发布时间 : 星期一 文章生物物质分离工程实验(10级版本).更新完毕开始阅读e680f5382379168884868762caaedd3383c4b52a
m=f(c),这个函数关系称为吸附等温线。吸附等温线表示平衡吸附量，并可用来推断吸附剂结构、吸附热和其他理化特性。
本实验采取XAD大孔树脂对水溶液中苯酚的吸附行为来绘制吸附等温线。 三、试剂与器材
试剂：苯酚、去离子水、XAD大孔树脂 仪器：1L容量瓶一个、250ml容量瓶5个、250ml锥形瓶5个、紫外及可见分光光度计、 摇床 四、 操作方法
1.大孔树脂的预处理（老师已处理）
将新购的大孔树脂放在烧杯中，加入足量的水，使其溶涨至体积不在增加为止，然后倒入内有少许水的交换柱，使管内树脂量不超过管长的 1/2以上，水在柱内的高度没过树脂。装好柱后，先缓慢地让水从柱的底部流入反洗，并逐渐加速，使树脂全部移动，直至树脂内的气泡全部赶出，同时悬浮不洁 物、破碎及过小颗粒从管顶逸出为止。然后再用甲醇或95%乙醇或丙酮浸泡24h后再上柱用95%乙醇冲洗，直至无色并澄清后，再用水洗至无醇味即可，也可将树脂与有机溶剂一起在水浴上回流，直到洗涤液加水混合后不呈白色浑浊为止，最后用水洗掉所用的有机溶剂，备用。 2.苯酚标准曲线的建立
准确称取1g苯酚置于1L容量瓶中，用去离子水定容。以其为母液再配制浓度分别为、10、20、30、40、50mg/L的苯酚水溶液250ml。用紫外及可见分光光度计在270nm处检测溶液的吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出标准曲线。
3.取5个250ml的锥形瓶，分别加入干燥的XAD树脂0.25g，然后分别加入质量浓度为10、20、30、40、50mg/L的苯酚溶液各100ml。以150r/min的振荡速度在25℃下振荡24h(实际0.5 hr)以上（或用手摇瓶0.5 hr以上）。 3.振荡完以后分别取样，在270nm处检测苯酚的残留浓度。 平衡吸附量用下面公式计算：
m=(C0-Ct)V/M
式中：m为平衡吸附量，mg/g；C0为溶液的初始浓度，mg/L；Ct为吸附平衡后溶液的浓度，mg/L；V为溶液的体积，L；M为树脂的重量，g。
4.以溶液的初始浓度C0为横坐标，平衡吸附量为纵坐标作吸附等温线。 五、 结果分析与讨论
1. 说明大孔吸附树脂的吸附原理？ 2. 操作过程中应注意的问题？
本实验用树脂含水量测定：
732型：40%；330型：32%；717型：39.8%；大孔吸附树脂：24.6%
9
实验八 鸡蛋清溶菌酶的分离与纯化（第四次实验）
一、实验目的和要求
掌握从蛋清制备溶菌酶的原理和方法（等电点沉淀和盐析法）。 二、实验原理
溶菌酶存在于植物（植物浆）及动物（蛋清、白血球、泪液、脾脏及鼻粘膜处）组织中。 蛋清取材方便，溶菌酶含量丰富（可达0.3％），实验室及生产中均以蛋清为材料提取溶菌酶。溶菌酶作用于粘多糖，使其糖苷键水解，因此可溶解以粘多糖为主要成分的细菌细胞壁，起到杀菌的作用。 pI为10.8-11.3
由于蛋白质在等电点时溶解度最低，所以蛋白质的沉降在等电点附近最为显著。若控制溶液的pH在等电点附近，并增加盐的离子强度，使蛋白质处于沉降前的“临界状态”，在适当的温度下，静置若干时间，蛋白质会以结晶的形式从溶液中析出。加入晶种，能控制晶体的形状、大小和均匀度，若结晶液浓度太低而结晶发生困难时，可适当加入些晶种，能使结晶顺利进行。 三、实验试剂和器材：
（1）试剂：新鲜蛋清的pH值大于8才能提取溶菌酶
新鲜蛋清、NaCl、1M的NaOH溶液、1M的盐酸、五氧化二磷、丙酮、3％醋酸 溶菌酶晶种（5％的无定形溶菌酶溶液10ml，加入NaCl为0.5g，再用1M的NaOH溶液
调pH至9.5－10.0，4℃静置5－6天，溶菌酶即结晶出来）等
（2）器材：
组织捣碎机（或电动搅拌机）、纱布、大烧杯、玻璃棒、冰箱、pH试纸、真空干燥器、多用循环水真空泵、布氏漏斗等 四、实验步骤 1、 生产工艺路线：
已称重的烧杯，再称出蛋清和蛋黄的总重量，蛋清要用量筒量出体积）
2、 操作方法：（3人一组，每人1个鸡蛋，分离蛋清和蛋黄备用，3个蛋清和蛋黄分别倒入
（1） 分离蛋清和蛋黄：将蛋清与蛋黄分开，除去脐带块。并称蛋清质量W和量其体积V。 （2） 搅拌蛋清：新鲜蛋清收集后用组织捣碎机（或电动搅拌机）缓慢搅拌5min（以不起
