发布时间 : 星期一 文章高效液相色谱操作说明书 - 图文更新完毕开始阅读bc59a53d0912a21614792945
4. 分析样品前的准备工作 1) 系统的准备
1. 分析样品前先用甲醇或乙腈冲洗流路约20分钟，平衡活化色谱柱，并赶
走管路中的杂质和水分。
2. 若流动相为有机相与水相的混合物，则第1步完成后，按照分析样品的需
要调节比例阀的比例后冲洗流路约20分钟后，待基线走平后即可进样。
3. 若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，则第1步完成后
用95%的去离子水冲洗流路约20分钟后，再按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约20分钟后，待基线走平后即可进样。
2) 分析样品的准备
1. 按照样品的前处理要求处理好样品。比例甲醇/水溶、超声、萃取、索氏提取、过C18小柱等前处理方法。
2. 注意：大约估计一下待测样品所测成分的浓度或含量，将待测样品与标准品配成浓度大致相当的溶液，以满足线性的要求，以保证所测样品的含量或浓度准确无误。
3) 洗针
1. 若为手动进样阀，则需将进样阀处的扳手反时针扳到头后，用一次性医用注射器吸几毫升的50%甲醇，从进样口注入，清洗定量环和管路。
2. 若为自动进样器，则需按自动进样器面板上的“wash”键，洗针并排掉针中残留的气泡。（“wash”键一般在安装仪器已设置好，为一个多次洗针的命令。客户不需要更改其中的设置，每次仅按一下次键仪器将会自动洗针。若针中气泡仍未清除，则再次按“wash”键直至的的气泡清除为止。）
5. 进样与数据处理
序列进样，详细步聚请参照“戴安液相使用说明书之四---序列进样”。 数据处理，详细步聚请参照“戴安液相使用说明书之五---数据处理和报告打印输出”。
6. 分析完样品后的维护工作 1) 流路的清洗
1. 若流动相为有机相与水相的混合物，则直接用甲醇或乙腈冲洗流路约30分钟后，待基线走平且无杂质峰出现后即停泵关机。
2. 若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质，则先用95%的
去离子水冲洗流路约40分钟后，再用50%的甲醇冲洗流路约30分钟后，再用甲醇或乙腈冲洗流路约30分钟后，待基线走平且无杂质峰出现后即
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停泵关机。
2) 样品瓶的清洗
若使用的是自动进样器，则每次进样后用过的样品瓶需要清洗，以方便重复使用。一般可将几次使用过的样品瓶累积起来，用去离子水（或许50%甲醇）加洗洁精超声30~60分钟后，用去离子多次清洗干净后，干燥箱中干燥即可。样品盖最好一般不要放在干燥箱中高温干燥，容易变形（可以将样品盖放蒸发皿中，再将蒸发皿放在干燥箱的顶盖上，烘干的余热可将样品盖烘干。）。
3) 洗针
1. 若为手动进样阀，则需将进样阀处的扳手反时针扳到头后，用一次性医用注射器吸几毫升的50%甲醇，从进样口注入，清洗定量环和管路。
2. 若为自动进样器，则需按自动进样器面板上的“wash”键，洗掉针外表面上残留的样品。特别是比较粘稠的样品（如中药等），每天做完样后一定要洗针。 4) 关机
系统平衡好后，如果不再使用仪器和电脑。关闭检测器的紫外灯和氘灯，将泵的流速降为0。然后关闭电脑，最后关闭仪器各部件的电源。
7. 日常维护及注意事项
1) 泵
1. 放置了一天或以上的水相或含水相的流动相如需再用，需用微孔滤膜重新过滤。
2. 蠕动泵清洗瓶中的95%的水要求每周至少换二次。若液相使用频率不高，建议每天使用前更换，以免水长细菌损坏泵中各组件。 3. 为了保证P680的安全运行，必须设定高、低压极限（一般安装以设置好）；
4. 流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。若需要使用正相系统分析样品，需要另行安装耐腐蚀的正相密封圈。
5. 拧松快速清洗阀时，不宜拧得过松。一般拧松2圈左右即可。拧得过松流动相容易从清洗阀部位流进泵头中引起报警。
6. 使用快速清洗阀时，只能一个一个通道的排气泡，不得将几个通道同时按比例排气泡，比例阀的快速切换易导致损坏。
7. 没有配制脱气机的，流动相一定要超声脱气。有脱气机的，泵电源开启后，等脱气机停止工作后再进行泵的其它操作。
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2) 手动进样阀或自动进样器
1. 手动进样阀每天做完样后，一定要用甲醇冲洗定量环中的杂质。若样品为水系，则先用去离子冲洗定量环再用甲醇冲洗。 2. 自动进样器建议用50%的甲醇洗针。
3. 每天使用自动进样器进样前都要按一下控制面板上的“wash”键，仪器会自动排除定量环和针中的残留气泡。
4. 每天洗针前要检查一下洗针瓶中是否有洗液（50%甲醇）。 3) 柱温箱
1. 柱温箱一旦发生报警，一定要及时找到原因。若实验室湿度太高，则需采取相应的除湿措实。若柱温箱中发生漏液现象，则需及时拧紧色谱柱并擦干漏液，长时间的漏液极易损坏柱温箱中的传感器。 2. 若实验中使用了缓冲盐或其它电解质，在做完实验后，色谱柱一定要先用95%的去离子水清洗约60分钟，再用50%甲醇冲洗约30分钟，最后再用纯甲醇冲洗约40分钟。
4) 检测器
1. 检测器的紫外或可见灯在长长期打开的情况下，一定要保证有溶液流经检测池。若不需要做样，可设置一个较低的流速（如0.05ml/min）或关闭灯的电源。
2. 检测器的灯一般是在流通池有溶液连续流动几分钟后才开的。如果流动池中有气泡，则会提示漂移过大无法通过自检和校正。
3. 检测器的氘灯或钨灯不要经常开关，每开关一次灯的寿命约损失30小时。若仪器经常使用，可几天开关灯一次。
5) 整个系统
1. 缓冲溶液与有机溶剂互相转换前一定要用95%的去离子水清洗泵，
防止盐在有机相中结晶损坏泵中各组件。
2. 缓冲溶液的浓度不能高于0.5 mol/L，pH范围2～12，Cl-的浓度
要小于0.1 mol/L（防止腐蚀流路）。
3. 仪器长时间不用，每个泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保
存，以免结晶或造成污染。
4. 待测样品或标样在流动相中一定要易溶，否则进样后会结晶造成
定量不准确或堵塞色谱柱。 6) 软件
1. 不要轻易地在windows窗口下删除软件所在根目录或子目录下的
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文件，以免造成软件无法正常使用。
2. 仪器不使用时，密码狗不要经常拆来拆去，容易导致密码狗损坏。 3. 采集紫外信号时，若分析物质的最大波长已知，则尽量减少采集的通道个数，以免占用电脑的空间，特别是PDA-100检测器。 4. 软件系统的配置（Server Configuration）在软件安装完成后，不要改动。
5. 软件的控制面板和报告模板不要轻易使用“Layout”更改。
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