发布时间 : 星期四 文章扁蓄提取物杀螨活性的研究- 副本 - 图文更新完毕开始阅读c0a8a0c3162ded630b1c59eef8c75fbfc77d94c6
山东农业大学硕士学位论文１．４．５农业应用乙酸乙酯提取物对白岭Ｌｕｔｚｏｍｙｉａｌｏｎｇｉｐａｌｐｉｓ有良好的杀虫活性（ＲｏｊａｓｄｅＡｒｉａｓＡ等，１９９２）；其丙酮提取物对淡色库蚊Ｃ扰＾盟ｐｉｐｉｅｎｓｐａｌｌｅｎｓ的毒杀作用达９５％（黄钢等，２０００），丙酮提取物对粘虫的拒食效果为９０．５％（张兴等，１９９９）；其提取物能抑制赤拟谷盗种群生长（姜双林等，１９９９）；对菜青虫有较好的产卵忌避作用（王敬宇等，２００６）。此外对蚜虫、螟虫（徐汉虹，２００１）等也有一定的杀虫活性。其全草可用来防治稻瘟病Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａｇｒｉｓｅａ（全雪丽等，２００４）。１．５选题依据及意义植食性螨类个体小、繁殖快、种群密度大、危害重，是公认的难以防治的有害生物群落。据不完全统计，中国每年用于柑橘、苹果、梨、桃、棉花、蔬菜、小麦、茶等８类主要作物的杀螨剂防治费用就达９０多亿元，并且螨类对化学药剂的抗药性也逐年增加（杨会芝，２００７；侯辉等，２００４）。另一方面，化学农药在杀灭害螨的同时，也杀伤了天敌及其他有益生物，破坏了生态平衡，引起害螨的再猖獗，造成了化学农药应用的恶性循环。化学农药的这些缺点正在不断为人们所认识，寻找新型、高效、安全的杀螨剂已成为植保工作者的一个重要课题。植物源农药具有选择性高、低毒、易降解、害螨不易产生抗性等优点，而且它对目标害螨的天敌昆虫伤害较小（周宇杰等，２００６）。近年来从植物中筛选出高活性的物质，直接开发新的植物源杀螨剂，或以其为先导化合物合成新的更安全高效的农药，已成为国内外农药研究开发领域的一个热点（王海香，２００８；曹挥，２００３），因此植物源杀螨剂的研究开发具有重要的意义。蔚蓄为一年生草本植物，分布于全国大部分地区，其中河北、河南、山东产量较大。生长在田野、路旁、水边和湿地，在大田被视为杂草。可以充分利用篇蓄这一宝贵的杀虫植物资源。有关篇蓄应用于医学方面的研究较多，也有文献报道篇蓄具有对棉铃虫、小菜蛾、菜青虫的杀虫活性，但有关蔚蓄对朱砂叶螨的杀螨活性尚未见有报道。本文紧密结合当前生产实践，利用相似相溶原理，对蔚蓄提取物的杀虫活性物质进行１７蔓董堡壁塑鲞塑望堡堕塑壅初步分离，并对朱砂叶螨的生物活性及几个重要酶的影响进行了初步测定，为该活性物质的结构鉴定，毒理的深入研究及新型植物源农药的开发等工作奠定了良好的基础。２材料与方法２．１供试材料用来测试其杀螨活性的植物材料９种，分别为篇蓄、藿香、使君子、紫荆皮、石榴皮、鸡血藤、皂角刺、艾草、大风子，均购自北京某药店。２．２标准品９．十八碳烯酰胺、邻苯二甲酸二异辛酯、Ｂ．谷甾醇纯品经由国家标准物质标准样品信息中心购到。２．３供试害螨供试朱砂叶螨采自北京科技大学碧桃树，以大豆幼苗为该螨食料，在温度为（２５土１）℃，相对湿度为５０％，光照为（Ｌ：Ｄ为１８：６）条件下饲养１０代以上，培养成敏感品系。２．４试剂柱层析硅胶中国医药（基团）上海化学试剂公司石油醚北京北化精细化学品有限公司氯仿北京北化精细化学品有限公司甲醇北京北化精细化学品有限公司吐温８０广东汕头市西陇工厂无水乙醇天津博迪试剂有限公司乙酰胆碱酯酶（ＴＣｈＥ）试剂盒南京建成生物工程研究所谷胱甘肽．Ｓ．