大泡泡为度，避免酶受剪切力作用被破坏），或直接用玻棒轻轻搅拌半小时左右（，
10
再用纱布过滤，取滤液备用。不做）
（3） 加NaCl：每小组按20ml蛋清液：1g NaCl的比例加入NaCl固体（注意NaCl要研
磨碎，一点点加，边加边缓慢搅拌，要防止局部盐浓度过高导致蛋白质变性），搅拌至完全溶解。
（4） 调pH值：NaCl完全溶解后，逐滴加入1mol/L的NaOH（一定要缓慢并均匀，边加
边缓慢搅拌，防止局部过碱，蛋白质变性），调溶液pH为9.5－10.0。（用pH酸度计或精密pH试纸调）
（5） 加晶种：在碱化的蛋清液中，滴加少量溶菌酶晶种，置于4℃冰箱中，静置一周左
右，观察溶菌酶结晶的出现。（因溶菌酶浓度太低晶体不容易析出，每个小组写好标记再放入冰箱，以免混淆）。
（6） 必要时可重结晶：一周后，离心收集溶菌酶粗品，离心机转速4000rpm/min，离心
10min。收集溶菌酶粗品，称重（用于计算湿溶菌酶粗品的得率）。（溶菌酶粗品用3%的醋酸调溶液pH到4－4.5，晶体溶解后再4000rpm/min，离心10min，除去不溶物，得上清液。按上述方法再加入NaCl，并用1mol/L的NaOH调溶液pH为9.5－10.0后，于4℃冰箱中，静置一周，进行重结晶。此部分省略）
（7） （布氏漏斗抽滤收集结晶，冷丙酮洗涤晶体除去多余水分，在P2O5的真空干燥器中
进行真空干燥（干燥器中可放一盆石蜡屑，以便吸收除去剩余的丙酮），干燥后得到溶菌酶的结晶成品，称重，计算得率。）此步骤省略
五、结果分析与讨论：
1、 在碱化的溶菌酶液中为什么要加入晶种？如何制得溶菌酶晶种？ 2、 总结本实验的关键步骤及注意事项？
实验九 蛋黄中卵磷脂的分离纯化和定性鉴定（第四次实验）
一、实验目的和要求 1、 了解卵磷脂的性质。 2、 学习提取卵磷脂粗品的方法。 二、实验原理
机体的各种组织和细胞均含卵磷脂。在蛋黄（约10％）、神经、精液、脑髓、骨髓、肾上腺、心脏、蘑菇和酵母等组织内含量很高。卵磷脂分子中具有亲水基团和疏水基团，卵磷脂具有降低表面张力的作用；卵磷脂被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”，蛋黄卵磷脂可将胆固醇乳化为极细的颗粒，这种微细的乳化胆固醇颗粒可透过血管壁被组织利用，而不会使血浆中的胆固醇增加，可作为药物用于动脉粥样硬化等疾病的综合治疗。
纯卵磷脂（即磷脂酰胆碱）为白色蜡状块，不溶于水，易溶于醇、氯仿、乙醚和二硫化碳中，但不溶于丙酮，利用后一性质可与中性脂肪分离。
11
三、实验试剂和器材：
（1）试剂： 新鲜蛋黄、95％乙醇、10％的NaOH溶液、丙酮、乙醚
（2）器材： 磁力搅拌机（或玻棒）、减压真空浓缩装置、恒温水浴锅、冰箱、多用循环水真空泵、布氏漏斗、玻璃漏斗、玻璃棒、小烧杯等 四、实验步骤 1、 制备工艺路线：
2、 操作方法：
① 抽提：按照实验八剩下的蛋黄（3个）的质量，加入2倍质量的预热至35℃－40℃的95％乙醇，可按体积、密度计算（不需很精确）（注意一定要缓慢的加入，边加边缓慢搅拌，否则会出现沉淀得不到抽提液），加入乙醇后，不断搅拌10－12小时（由于时间关系，具体实验时改为1.5~2小时），离心得上清液（4000r/min，5分钟）。
② 浓缩：将上述上清液减压真空浓缩或沸水浴蒸发，（要做好标记，注意要防止盛有抽提液的瓶子歪倒在水浴锅，造成浪费）至原体积的1/6左右。
③ 去杂：在搅拌下加入浓缩后等体积的乙醚（要缓慢），不断搅拌并放置2小时（由于时间关系，具体实验时改为10分钟），使不溶物沉淀完全。过滤除去杂质，收集上清液（乙醚澄清液）。注意事项同步骤（1）。（由于时间关系，该步骤省略）
④ 沉淀卵磷脂：在急速搅拌下加入与上清等体积的预冷丙酮（丙酮在冰箱里），即开始出现卵磷脂沉淀，用滴管吸取，做鉴定。（抽滤，收集并再用丙酮洗涤，挥发去乙醚丙酮残液，真空干燥得块状成品。不做）
⑤ 定性鉴定卵磷脂：取制品少量置于试管中，加入20％的NaOH溶液约2ml，于沸水浴煮沸，卵磷脂分解生成胆碱，胆碱在碱的作用下，形成三甲胺。注意：三甲胺有明显的鱼腥味。 五、结果分析与讨论：
5、 第一步为什么要用预热至35℃－40℃的95％乙醇抽提产品？ 6、 浓缩是为了去水还是去醇？为什么要浓缩？
12