发布时间 : 星期三 文章活性炭吸附分离琼胶酶解所得寡糖及其TLC检测更新完毕开始阅读da9c588d76a20029bd642d79
活性炭吸附分离琼胶酶解所得寡糖及其TLC检测 1 粗酶液制备
将吴越09年8月31日的发酵液经4500r/min离心10min.取上清液得粗酶液，记为MY-2，保存于4℃冰箱备用。 2 酶解底物制备
称取琼脂0.9994g,加入500ml蒸馏水，煮沸溶解，冷却至35℃，装入1000ml烧杯。 3 酶解制备酶解产物
于500ml底物中加入100ml粗酶液MY-2，置于35℃摇床静置酶解。酶解48h。 4 活性炭预处理
将36g活性炭先以10%的稀盐酸200ml浸泡过夜。倒出稀盐酸，加入200ml无水乙醇浸泡，再倒出无水乙醇加入蒸馏水浸泡，最后将活性炭80℃烘干备用。 5 酶解产物的活性炭吸附分离
将酶解液置于沸水浴10min中断酶解反应。抽滤除去未酶解的琼脂。酶解液体积约为380ml。取5ml该液记为H0存于4℃冰箱。36.56g活性炭加入吸附30min以上。抽滤，滤液记为H1，取5ml存于4℃冰箱。活性炭加入10%乙醇250ml，平衡30min以上。抽滤，滤液记为H2，活性炭加入20%乙醇250ml。平衡30min以上。抽滤，滤液记为H3。活性炭加入30%乙醇250ml。平衡30min以上。抽滤，滤液记为H4。活性炭加入无水乙醇250ml。平衡30min以上。抽滤，滤液记为H5。将各滤液45℃旋蒸浓缩后，45℃真空干燥，最后冷冻干燥（H5未冷冻干燥）。所得H1重1.5166g。H2重0.2941g。H3重0.2303g。H4重0.1509g。H5重0.1317g。H1中以盐为主，H2、H3、H4、H5共重0.8070g且以糖为主，故总糖粗得率为80.75%。 6 寡糖的TLC检测
将目标物溶于一定量水或50%的乙醇，以玻璃点样毛细管将目标溶液点于硅胶板上，以不同的展开剂展开，展开后凉干或吹干，再喷上显色剂百里酚-硫酸，置于80℃显色数分钟。
H1、H2、H3、H4在自制硅胶G板上于展开剂正丁醇：乙酸：水（2：1：1）中展开后显色。由图显示H1中含糖量极低，H2、H3、H4中含有类似多种聚合度寡糖。
H5在自制硅胶G板上于展开剂正丁醇：乙酸：水（2：1：1）中展开后显色。由图显示H5中主要含有高聚合度的糖。
H1、H2、H3、H4在胶G板（购于青岛海洋化工厂分厂）上于展开剂正丁醇：乙酸：水（2：1：1）中展开后显色。由图显示H1中含糖量极低，H2、H3、H4中含有类似多种聚合度寡糖。