霉菌的培养与形态观察 联系客服

山东大学实验报告 20年 月 日

姓名 系年级 学号 科目 题 目 组别

同组者:

一、【目的要求】

1. 学习并掌握霉菌的形态观察法——小室培养法;

2. 了解四类常见霉菌(青、根、毛、曲霉)的形态特征; 3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。

二、【实验原理】

1. 霉菌可产生分枝的菌丝体,分为基内菌丝和气生菌丝,气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝,由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据(本次实验观察青霉、曲霉、根霉和毛霉菌四种霉菌)。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约 3-10μm),常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍,因此,用低倍显微镜即可观察。

2. 观察霉菌的形态有多种方法,常用的有直接制片观察法、载玻片培养观察法和玻璃培养观察法三种方法,本次实验采用载玻片培养观察法(小室培养法)。 3. 载玻片培养观察法(小室培养法):用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上,接种后盖上盖玻片培养,霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后,将载玻片上的培养物置于显微镜下观察。这种方法既可以保持霉菌自然生长状态,还便于观察不同发育期的培养物。

三、【实验器材】

1. 菌种:

曲霉,青霉,根霉和毛霉培养 7d 的马铃薯琼脂平板培养物 2. 培养基:

马铃薯培养基(简称PDA)(配方见附表) 3. 仪器和其他用品:

平皿,载玻片,盖玻片,无菌吸管,U 型玻璃棒,解剖刀,镊子,50%乙醇,20%甘油,显微镜,接种环,酒精灯等

四、【实验内容】

1. 配培养基:根据报告后附录准确称取实验所需各种物质的质量,配置PDA培养基150ml,

121℃灭菌20分钟;

2.培养小室的准备及灭菌:在八个平皿底部各铺一张略小于皿底的圆滤纸片,再各放一个

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U形玻璃棒,其上各放一洁净载玻片和四块盖玻片,盖上平皿盖,加上两个空平皿,包扎后于121℃灭菌30分钟,烘干备用;

3.琼脂薄片的制作:取已灭菌的马铃薯琼脂培养基分别注入两个灭菌平皿(事先在平皿底

部画上1cm X 1cm或1.2cm X 1.2cm的方格)中,使之凝固成薄层。通过无菌操作,用解剖刀将其切成小琼脂块,并将其移至上述培养室中的载玻片上(每片放两块 ); 4.接种:通过无菌操作,用接种环从斜面培养物上挑取很少量的孢子,接种于培养小室中琼

脂块的边缘上,用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上,每个菌种接种两个平皿; 5.培养:通过无菌操作,在培养小室中的圆滤纸上加 3ml 灭菌的20 %的甘油(用于保持平

皿内的湿度 ) ,盖上皿盖,28 ℃ 正置培养一周;

6.镜检:根据需要可以在不同的培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察,必要时换高倍镜。

记录观察结果。

注意事项:①载玻片培养观察中,注意无菌操作,接种量要少;

②尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上,否则培养后菌丝过于稠密影响观察 。

五、【实验结果】

菌种 (1)四种霉菌形态特征对比 曲霉 根霉 毛霉 菌丝无隔、多核、分枝状,有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至数根孢囊梗,其顶端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托,中间有球形或半球形囊轴。囊内产大量孢囊孢子,有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊,配子囊双双异宗配合形成一接合孢子。 青霉 形态特征 营养菌丝具有分隔;气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗,顶端膨大成球状顶囊,表面辐射出一层或两层小梗,小梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足细胞上,并通过足细胞与营养菌丝相连。 菌丝有横隔,分生孢子梗亦有横隔,光滑菌丝无隔、多核、或粗糙。基部分枝状,无假根无足细胞,顶或匍匐菌丝。菌端不形成膨大丝体上直接生出的顶囊,其分单生、总状分枝生孢子梗经过或假轴状分枝的多次分枝,产孢囊梗。各分枝生几轮对称或顶端着生球形孢不对称的小子囊,无囊托。 梗,形如扫帚,称为帚状体。小梗顶端有孢子。

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(2)显微镜下四种霉菌形态对比:

青霉菌(10X40) 根霉菌(10X40)

毛霉菌(10X40) 曲霉菌(10X10)

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曲霉菌足细胞放大(10X40)

结果分析:显微镜下都能观察到四种霉菌的菌丝体和孢子,且四种霉菌的形态对比非常明显,

霉菌培养结果较好。

六、【思考题】

1. 黑根霉和黑曲霉在形态特征上有何区别?

答:黑曲霉的营养菌丝具有分隔;气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生孢子梗,顶端膨大成球状顶囊,表面辐射出一层或两层小梗,小梗上着生成串的球形分生孢子。分生孢子梗生于足细胞上,并通过足细胞与营养菌丝相连;

而黑根霉菌丝无隔、多核、分枝状,有匍匐菌丝和假根。在假根的上方直立地生长出一至数根孢囊梗,其顶端膨大成球形孢子囊。囊的基部有囊托,中间有球形或半球形囊轴。囊内产大量孢囊孢子,有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊,配子囊双双异宗配合形成接合孢子。

七、【附表】

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