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利用大蒜根尖培养微核
一、 实验目的
1. 学习化学因素诱发植物染色体变异及产生微核的实验技术； 2. 检验诱变剂量与诱变效应的相关性
3. 检测洗衣粉、洗发水对大蒜的遗传毒理效应
二、 实验原理
植物细胞微核技术是根据遗传学上染色体畸变的原理而建立的一种环境污染的生物监测方法。植物细胞在有丝分裂或减数分裂的早前期,如受到有害因子的攻击,可能发生染色体断裂,产生染色体片断,这些片断就游离在细胞质中,形成大小不同的小核,即微核。环境中的诱变物越多,形成的微核就越多,因此可以根据微核的多少,说明诱变物强弱。
【1】
微核是真核生物细胞中的一种异常结构，在间期呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核的1/3以下。微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生，一整条或好几条染色体也能形成。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥，便形成了第三个核块。微核率大小同用药剂量或辐射积累效应呈正相关，因此可用简易的间期微核技术来代替繁杂的中期染色体畸变计数。
三、 实验材料
大蒜根尖
四、 仪器、药品、用具
显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、电子天平、量筒、冰箱、恒温箱或水浴锅、培养皿、青霉素小瓶、镊子、洗瓶等
卡诺氏固定液、95%酒精、1N盐酸、改良苯酚品红染液
五、 实验内容和方法
1、大蒜培养
大蒜浸水催根将剥皮的大蒜放入培养皿中 ，倒入清水使大蒜根部没入水中，置于25℃下培养 48 小时，待初生根长出 1-2cm 左右，根毛发育良好，即可用来检测。
在材料剪取前将大蒜移入4 ℃冰箱内处理24 h，经低温处理后再移出室温下恢复培养，待根尖长至1.5～2.0 cm后即可进行观察。其原因是经过接近0 ℃的低温处理后，可抑制纺锤体的形成，因此，在4 ℃时，不仅大蒜根尖积累了很多前、中、后、末期的细胞，而且染色体比较粗短，典型的分裂相大大增多。（这步可省略）
【3】
【2】
2、待测液处理（1天）
取材最好在上午10点
3、恢复培养
将处理过2 d的洋葱再次移入蒸馏水中继续培养1 d。
4、根尖固定（1天）
将根尖放在卡诺氏固定液（Carnoy’s Fluid，纯酒精∶氯仿∶冰醋酸=6∶3∶1）中固定1～2 h，然后依次在体积分数为95%，85%，80%的酒精中各浸3～5 min，最后转入70%的酒精中保存备用。
5、解离
将根尖放入培养皿中加入1mol/L 盐酸，65℃下解离10min，解离完毕后用吸管将解离液吸干净，加入蒸馏水多次漂洗。
6、染色
用干净刀片将洋葱根尖和延长区切去,将余下根尖切碎,用改良苯酚品红染色 5 min 。
7、制片观察、微核计数
常规压片,在40 x 10倍显微镜下识别各项指标.每个浓度至少观察6个根尖,每个根尖至少观察1 000个细胞.
微核千分率(MCNF)= (观察细胞中具有微核的细胞数/所有观察的细胞总数)×1 000/‰
实验结果
1.洗衣粉组实验数据
视野 浓度（g/L） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1总微核率 0 数 0.125 1 3 2 0 5 0 1 1 0 1 14 14‰ 0.25 1 2 1 2 16 1 1 2 3 1 30 30‰ 0.5 1.0 2.0 4.0 0 0 3 1 1 0 3 3 3 3 17 17‰ 2 2 0 0 1 1 1 1 1 0 9 9‰ 0 0 1 0 2 0 0 0 1 0 4 4‰ 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 1‰ 1‰ 对照 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1
微核总和353025201510500.1250.250.51241714941微核总和30