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附件5
化妆品中诺氟沙星等10种喹诺酮类
禁用物质的检测方法
1 适用范围
本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中10种禁用物质：依诺沙星（CAS号：74011-58-8）、氟罗沙星（CAS号：79660-72-3）、氧氟沙星（CAS号：82419-36-1）、诺氟沙星（CAS号：70458-96-7）、培氟沙星（CAS号：70458-92-3）、环丙沙星（CAS号：85721-33-1）、恩诺沙星（CAS号：93106-60-6）、沙拉沙星（CAS号：98105-99-8）、双氟沙星（CAS号：98106-17-3）、莫西沙星（CAS号：151096-09-2）的检测方法。
本方法适用化妆品中禁用物质：依诺沙星、氟罗沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、莫西沙星含量的测定。 2 方法提要
样品经过提取后，用液相色谱-串联质谱法测定，以多反应离子监测模式进行监测，采用特征离子丰度比进行定性，待测化合物峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限、定量限和取样品0.5 g时的检出浓度、定量浓度见表1。
表1 10种违禁成分的检出限和检出浓度
化合物 依诺沙星 氟罗沙星 氧氟沙星 诺氟沙星 培氟沙星 环丙沙星 恩诺沙星
检出限（ng/mL） 定量限（ng/mL） 检出浓度(μg/g)
10 4.0 10 10 4.0 4.0 1.0
20 10 20 20 10 20 2.0
0.50 0.20 0.50 0.50 0.20 0.20 0.050
定量浓度(μg/g)
1.0 0.50 1.0 1.0 0.50 1.0 0.10
沙拉沙星 双氟沙星 莫西沙星 3 试剂和材料
2.0 4.0 4.0
4.0 10 10
0.10 0.2 0.2
0.20 0.50 0.50
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 3.1 乙腈，色谱纯。 3.2 甲酸，色谱纯。 3.3 氯化钠，分析纯
3.4依诺沙星、氟罗沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、莫西沙星对照品（纯度大于98%）。
3.5 40%乙腈溶液[φ（乙腈）= 40%]：量取40 mL乙腈于100 mL量瓶中，加入1 mL甲酸，用水稀释并定容至刻度，摇匀。
3.6 饱和氯化钠溶液，称取40 g 氯化钠，置于250mL磨口锥形瓶中，加入100 mL水，超声15分钟，即得。
3.7 2%甲酸溶液：量取200mL水于500mL量瓶中，加入10mL甲酸，用水稀释并定容至刻度，摇匀。
3.8 混合标准储备溶液 [?（待测成分）= 1 mg/mL]：精密称取依诺沙星、氟罗沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星、莫西沙星对照品（3.4）10 mg（精确至0. 1 mg）置于同一10 mL量瓶中，加40%乙腈溶液（3.5）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为1 mg/mL的混合标准储备溶液。
3.9 系列浓度标准工作溶液：用40%乙腈溶液（3.5）稀释混合标准储备溶液，精密配制得质量浓度为10、25、50、100、200、500 μg /mL的系列浓度标准溶液。 4 仪器
4.1 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。 4.2 分析天平：感量0.0001 g。 4.3 分析天平：感量0.00001 g。
4.4 超声波清洗仪。 4.5 离心机。 4.6 涡旋混合仪。 5 测定步骤 5.1 样品处理
准确称取样品约0.5 g（精确至1 mg），置于25 mL比色管中，加入1 mL饱和氯化钠溶液（3.6），涡旋30 s后加入2%甲酸（3.7）15 mL，涡旋10 s后，加入乙腈（3.1）5mL，涡旋30 s，超声提取30 min，加入乙腈（3.1）定容至刻度，涡旋1min，4500 rpm离心5min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为待测液备用。 5.2 系列浓度基质标准工作溶液制备
准确称取空白样品约0.5 g（精确至1 mg），置于25 mL比色管中，分别加入系列浓度标准工作溶液（3.9）50 μL，按照“5.1 样品处理”步骤进行前处理，即得质量浓度为1、2.5、5、10、20、50 μg /g的系列浓度基质标准曲线工作溶液（随行基质标准曲线采用的空白样品的性状应与待测化妆品基本一致）。
5.3 液相色谱-三重四极杆质谱联用分析条件 5.3.1 色谱条件
色谱柱： 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 (2.1*100mm, 3.5 μm)。
流动相：溶液A： 0.2%甲酸，溶液B：乙腈（含0.2%甲酸），梯度程序见表2；
表2 流动相的梯度程序
时间（min）
0 3 7 9 9.5 16
溶液A（%）
90 90 70 20 90 90
溶液B（%）
10 10 30 80 10 10
流速：0.4 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：1 μL。 5.3.2 质谱参考条件
离子源： 电喷雾离子源（ESI源）。 喷雾压力： 40 psi。 干燥气流速： 10 L/min。 干燥气温度： 350 ℃。 毛细管电压： 4000 V。
0 ~ 3 min：不进入质谱仪分析, 3 ~ 16 min：进入质谱仪分析。
监测模式： 正离子监测模式； 监测离子对及相关电压参数设定见表3。
表3 三重四极杆离子对及相关电压参数设定表
编号 1
物质名称 依诺沙星
母离子（m/z）
320.9
Frag.(V) 130 130
2
氟罗沙星
369.9
150 150
3
氧氟沙星
361.9
130 130
4
诺氟沙星
319.9
130 130
5
培氟沙星
333.9
130 130
6
环丙沙星
331.9
130 130
7
恩诺沙星
359.9
130 130
子离子（m/z） CE（V） 233.9* 276.9 325.9* 268.9 317.9* 260.9 275.9* 232.9 289.9* 232.9 287.9* 244.9 315.9* 244.9
20 15 20 25 20 30 15 20 15 25 15 20 20 30