转移酶（ＧＳＴｓ）试剂盒南京建成生物工程研究所Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ试剂盒南京建成生物工程研究所３％戊二醛固定剂中国科学院原子能所１８山东农业大学硕士学位论文环氧树脂６１８＃１％锇酸无水乙醇丙酮和醋酸铀考马斯亮蓝磷酸中国科学院原子能所中国科学院原子能所中国科学院原子能所中国科学院原子能所美国ｓｉｇｍａ公司北京化工厂２．５主要仪器ＲＥ．５２．９８旋转蒸发仪Ｒ－２２０上海亚荣生化仪器厂瑞士步琪有限公司北京环亚天元机械技术有限公司上海禾汽玻璃仪器有限公司天津天河医疗仪器有限公司ＢＳｃｈｉ旋转蒸发仪ＨＹＰ．１５０破碎机、粉碎机６２０２层析柱可裁剪型硅胶板ＳＨＢ．皿．Ａ循环式多用真空泵郑州长城科贸有限公司日本奥林帕斯有限公司ＯＬⅥ唧ＵＳＳＺＸｌ６双目立体显微镜分液漏斗紫外可见分光光度计ＴＵ．１８１０广州市荔湾托普仪器有限公司北京普析通用仪器有限责任公司张家港长风机械有限公司德国Ｌｅｉｃａ公司日本Ｈｉｔａｃｈｉ有限公司Ａｇｉｌｅｎｔ公司离心机（ｍＭＡＣ）ＵＣ６０超薄切片机Ｈ－７５００透射电子显微镜６８９０／５９７３Ｎ型硅胶ＧＦ２５４青岛海洋化工厂青岛海洋化工厂柱层析硅胶Ｇ６０（１００－－２００ｕｍ）２．６气相条件气相色谱／质谱联用仪（Ａｇｉｌｅｎｔ公司，６８９０／５９７３Ｎ型，ＡｇｉｌｅｎｔＧ１７０１ＤＡ工作站，ＮＩＳＴ库）；Ｊ＆Ｗ１２８－３８２２（Ａｇｉｌｅｎｔ公司，２５ｍｘ２００（Ｏｒｇａｎ０２ｍａｔｉｏｎ公司，Ｎ２ＥＶＡＰ１２型）。ｐｍｘ０．３３１ａｍ）；高速冷冻离心机（Ｈｉｔａｃｈｉ公司，ＳＣＲ２２０Ｂ型）；氮吹仪质谱工作条件色谱与质谱接口温度：２８０℃；电离方式；电子轰１９篇蓄提取物杀螨活性的研究击源（ＥＯ；扫描方式：选择离子检测模式（ＳＩＭ）：电离能量：１．１２１５２３５２ｘ１０．１７Ｊ：溶剂延迟：５ｒａｉｎ；柱头压：０．６ｌＰａ。２．７试验方法２．７．１试材活性成分的提取将试材用高速粉碎机（型号６２０２，北京环亚天元机械技术有限公司）粉碎后，过４０目筛，放入冰箱（ＢＣＤ．２７８ＷＮＮ，青岛海尔股份有限公司）中贮藏备用。每种试材用石油醚、氯仿、甲醇等３种极性不同的有机溶剂分别浸泡，所用试剂均为分析纯，购自北京化工厂。称取一定量的试材干粉分别装入各自广口瓶中，加入干粉５倍量的溶剂，浸提３～５天后，低压浓缩。上述步骤重复３次，合并提取物。用天平（ＡＣ．ＣＵＬＡＢ）准确称取一定量的提取物，用适量的浸提溶剂（总体积的１０，．－２０％）进行溶解，待大部分溶剂挥发后加入１％吐温．８０混匀，等溶剂挥发干后，用蒸馏水稀释提取液，配成浓度为２ｍ幽ｍ的提取液。对成螨触杀活性的测试，采取ＦＡＯ（１９８０）推荐的玻片浸渍法并稍作改进。将双面胶带粘贴于玻片一端。用零号毛笔挑取大小一致、颜色鲜艳的活泼雌成螨，将其背部粘在双面胶带上，不可粘住螨足、口器及须肢，保证螨足自由活动，每片粘３０头。用双目解剖镜（ＳＺＷ．４５８３，浙江舜宇光电有限公司）检查剔除不合格的试螨；随后将试螨浸入提取液中轻摇５ｓ后取出，用吸水纸吸去螨体周围多余的提取液。每个处理重复３次，以蒸馏水加１％吐温．８０为对照。于２４ｈ、４８ｈ后在双目解剖镜下用毛笔轻触螨体，检查螨的肢体不动者为死亡。毒力测定时，提取液样品设置５个浓度梯度，每个处理重复３次，以蒸馏水加１％吐温．８０为对照。采用ＳＰＳＳ软件按几率值分析法进行线性回归分析，计算毒力回归方程、致死中浓度（ＬＣ５０）和ＬＣ５０值的９５％置信限。采用Ｄｕｎｃａｎ’ｓ法进行方差分析，用ａｂｂｏｔｔ公式计算校正死亡率（赵善欢，２０００）。２．７．２篇蓄提取物的初步分离