发布时间 : 星期二 文章欧洲细胞遗传学指南和质量控制更新完毕开始阅读f06d9614c850ad02df80412e
练，而且了解标准操作流程。 4.2 仪器与设备
重要仪器每年都要维修保养。实验室的所有仪器与设备都应达到欧盟认可的标准。（委员会导则93/68/EEC: 1993）为使仪器故障降到最小,所有重要设备都应由两份(比如两个培养箱，两台离心机等)。如果由于任何原因致使仪器设备没有备份，实验室应写上“仪器故障”以避免实验工作的失败。 4.2.1 安全柜
所有细胞遗传有关的新鲜标本都有可能携带危险的病原体比如乙型肝炎病毒阳性的血标本。 适当的安全柜应用于储存生物材料，见欧盟导则(93/88/EEC)。应避免使用水平式层流柜，因为他们不能为工作人员提供任何保护。许多国家有自己的一套关于工作人员保护措施，样品和工作环境的准则规程。如果没有国家级的标准，建议参考相关文件，比如——欧盟导则 (93/88/EEC), HSC,危险治病原咨询委员会,无菌实验室的管理设计和运行 (ISBN 0717620344) 或德国ZKBS咨询委员会。 4.2.2 培养箱
所有培养箱和其它重要的仪器应安装报警器避免温度和CO2(需要使用的)失控，建议采用中央警报系统。从事产前诊断的实验室应至少有两台培养箱以分线培养样品。无论是否用于产前诊断，培养物最好都分开培养，将细菌交叉污染的几率降到最小。 4.2.3 成像系统
为保证提供高质量的服务，所有图像分析系统应定期维护进行软件升级。图象处理系统的数量不应成为样本分析诊断的限制性因素。使用图象处理系统时，分析过程的一个步骤或初始分析应当事先用显微镜确认是否忽略了小标记染色体和附加染色体。为避免由图像分析系统故障引起的不必要的工作耽搁，强烈建议制定服务协议。 4.3 细胞遗传学技术方面 4.3.1细胞培养
如果条件允许，建议所有类型标本的细胞培养均分两线培养或各自独立操作培养。
4.3.2 显带
所有核型分析都要用显带技术进行分析。除了一些染色体断裂综合征, 每份报告都没有包括所有水平的带型should a report be issued without cells having been subjected to full analysis of the banding pattern for the whole chromosome complement. ISCN 规定了五个水平的带型。这可以作为建立诊断结果要求的分辨率水平的指南。已经发展了几种有助于评定现代技术的方法。有些国家比如德国和英国使用另外方法，用指定质量记分表示染色体带型在250 (QAS 2), 350 (QAS 4) and 550 (QAS 6) bphs分辨率条件下是否可见。在ACC (www.cytogenetics.org.uk under info) 、BVDH(www.gfhev.de/en/membership/ under quality management) 网页可查到更多相关信息。必须依据合理原因在带型水平上排除数目和结构畸变。必须使用一种或一种以上客观的可重复性方法来评估带型分辨率并把这些记录到实验设计书或使用指南。应当使用评估带型质量的标准化方法，这个经过协定的最低标准可以根据病例的情况不同。完全分析是已经根据病例情况在特定水平排除数目和结构异常，必须使管理人满意。具体的分辨率标准应当切合病例和研究的组织类型的需要。400 bphs (QAS 4)水平是细胞遗传学体制中建立通用非整倍体研究的最低分辨率水平。550 bphs (QAS 6)水平应该是检查智力迟钝，出生缺陷，异形儿童或复发流产的夫妇的最低标准。 由于病例原因在不能达到最低质量的情况下，并且临床上没有检查到明显的异常，检查报告应该适当地受到限制，同时没有临床许可的情况下不鼓励重复地进行侵入性操作。 4.4 诊断
4.4.1核型/染色体分析
总的来说，原则上至少要完全分析5个细胞，对于血液病的诊断至少要10个。如果分裂中期的染色体完全成同源染色体对 (包括 X& Y)、逐条带地排列好以后,然后再至少完全分析三个中期分裂相。如果发现一对同源染色体的一条与其他染色体重叠，那么这对染色体应当涉及到与其它染色体的交叠。同源染色体对应分别单独地计数确保没有结构重排。根据实验室规定，可能还需加量计数细胞。当临床指征或怀疑为嵌合体时，拓展分析和/或细胞计数是是受到保证的。实验室应该将分析标准写入实验设计。应在细胞遗传学体制上和血液病学分析中应该完
