发布时间 : 星期五 文章半夏蛋白的提取分离、含量测定及对Hela细胞的作用研究更新完毕开始阅读b4951231ed630b1c59eeb59f
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困3.1不同生长时期采集的半夏样品
1:出芽期样品；2 :全苗样品；3:珠芽期样品；4:佛炮殖期样品；5倒苗期样品 Fig. 3.1
Samples of Pinelia ternata at different developmental stages I: Sample of bud stage; 2: Sample of seeding stage; 3: Sample
of bulbil stage; 4: Sample ofspathe stage; 5:
Sample of maturation stage
半夏催芽时要保证珍珠岩的湿度，但水分又不可过多，导致半夏腐烂，同时要保证珍 珠岩良好的透气性，温度也是彰响半夏出芽的重要因素，实验中催芽温度为27 T,催芽 15天便可出现良好的芽銷，采集部分出芽样品，分为两组，一组千燥至恒重后提取总蛋 白，一组新鲜样提取总蛋白，蛋白溶液保存备用。出芽半夏播种于生物工程研究所生命温 室，半夏对土壤、地势的要求较严，怕法怕旱，怕酸怕碱，宜种植在砂壤土或轻壤土、旱 能烧涕能排的地势好的地方。在半夏生长期间旱要及时烧水或涕要及时排水、杳土、除草， 并施肥。半夏整个生长期对光照要求不一致，生长前期的春季和后期的秋季需要光照条件， 而生长中期的夏季温度高、光照强，应采取遮光措施，保证其正常生长。由于温度等的原 因在7月下旬至8月间，半夏易受病虫侵害，要及时采取防治措施；高温高湿，半夏也 易发生腐烂病，以致地上部分枯黄倒苗死亡，要及时防治。半夏于9月中下旬倒苗。半夏 生长过程中分别在全苗、珠芽、佛焰奄集中出现期来集样品，于半夏集中倒苗期采集倒苗 样品。
3.3.2不同生长时期半夏总蛋白的SDS-PAGE电泳检測结果
半夏不同生长时期新鲜和干燥处理样品总蛋白溶液出芽期、全苗期、珠芽期样品分别 取
IOfiL上样，佛焰苗期、倒苗期样品分别取5^1稀释至10^1^上样，15% SDS-PAGE检 测总蛋白电
泳行为，结果如下(图3.2)。
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圓3.2不両生长时期新鲜与千燥处理样品总蛋白15% SDS-PAGE电泳图
a：新鲜样品；b:干燥处理样品 M:标准蛋白质(14.4kDa.116.0kDa); I：出芽期样品；2：全苗期样品；3：
珠芽期样品，4:佛焰荀期 样品；5:倒苗期样品
F,g. 3.2 Results of 15% SDS-PAGE electrophoresis of total protein of fresh and dried Pineltta temata at
different developmental stages a：Fresh Pinellia tuber;b:Dried pinellia tuber M:
Unstained protein molecular weigh maker (14.4 kDa-116.0 kDa); I: Sample of bud stage; 2: Sample of seeding stage; 3: Sample of bulbil stage; 4: Sample of spathe stage; 5: Sample of maturation stage 新鲜样品蛋白电泳行为如图3.2a所示，半夏总蛋白中有15条蛋白
条带，而不同时期 不同蛋白成分的含量有显著差异，I号条带表观分子量为12 kDa, 4号条带表观分子量 为24 kDa,含量在半夏不同生长时期占总蛋白的比例均较高是半夏的主要
，
蛋白成分，本 实验室研究表明12 kDa的蛋白是对甘露糖专-性结合的半夏凝集素单体
，
而24 kDa的蛋 白并不与甘露糖结合，可能不是半夏凝集素二聚体；2号、3号、6号、7号、8号、9号、 10号、12号、14号、15号条带在佛焰直期和倒苗期含量相对其它时期占总蛋白比例较 高’这些蛋白在半夏佛焰茵期和倒苗期积累相对较高，可能与半夏的生理功能需要有关；
7号蛋白条带表观分子量为44 kDa,但推测和表观分子量为24 kDa的4号条带一样，可 能不
是半夏凝集素四聚体，原因是在变性胶SDS-PAGE凝胶上样处理过程中’凝集素二聚 体和四聚体被解聚了，电泳应只能检测到凝集素单体；13号蛋白条带在出芽期、全苗期 及珠芽期含量在总蛋白中的比例相对其它时期高；15号蛋白条带存在于出芽期和倒苗期
，
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且倒苗期时含量较出芽期时高。
千燥处理样品蛋白行为如图3.2b所示，千燥处理后大分子量的蛋白成分消失，表观分 子量为12kDa的I号条带和表观分子量为24kDa的5号条带在总蛋白中所的比例仍是 最高的，干燥处理后的样品中出现表观分子量在25 kDa附近的4号条带和表观分子量为 35
kDa的5号条带，相对于新鲜样品减少了 10条蛋白条带。在新鲜和千燥处理的样品中 分
子量为12 kDa和24 kDa的含量最高’说明这两个蛋白对热较稳定，是半夏的主要蛋白， 千燥处理样品中的35 kDa和25 kDa附近出现的蛋白也相对对热稳定。
3-3.3不同生长期半夏总蛋白的含量測定结果
新鲜半夏不同时期总蛋白含量測定结果 标准曲线如下(图3.3)和(表3.1).
圓3.3标准曲线 Fig. 3*3 The
standard curve 表3.1标准蛋白BSAA595值 Table 3.1 A595 value of standard protein BSA
编号
A595 O 0.195 0.294 0.465 0.619 0.797
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新鲜半夏不同时期总蛋白含量测定结果如下(表3.2)(? 3.3)0
表3.2不闻生长期新鲜半夏总蛋白的A595值 TaWe 3.2 A595 value of total protein in
fresh Pinellia ternata at different developmental stages
生长时期 出芽期 全苗期 珠芽期 佛焰按期 倒苗期
样品体积(HL) PBS(HL) 450 450 450 475 475
A595 0.696 0.594 0.644 0.576 0.936
50 50 50 25 25
表33不闻生长时期新鲜半夏总蛋白含量糖定结果 Table 3*3 Results
ofdetermation of total protein content io fresh Pinellia ternata at
different
生长时期 出芽期 全苗期 珠芽期 佛焰奄期 倒苗期
developmental stages
样品总蛋白浓度(mg/mL) 块莲中总蛋白质含量(mg/g) 1.766 1.504 1.633 2.916 4.762
4.53 2.28 2.79 7.61 10.21
新鲜半夏不同生长时期中，块蓬中总蛋白含量变化表现为倒苗期〉佛焰殖期>出芽期 >珠芽期 >全苗期。
干燥处理半夏不同时期总蛋白含量测定结果 标准曲线如下表(3.4)和園(3.4)。