发布时间 : 星期六 文章实验一 坐骨神经--腓肠肌标本的制备 - 图文更新完毕开始阅读aefd0c34c381e53a580216fc700abb68a982ad87
浙江大学实验报告
课程名称：动物生理学及实验（甲）
实验项目：实验一 坐骨神经—腓肠肌标本的制备及生物电现象的观察
实验日期：2016年9月 日（周 ） 下午
姓名 学号 班级： 第 组，同组者：
实验地点：紫金港生物实验中心311
[目的要求]
1．学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。
2．学习并掌握蛙类坐骨神经—腓肠肌标本的制备方法。 3．了解电刺激的极性法则。
[动物与器材]
蛙或蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针和玻璃分针）、蜡盘、蛙板（木质或硬泡沫塑料）、玻璃板、固定针、锌铜弓、培养皿或不锈钢盘、污物缸、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。
[实验流程]
洗干净实验动物→毁髓→剥制后肢→分离两后肢→分离坐骨神经→游离腓肠肌→分离股骨头→标本检验
[方法与步骤]
1．蛙或蟾蜍的单毁髓与双毁髓
一手握住蛙或蟾蜍（可用纱布包裹蟾蜍躯干部），背部向上(参见图1—6)。用拇指压住蛙或蟾蜍的背部，食指按压其头部前端，使头端向下低垂；另一手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后触划，当触及到两耳中间的凹陷处（此处与两眼的连线成等边三角形）时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入，即可进入枕骨大孔。然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，以捣毁脑组织。如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。此时的动物为单毁髓动物。再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺人椎管，以捣毁脊髓。彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。操作过程中应注意使蟾蜍头部向外侧（不要挤压耳后腺），防止耳后腺分泌物射人实验者眼内（如被射入，则需立即用生理盐水冲洗眼睛）。
2．坐骨神经—腓肠肌标本制备 (1) 剥制后肢标本
如果动物个体较大，可将双毁髓的动物腹面向上放入蜡盘中。一手持手术镊轻轻提起耻骨联合上方的皮肤，另一手用手术剪横向剪开皮肤，再剪开体壁肌肉(开口要大)。然后用手术镊轻轻提起内脏，自耻骨部剪断(勿损伤脊神经)。一手轻轻托起蟾蜍后肢，使头部及内脏向下，看清支配后肢的脊神经发出部位，于其前方用金冠剪横向剪断脊柱。然后再沿脊柱两侧到横向切口剪断体壁，一手用蘸有任氏液的拇指和食指捏住断开的脊柱后端，另一手向后撕剥皮肤并除去断开脊柱以上部位肢体及内脏。如果下肢撕皮困难，可在撕皮至股部时，用手勾住双股中间后再行撕剥(图2—1)。将剥干净的后肢放人任氏液中备用。清洗手及用过的手术器械。
如果动物个体较小，可将其背面向上放入蜡盘中。用手术镊轻轻提起两前肢之间的背部皮肤，并用手术剪横向剪开皮肤，用金冠剪剪断脊柱。然后再用手术镊提起断开的脊柱后端，用金冠剪沿脊柱两侧剪开体壁并剥皮(方法同上)。 注意：操作过程中不可将剥皮后的标本同皮肤、内脏等弃物放在一起。 (2) 分离两后肢
将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧，用左手拇指和示指固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱(尾杆骨留在一侧)，使两后肢完全分离。将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。 (3) 分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本固定在玻璃板下方的蛙板(木板或硬泡沫塑料板)上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经(图2—2)。股部沿腓肠肌正前方的股二头肌和半膜肌之间的肌缝，找出坐骨神经。坐骨神经基部(即与脊神经相接的部位)，背部有一梨状肌盖住神经，用
玻璃分针轻轻挑起肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。剪断(或用玻璃分针扯断)梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。再用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的神经分支，将坐骨神经分离至帼窝处。取下脊柱端的固定针，保留神经发出部位的一小块脊柱骨，用金冠剪剪去其余部分脊柱骨及肌肉。再用手术镊轻轻提起连有神经的脊柱骨片，将神经移开股骨。 (4) 游离腓肠肌
一手捏住趾端，另一手用手术镊(尖头镊)在腓肠肌跟腱下面穿线，并用结线扎紧。提起结线，游离腓肠肌。 (5) 分离股骨头或胫腓骨头
如果所用动物个体小，可分离股骨头。方法是：一手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，再用金冠剪自膝关节向前刮干净股骨上的肌肉，保留l cm股骨头并剪断股骨。提起腓肠肌仁的扎线，剪去膝关节下部的后肢，仅保留腓肠肌与股骨的联系。如果所用动物个体大，可分离胫腓骨头。此方法简便而易于操作。即在分离出腓肠肌的基础上，移开腓肠肌，用金冠剪剪去胫腓骨上的肌肉，自膝关节以下保留1 cm长的胫腓骨并剪断后肢，然后自膝关节剪断股骨。 制备完整的坐骨神经—腓肠肌标本应包括：连有坐骨神经的脊柱骨、坐骨神经、腓肠肌、股骨头或胫腓骨头四部分(图2—3)。 (6) 检验标本
用手术镊轻轻提起标本的脊柱骨片，使神经离开玻璃板。再用经任氏液蘸湿的锌铜弓，将其两极接触神经．如腓肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。提起腓肠肌上的结扎线，不使神经受到牵拉，轻轻将标本放人任氏液中保存。稳定15—20min后即可进行实验。此标本可以用于神经干兴奋的传导、神经—肌肉接点的传递以及骨骼肌的收缩等实验研究。
(7) 肌肉二次收缩的观察
将甲标本的神经搭在乙标本的腓肠肌上，然后用锌铜弓刺激乙标本的神经，观察甲标本的腓肠肌是否发生收缩。
(8) 损伤电位的观察：将乙标本的腓肠肌横断，再将甲标本的神经迅速搭于乙标本的完整部和损伤部。观察甲标本的腓肠肌是否发生收缩。
[注意事项]
（1） 制备标本过程中需经常用任氏液湿润标本。
（2） 用锌铜弓刺激时，一定要使神经干悬空，且勿接触其他物体。
（3） 如果神经干结扎不好，通电和断电时都会引起腓肠肌收缩，需重新结扎。
[实验结果]
[分析讨论与心得]
[思考题]
1. 剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗，为什么？
2. 金属器械碰压或损伤神经与腓肠肌，可能引起哪些不良后果？ 3. 如何保持标本的机能正常？ 4．试解释肌肉二次收缩的观察结果。