全分析超二倍体、亚二倍体以及多倍体细胞。每个病例都要有图像资料或至少一张存片用于以后复检(见 11.12.1节)，参考现行的ISCN，定义异常的细胞克隆。 4.4.2 核对
由另外一名合格的细胞遗传学工作者和对所有病例核对是必要的。一名高级监管员或一名经验丰富的细胞遗传学工作者应该对所有检查诊断结果核对。 4.5 引进新实验技术
当开展任何一项新的诊断服务时，实验室应提供一份试验设计给培训人员并测试新仪器。这样，病人就不会因不适当的仪器/载玻片等操作面临得不到及时准确诊断的风险。其中一种方法是分离样品，并把一半分给有经验的实验人员做直到新手达到必要水平。要求这些操作程序经验证可靠and SOPs 。 4.5.1 分子生物学技术的应用
分子遗传学技术比传统的细胞遗传技术敏感性好，只要方法可靠，就可以应用( 比如对于Angelman或者Prader Willi综合征，其它为缺失综合征，脆性X综合征等)。如果实验室不能进行这些诊断，可能导致病人再诊。对于大多数病人，仍要求排除其他染色体异常。
5.特殊的染色体诊断 5.1产前诊断 5.1.1 羊水细胞培养
为将标本污染和培养箱故障导致的培养失败的几率降到最小，最好将标本分两线培养、操作，置于不同培养箱中培养。如果条件允许，机器连接于不同的电路。产前诊断的培养物应当用两种细胞培养基培养或者用不同批次相同细胞培养基和其它试剂。必须意识到母源细胞污染，假嵌合体，真嵌合体和体外畸变的可能性和设计的用于检测和区别这些问题的培养和分析系统。应避免来自同一样品的所有细胞培养物同时收获和接种。可能的话，应一直储存培养物直到有最终结果。要有设备用来冷冻有活力的细胞，比如未解决的异常胚胎病理学病例。 5.1.2 绒毛膜绒毛培养
绒毛标本培养前必须分离，把母源蜕膜从绒毛分离以降低母源细胞污染的几率。要治疗安排表格上明确知道样品在到达实验室前是否已经分离。若起初的细
胞遗传学诊断建立于短期制备法，还应长期培养，确认前种方法的可信性，将无法解释或解释不清诊断结果的可能性减少到最小。 (Eucromic 1997,ACC Collaborative study, 1994). 不推荐仅依据短期培养制备的分析法（直接制备）(Eucromic 1997, ACC Collaborative study, 1994)。若样品不足以同时做短期和长期培养，建议以长期培养法的结果分析。 5.1.3 胎血培养
应确保胎儿血样没有母血污染，仅来自胎儿。可用几种血液病学方法(碱性磷酸酶, Kleinhauer, Coulter counter sizing)。除特别原因，胎血和羊水标本都应分析。比如异常的胎血诊断结果和妊娠终止。 5.1.4 产前诊断中的嵌合体
每个标本应同时培养两线或三线。第二线和第三线培养物的诊断在可疑的嵌合体或假嵌合体病例中至关重要。比如2号染色体三体或不符合胚胎继续发育的异常(见Hsu等，1996, 1997)。总的来说，如果在两线培养物中都出现了同样的异常，确定为嵌合体。因为在原位培养中，如果不是来自相同的克隆对一个培养细胞的分析可能已经足够。但是，建议至少培养两线这样可以排除假嵌合体。如果有足够数量的克隆，只要数两个细胞并从一个克隆中分析核型（反对排除单细胞异常）。如果克隆不足以达到这种分析方法，应在报告中说明。常规分析水平不能检测到所有真正的胚胎染色体嵌合或微小重排。实验室内部应草拟一个描写不同类型嵌合体的书面操作步骤指南。个体病例可以要求仔细鉴定、讨论和计数的细胞数目，分析要超过最低标准。羊水培养中，检测到嵌合体后必须对来自不同线培养的细胞或不同细胞群进行更广泛的检测。不能确定为异常细胞系则为正常分娩提供保证 ，但是依赖于相关染色体和异常的自然发生率。附加研究可能更合适(见Hsu等，1996, 1997)。为了更容易说明嵌合体和体外畸变，建议用不同细胞群落方法。CVS综合征中，嵌合的显著程度可能取决于异常细胞以及相关染色体直接或培养时在不同细胞类型中的分布(Eucromic 1997, ACC 合作研究，1994)。不能忽略某些病例胎儿单亲二倍体的可能性，可能还需要做其它检测来确定。 做UPD 研究时应考虑是否为嵌合体或下列几种情况：牵涉到7, 11, 14和15号染色体的胎盘染色体嵌合；牵涉到14，15号染色体的同源或非同源罗氏易位；来源于7, 11, 14和15号染色体的标记染色体 (Kotzot 2002; Robinson 等，