发布时间 : 星期五 文章江苏省新沂市高中生物第一章无菌操作技术实践1.1微生物的实验室培养一教案(选修1)更新完毕开始阅读d660049db5daa58da0116c175f0e7cd1842518a4
。 。 内部文件，版权追溯 内部文件，版权追溯 内部文件，版权追溯 1.1 微生物的实验室培养一
教学目标： 1、知识与技能： 了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术 2、过程与方法： 分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象 3、情感态度价值观： 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 教学重点： 无菌技术的操作 教学难点： 无菌技术的操作 教学方法： 启发式教学 教具使用： 多媒体课件，高压蒸汽灭菌锅及有关设备 共案部分 个案部分 教学教师主导活动 学生主体活动 过程 课前： 完成预习任务。 高压蒸汽灭菌锅及有关设备的准备，布置学生预习。 及时了解学生的预习情况，认真准备课堂教学内容。 课中： 学生展示： 引入：在传统发酵技术的应用1．1 培养基的种类 中，都利用了微生物的发酵作培养基的类型及其应用： 用，其中的微生物来自于制作1．2 培养基的化学成分 过程中的自然感染。而在工业从细胞的化学元素组成来化生产中，为了提高发酵的质看，培养基中为什么都含有哪些量，需要获得优良菌种，并保营养成分？ 持发酵菌种的纯度。这就要涉1．3 培养基应满足微生物生及到微生物的培养、分离、鉴长要求。 别等基本技术。现在我们开始牛肉膏和蛋白胨主要为微生学习微生物的培养和应用。 物提供哪些营养物质。 根据学生预习情况引导学生合活动2：阅读“无菌技术”，作探究，成果展示。 讨论回答下列问题： 重点强调高压蒸汽灭菌锅使用1．4 获得纯净培养物的关键的注意事项及安全问题。 是什么？。 1．5 无菌技术包括哪些？ 1．6消毒和灭菌区别？ 1．7 常用的消毒和灭菌方法教师进行实验演示，并指导学分别有哪些？ 生进行实验。 高压蒸汽灭菌锅使用注意事3．结果分析与评价 项有哪些？ 3．1 培养未接种培养基培养基的配制原则有哪些？ 的作用是对照，若有菌落形成， 说明培养基灭菌不彻底。 3．2 在肉汤培养基上，
1
大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。 3．3 培养12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。 〖思考1〗在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因有培养基灭菌不彻底或杂菌感染等。 〖思考2〗频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4℃冰箱中，每3～6个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，容易发生污染和变异；后者将菌种与无菌体积等量混合后保存在－20℃冷冻箱中。 安排学生进行课堂检测并进行讲评和总结。 板书设计 教学札记 课后： 布置课外作业及下一节预习提纲。（见导学案） 微培养基 生无菌技术 物 的培养基的配制 实 验 室 培纯化大肠杆菌 养 完成课堂检测。（见学案） 学生完成课外作业及下一节预习。 配制培养基的原则 配制培养基的方法 平板划线法 稀释涂布法 系列稀释 平板涂布 计算→称量→溶化→调pH→分装→加棉塞→灭菌→倒平板 2
三、其他补充教学资料（各位教师根据各班教学特点选择补充资料，可另附纸）
1．基础知识
1．1 培养基的种类包括固体 培养基和液体 培养基等。
〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的 多糖 ，在配制培养基中用作为 凝固剂 。 【补充】培养基的类型及其应用： 标准 培养基类型 配制特点 主要应用 固体培养基 加入琼脂较多 菌种分离,鉴定,计数 加入琼脂较少 菌种保存 物理性质 半固体培养基 液体培养基 不加入琼脂 工业生产，连续培养 合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 菌种分类、鉴定 化学组成 天然培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生，产降低成本 鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别 目的用途 选择培养基 添加（或缺少）某种化学成分 菌种的分离 1．2 培养基的化学成分包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 四类营养成分。
〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。 【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。
氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。
1．3 培养基除满足微生物生长的 pH 、 特殊营养物质 和 氧气 等要求。 【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。
〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供 糖 、 维生素 和 有机氮 等营养物质。 〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ，培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性 ，培养细菌时需要将pH调节为 中性或微碱性 。
活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：
1．4 获得纯净培养物的关键是 防止外来杂菌的入侵 。 1．5 无菌技术包括：
（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ；
（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。 1．6 比较消毒和灭菌（填表） 比较项 理化因素的作用强度 消灭微生物的数量 芽孢和孢子能否被消灭 消毒 较为温和 部分生活状态的微生物 不能 灭菌 强烈 全部微生物 能 〖思考5〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是 防止感染实验操作者 。 1．7 消毒方法：生活经常用到的是 煮沸 消毒法；
（2）对一些不耐高温的液体，则使用 巴氏 消毒法（作简要介绍）；
（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 石炭酸或煤酚皂 等溶液以增强消毒效果，然后使用 紫外线 进行物理消毒。
（4）实验操作者的双手使用酒精 进行消毒； （5）饮水水源用 氯气 进行消毒。 1．8灭菌方法：
（1）接种环、接种针、试管口等使用 灼烧 灭菌法；
（2）玻璃器皿、金属用具等使用 干热 灭菌法，所用器械是 干热灭菌箱 ； （3）培养基、无菌水等使用 高压蒸汽 灭菌法，所用器械是 高压蒸汽灭菌锅 。
3
（4）表面灭菌和空气灭菌等使用 紫外线 灭菌法，所用器械是 紫外灯 。
〖思考6〗对接种环灭菌时要用酒精灯的 充分燃烧 层火焰灼烧可能伸入试管或培养皿的部位。
〖思考7〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是避免妨碍热空气流通。
〖思考8〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是 有利于锅内温度升高 ；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 100k Pa，温度为 121℃ ，并维持 15～30 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至 零 时打开锅盖，其目的是防止 容器中的液体暴沸 。
【补充】培养基的配制原则：
①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。 ②营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比4∶1时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3∶1时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。
③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。
4