方法：(1)以不加H2O2的50mmol/L的PBS（）为空白把A240调零
(2)50ul酶液—3ml 50mmol/L的PBS（）— % H2O2—迅速颠倒混匀，开始计时—1min
后在240nm下比色，1次/1min(连续读取5min)。
2010年06月22日 星期二 19:33
1 叶绿素含量测定：
80％的丙酮液的配制：4L丙酮 + 1L蒸馏水。
称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管（做三个重复），加入25ml浓度为80％的丙酮液，放在黑暗处浸提大约36小时后取出，稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm和470nm下测定光密度，以80％的丙酮液为空白。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P35～36） 也可用95%乙醇溶液，在665、649、470nm处有最大吸收峰 Ca= 抗氧化酶活性的定：（2.5g样） L磷酸缓冲溶液 (PBS)（pH=）溶液的配制：65.5506g Na2HPO4·12H2O + 2.65285g NaH2PO4·2H2O, 定容到4L。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》，
P134）。
取低温保存的鲜样，称2g左右的叶片（或根）放在50ml的离心管，加入20ml浓度为L磷酸缓冲溶液（pH=）（最好是较冷的磷酸缓冲溶液，防止研磨时温度过高使酶失活），研磨（用磨碎机磨），8000r/min的冷冻离心机下离心20分钟，上清液为粗酶液。
丙二醛（MDA）的测定： 20％三氯乙酸（TCA）溶液的配制：称200g三氯乙酸，用蒸馏水定容到1000ml。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124）；
% 硫代巴比妥酸（TBA）溶液的配制：称5g硫代巴比妥酸（TBA）,用20％三氯乙酸（TCA）溶液溶解并定容到1000ml。（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124）（先加少量的氢氧化钠1mol/L溶解）；
酶液（对照用的L pH=的磷酸缓冲液代替酶液）（做三个重复）+ 3mlTBA――振荡――沸水浴上反应30min――冷却（至少