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实验十 细菌的形态观察（3学时）
一、实验目的、要求
要求学生掌握显微镜油镜的正确使用及保养方法；认识细菌的形态、基本构造和特殊构造。 二、实验原理
一般显微镜有几个放大倍数不同的物镜，例如4×、10×为低倍物镜，40× 为高倍物镜，这类物镜与标本之间不需要加任何液体介质进行观察的称为干燥物镜；而100×的称为油浸物镜，使用时需在标本和物镜之间加入折射率大于1的液体，如香柏油(折射率为1.515)作为介质，才能符合该物镜数值孔径(N?A=nsinα/2,式中的n即为介质的折射率，可见其与数值孔径正比例关系；α为镜口角)本身对介质折射率的需求。而数值孔径又与显微镜的分辩率成正比例关系，即数值孔径越大，公式d=0.61λ/N.A (d为分辨距离，单位nm；λ为照明光波长，单位nm；N.A为数值孔径）中的d越小，分辩率则越高。
细菌的形态一般有三种主要类型，即球菌、杆菌、螺旋菌，有些细菌有荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛等特殊结构。 三、使用仪器、材料
大肠杆菌、葡萄球菌、枯草杆菌、枯草杆菌（示芽孢）、醋酸杆菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌、八叠球菌等的制片，香柏油、二甲苯，显微镜、擦镜纸。 四、实验步骤 一、油镜的使用方法
1、先用低倍物镜观察标本枯草芽孢杆菌或金黄色葡萄球菌的概况。 2、把所要观察的部分移在视野中央，然后更换高倍物镜。 3、把载物台下降(或镜筒上升)约1.5 cm，再把油镜转到工作位置。 4、在盖玻片上所要观察的位置滴一小滴香柏油，细心拧动粗调螺旋，使载物台慢慢上升(或镜筒慢慢下降)。这时要从侧面仔细观察物镜前端与标本之间的距离，先使物镜前端与油滴接触，然后再慢慢上升载物台(或慢慢下降镜筒)，至物镜前端接近而没有碰到盖玻片为止。这步操作要特别小心，防止油镜压碎标本或损坏油镜(油镜的工作距离为0.2 mm)。
5、眼睛从目镜中观察，拧动细调螺旋，使载物台慢慢下降(或镜筒慢慢上升)
到能看清标本。这步操作要特别注意不要把细调螺旋的方向拧错，以防压碎标本。如因载物台上升或镜筒下降过了或不到位，必须再从侧面观察，重复操作直至物像看清为止。仔细观察并绘图。
6、再次观察 下降载物台(或提升镜筒)，换上另一装片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察、绘图。重复观察时可比第一次少加香柏油。
7、观察完毕后，下降载物台(或提升镜筒)约1 cm，移开物镜镜头，取出装片，及时做清洁工作。先用干的擦镜纸擦1～2次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后再用擦镜纸擦1次。擦镜纸要折成4层以上，且擦过之处不能再次擦拭。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细心，动作要轻，不可用力擦，如果聚光器上有油滴也要同样清洁。载玻片上的油可用\拉纸法\擦净，即把一小张擦镜纸盖在载玻片油滴上，在纸上滴一些二甲苯，趁湿把纸往外拉，这样连续作3～4次，即可干净。
8、擦净显微镜，将各部分还原。对号放入显微镜柜中。 二、细菌形态的观察 (一)观察细菌的基本形态
用低倍镜、高倍镜和油镜观察大肠杆菌、葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、醋酸杆菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌、八叠球菌等的染色装片。 (二)观察细菌的细胞结构
用低倍镜、高倍镜和油镜观察枯草杆菌（示芽孢）等细菌的染色装片。 五、实验记录
分别绘制油镜下观察到的醋酸杆菌、枯草芽孢杆菌、四联球菌、八叠球菌的形态，注明物镜的放大倍数及总放大率。
绘制油镜下观察到的枯草芽孢杆菌的芽孢的形态，注明物镜的放大倍数及总放大率。 六、问题及思考
1、怎样观察细菌的形态？细菌未染色时，用油镜观察有何困难？
2、观察细菌形态时如何区分装片上的细菌和杂质？