高级分子遗传学复习提纲 联系客服

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高级分子遗传学考试复习参考题纲

1、 概念解释: PDT

噬菌体展示技术(phage displayed technology,PDT)是将外源蛋白或多肽与噬菌体外壳蛋白融合,展示在噬菌体表面并保持特定的空间构象,利用特异性亲和作用以筛选特异性蛋白或多肽的一项新技术。该技术将基因型与表型、分子结合活性与噬菌体的可扩增性结合在一起,是一种高效的筛选新技术。目前已成功应用于抗原表位分析,单抗筛选,蛋白质功能拮抗多肽或模拟多肽的确定等。 DNA shuffling

将不同品系具有不同突变位点的基因(1~6kb)或同一家族的基因混合,用DNase I酶切构成随机DNA片段库(Pool)。用此库样品为模板、以小分子引物进行PCR扩增,一些随机模板得到扩增,由于片段间存在同源性,在退火过程中常出现模板转换(switch),从而有可能出现集多种突变点于一个基因上的DNA分子,可从多种多样的重组分子中筛选出有用基因。

卫星RNA(satellite RNA)

类病毒(viroids)和拟病毒(virusoids)中类病毒是有侵染性并能独立作用的RNA分子,没有任何蛋白质外壳。拟病毒在构成上与类病毒类似,但是被植物病毒包装,与一个病毒基因组包被在一起。拟病毒不能独立复制,需要病毒帮助其复制。有时拟病毒又称为卫星RNA(satellite RNA)。 交换固定(crossover fixation)

指某一基因簇中的突变通过不等交换趋向扩展到整个基因簇的现象。结果突变的基因要么被淘汰,要么占据全部原来相同基因的位置。 分子伴侣(chaperone)

一种能诱导靶蛋白质形成特定构象使其正确组装的蛋白质。 空转反应(idling reaction)

当空载tRNA进入A位点时,核糖体产生pppGpp 和ppGpp, 诱发应急型反应。 AARS:(氨酰-tRNA合成酶)

催化氨基酸和tRNA2‘或3’-OH共价连接的酶。根据氨基酸序列,可将AARS分为I、II型两组。I 型:Arg、Gln、Glu、Ile、Leu、Trp、Tyr、Val、Cys-RS,其余为II型。I 型RS含有HIGH签名序列(His-Ile-Gly-His)和KMSKS(Lys-Met-Ser-Lys-Ser)序列,使AA结合在3?A的2?-OH上,可以在2?、3?之间移动。II型RS无签名序列,而有3个保守基序。

RNAi/RNAq (RNA干扰、RNA压制)

转录后基因沉默广泛存在于各种生物中,在植物中被称为转录后基因沉默(PTGS),在动物中被称为RNA干扰(RNA interference, RNAi),在真菌中则被称为RNA压制(RNA quelling,RNAq)。尽管叫法不同,但都具有相似机制,都启动一种特殊的RNA降解过程。 酸性面条(negative noodle)

激活结构域的氨基酸序列差别较大,但要求高密度的负电荷(酸性氨基酸),即所谓“酸性面条”或“酸球”。 分枝迁移(branch migration):

两条DNA分子之间形成的交叉点可以沿DNA移动,称为分枝迁移。分枝迁移其实是两条DNA分子之间交叉的同源单链相互置换的结果。 gRNA(向导RNA)

能与待编辑的RNA配对,提供编辑模板信息的RNA(50-70bp)称为向导RNA (gRNA)。gRNA是一种反式作用方式。待编辑RNA与向导RNA在待编辑区域的两侧进行配对,向导RNA为尿嘧啶的插入提供模板。插入后的mRNA与向导RNA完全互补。主要发生在锥虫、和动物线粒体中。

iDNA

SV40复制原点起始时,DNA聚合酶α引发体起始DNA的合成,起始

反应非同寻常:从RNA开始,但是引物由DNA聚合酶活性来延伸,提供一个短的(3-4个碱基)的DNA序列,成为iDNA即initiator DNA。 抑制tRNA (suppressor tRNAs)

tRNA结构基因由于抑制基因的突变而产生的变异tRNA,叫做抑制基因tRNA,一般代表无义抑制基因。当与某种氨基酸相对应的tRNA基因有数个时,抑制基因tRNA多数是由于其中一个tRNA基因发生突变,通常是在tRNA的反密码子部位中发生一个碱基置换,因而它能与无义密码子相对应。偶尔也有因反密码子以外的部位发生变化而成为抑制基因tRNA的。所以抑制基因tRNA决定着哪一种氨基酸可以插入到与无义密码子相对应的部位上去。

MAR (基质附着区,也称支架附着区SAR)

DNA中与细胞核基质附着的区域。富含AT,无共有序列。 孪生内含子(twintron)

内含子定义为基因中间插着的若干段序列,在RNA转录物水平上经剪接除去,不参与该基因在蛋白质水平上的表达。在细胞器RNA中的内含子定义为孪生内含子。 流产起始(abotive initiation):

在RNA伸长到9-10个核苷酸以前,形成的三元复合物并不稳定。体外试验表明,此时RNA聚合酶可能从DNA膜板上掉下(被NaCl、肝素等取代),造成流产起始。σ离去后三元复合物才稳定,进入延伸阶段。 基因丰余(gene redundance)

指真核rRNA、tRNA和组蛋白基因份数很多,超过实际需要。

NURF:(核小体重塑因子)

在核小体重塑过程中, 重塑因子复合物的作用非常重要。这些复合物都具有ATP酶活性。例如SW I?SN F复合物和ISW I 复合物家族。 跳读(translational hopping)

T4噬菌体基因60所编码的蛋白质是拓扑异构酶I 的一个亚基,其mRNA有一个50bp的不翻译区。此不翻译区的5?第一个密码子是UGA终止密码,其上游-1密码子(46)和不翻译区3?末尾密码子都是GGA,这两个GGA只读一个,翻译时跳过50bp,其机制不明。 N/O联糖基化(N/O-linked glycosylation)

所有通过分泌途径的蛋白质都被糖基化。糖基化通常在天冬酰氨酸(Asn)的氨基加上寡糖,称为N联糖基化(N-linked glycosylation);或在丝氨酸(S内质网)、苏氨酸(Thr)或羟赖氨酸(Hyl)的羟基加上寡糖,称为O联糖基化(O-linked glycosylation)。N联糖基化开始于内质网并在高尔基体中完成;O联糖基化仅在高尔基体内发生。 2、举例说明如何证明DNA是遗传物质。

(1)肺炎双球菌转化实验。1928年Griffith用肺炎球菌(光滑和粗糙型)进行了著名的转化实验。肺炎双球菌有两种不同的类型,一种是光滑型(S型)细菌,菌体外有多糖类的胶状荚膜,使它们可不被宿主正常的防护机构所破坏,具毒性,可使小鼠患败血症死亡,它们在培养基上形成光滑的菌落;另一种是粗糙型(R型),没有荚膜和毒性,不会使小鼠致死,形成的菌落边缘粗糙。将R型活菌和加热杀死的S型细菌分别注入小鼠体内,小鼠健康无病。将加热杀死的S型细菌和活的R型细菌共同注射到小鼠中,不仅很多小鼠因败血症死亡,且从它们体内分离出活的S型细菌。这说明,加热杀死的S型细菌把某些R型细菌转化为S型细菌,S型细菌有一种物质或转化因素进入了R型细菌,使之产生了荚膜,从而具备了毒性。1944年,艾弗里和他的同事经过10年努力,在离体条件下完成了转化过程,证明了引起R型细菌转化为S型细菌的转化因子是DNA。他们把DNA、蛋白质、荚膜从活的S型细菌中抽提出来,分别把每一成分跟活的R型细菌混合,然后培养在合成培养液中。他们发现,只有DNA能够使R型活菌转变为S型活菌,且DNA纯度越高,转化越有效。如果DNA经过DNA酶处理,就不出现转化现象。实验证明,DNA是遗传物质,像这样一种生物由于获得另一生物的DNA而发生遗传性状改变的现象称为转化。

(2) 捣碎实验。用含32P和35S的培养基培养T2,分别标记DNA和蛋白质,感染大肠杆菌。捣碎离心分离T2蛋白壳和被感染的细菌,发现80%的35S在衣壳中,70%的的32P在被感染菌中。子代噬菌体只含30%的32P,小于1%的35S。证明遗传物质是DNA。

(3) DNA直接转化实验。利用DNA可以引入新的性状给动物细胞或动物个体。当DNA加入到几种原核细胞的培养物中时,DNA能进入细胞,在一些情况下导致新的蛋白产生。 而当细胞缺乏TK基因则不能形成胸苷激酶,在无胸苷培养基死亡。

3、何为遗传多态性(genetic polymorphism)?分析遗传多态性有哪些常用方法? 遗传多态性(genetic polymorphism) 同一群体中两种或两种以上变异类型并存的现象,其中最少的一种类型也并非由于反复突变才得以维持,并且变异类型不包括连续性变异。分子水平上讲是多个等位基因同时存在于一个基因座称为遗传多样性。分析方法有

(1)RFLP:

基本步骤是用限制性内切酶消化从生物中提取的DNA ,模板DNA 为不同长度的片段, 用琼脂糖电泳分离开并转移到硝酸纤维素或尼龙膜上,然后用专一序列的标记DNA 探针, DNA 在膜上与模板DNA 杂交最后用自显影或显色或发光分析显示与探针同源的DNA 片 段.因为限制酶识别专一的碱基序列,因此DNA 序列的变异会导致酶切点的消失或增加. 限制片段的长度发生变化显示多样性.根据所用探针在模板上的考贝数RFLP 可分为两类 一类以cDNA 基因转录物的反转录物作为探针的一般RFIP 方法,另一类以小卫星DNA 为探针的DNA 指纹分析Fingerprinting 法.前者只产生少数甚至一条杂交带,后者可以得到几十条带.

(2)以PCR 为基础的各种检测DNA 多样性的方法 (3)DNA 序列分析

DNA 测序是检测遗传多样性最彻底的方法。早期都用放射性标记,近来同样是按Sanger 双脱氧核苷原理但用荧光物质标记合成的DNA 片段,用激光光源检测实现了DNA 自动测 序PCR 应用于测序,也提高了灵敏度。

4、最新研究表明人类基因组实际所含基因数量比以前期望的要少,为什么?

根据最新的研究推测,人类基因组含有3-4万个基因,其中80%进行可变剪接改变蛋白质序列,因此,其蛋白质组可能含有5-6万的成员。基因组中大部分DNA序列是用来编码基因选择性表达的遗传信息。这些基因在不同细胞周期的时相,个体发育的不同阶段 ,不同组织、不同器官 ,不同外界环境决定着基因是关闭、还是表达、或表达多少。 5、基因簇和基因家族是如何形成的?怎样才能维持重复序列的同一性?

由同一祖先基因重复和变异产生的一系列基因称为基因家族(gene family)。家族成员可以成簇存在,或者分散在不同的染色体(或两者都有)。不均等交换引发基因簇重排,不均等交换引起缺失和重复导致基因簇的产生。复制或重组中的错误,转座作用等都可产生重复。重复单位为一个完整的基因时,产生基因簇。成簇排列是维持基因间同一性的必要因素。交换固定维持交换序列的同一性。某一基因簇中的突变通过不等交换扩散到整个基因簇,突变的基因要不被淘汰,要不占据原来的整个基因组。

有些基因家族含有完全相同的成员。尽管成簇的基因未必完全相同,但是成簇排列却是维持基因间同一性(identity)的必要因素。基因簇(gene cluster) 少则仅由重复产生的两个相邻的相关基因组成,多则可以是几百个相同基因串联排列而成。当基因产物的需求量很大时,一个基因可以产生大量的串联重复。