发布时间 : 星期六 文章高一生物下册第四章基因的表达练习题2016更新完毕开始阅读f4deb05b3868011ca300a6c30c2259010302f308
6.(1)DNA水平的调控：a.基因丢失，即DNA片段或部分染色体的丢失，如蛔虫胚胎发育过程有27%的DNA丢失。b.基因扩增，即特定基因在特定阶段的选择性扩增，如非洲爪蟾卵母细胞中的rDNA是体细胞的4000倍 。c.DNA序列的重排，如哺乳动物免疫球蛋白各编码区的连接。d.染色质结构的变化，通过异染色质关闭某些基因的表达。e.DNA的修饰，如DNA的甲基化关闭某些基因的活性。(2)转录水平的调控 。a.染色质的活化，如核小体结构的解开、非组蛋白的作用等。b.转录因子的作用，转录因子与RNA聚合酶及特定的DNA序列(启动子、增强子)相互作用实现对转录的调控。(3)转录后水平的调控 。a.mRNA前体的加工，如5prime;端加帽、3prime;端加尾、拼接、修饰、编辑等。B.mRNA的选择性拼接，如抗体基因的选择性拼接。(4)翻译水平的调控。a.控制mRNA的稳定性，如5prime;端的帽子结构、3prime;端polyA尾巴和mRNA与蛋白质的结合有利于mRNA的稳定。b.反义RNA的作用，反义RNA可以选择性抑制某些基因的表达。c.选择性翻译，如血红素缺乏时，通过级联反应使eIF2磷酸化。d.抑制翻译的起始。(5)翻译后水平的调控。a.多肽链的加工和折叠，如糖基化、乙酰化、磷酸化、二硫键形成、蛋白质的降解。b.氨基酸的重排，如合成伴刀豆蛋白A时，氨基酸序列大幅度地被剪接重排。c.通过肽链的断裂等的加工方式产生不同的活性多肽。
7.Ⅱ型限制性核酸内切酶(限制酶)是基因工程中常用的重要工具酶，是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的核酸内切酶，常用的限制酶主要有以下特点：(1)均来自于微生物，并以其来源的微生物学名进行命名;(2)相对分子质量小，仅需Mg2+作为辅助因子，无需ATP;(3)识别特异性DNA双链顺序，在序列内特异切割产生特异性DNA片段;(4)识别序列长度为连续的4/6/8bp;(5)识别序列呈二重旋转对称，称回文结构，富含GC;(6)有3种切口：5prime;端突出的黏性末端(如HindⅢ)，3prime;端突出的黏性末端(如Pst Ⅰ)和平末端(如H加工)。
8.(1)从染色体DNA中直接分离：主要针对原核生物。(2)化学合成法：由已知多肽的氨基酸序列，推得编码这些氨基酸的核苷酸序列，利用DNA合成仪人工合成其基因。(3)从基因组DNA文库中筛选分离组织/细胞染色体DNA：利用限制性核酸内切酶将染色体DNA切割成片段，与适当的克隆载体连接后转入受体菌扩增，即获得基因组DNA文库，用核酸探针将所需目的基因从基因文库中“钓”取出来。(4)从文库中筛选cDNA：提取mRNA，利用反转录酶合成与其互补的DNA(cDNA)分子，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库，然后采用适当方法从cDNA文库中筛选出目的cDNA。(5)用PCR从基因组DNA或cDNA中扩增目的基因。
9.同mRNA互补的DNA称为cDNA。cDNA文库是以某一细胞的总mRNA为模板，在无细胞系统中，在反转录酶的作用下，首先合成互补DNA的第一链，破坏RNA模板后，再以第一链为模板合成第二链，得到双链cDNA。选用适合的载体，与合成的cDNA重组，导入寄主细胞，经筛选得到的cDNA克隆群称为cDNA文库。由于cDNA技术合成的是不含内含子的功能基因，因此是克隆真核生物基因的一种通用方法。由于细胞内的基因在表达的时间上并非是统一的，具有发育的阶段性和时间性，有些则需要特殊的环境条件。所以，cDNA文库不可能构建得十分完全，也就是说任何一个cDNA文库都不可能包含某一生物的全部编码基因。cDNA文库与基因组文库的主要差别是：(1)基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列，cDNA文库克隆的是具有蛋白质产物的结构基因，包括调节基因。(2)基因组文库克隆的是全部遗传信息，不受时空影响，cDNA文库克隆的是被转录DNA序列(因它受发育和调控因子的影响)。(3)基因组文库中的编码基因是含有内含子和外显子，而cDNA克隆的基因不含内含子。
10.DNA重组载体应具备的条件：(1)能自主复制;(2)具有一种或多种限制性内切酶的单一切割位点，并在位点中插入外源基因后，不影响其复制功能;(3)具有1～2个筛选标记;(4)克隆载体必须是安全的，不应含有对受体细胞有害
的基因，并且不会任意转入其他生物细胞;(5)易于操作，转化效率高。常用的基因载体有以下几种：(1)质粒：是细菌染色体以外的小型环状双链DNA分子，本身有复制功能，且带有某些选择信息，但可插入的目的基因片段较小。(2)噬菌体DNA：是一种病毒DNA，能插入比较大的外源DNA片段，在DNA分子上有多种限制性核酸内切酶识别位点，便于多种外源DNA酶切片段的克隆。(4)柯斯质粒载体和酵母人工染色体：前者结合了质粒和 噬菌体载体的优点，也是一种环形双链DNA分子，具有质粒的性质，可以转化大肠杆菌，并自行复制和增殖，但它不会产生子代噬菌体，构建成的此种载体较小，因此能插入比较大的外源DNA片段，所以被广泛地用于构建基因组文库。后者既含有大肠杆菌来源的质粒复制起始位点，又含有酵母菌染色体DNA着丝点，端粒和复制起始位点的序列，以及合适的选择标记基因，可在转化的酵母菌细胞内，按染色体DNA复制的形式复制重组DNA，容纳外源DNA片段的能力比前3种载体大得多。
11.(1)黏性末端连接：用同一限制酶切割载体及目的基因后，产生完全相同的黏性末端，可以用DNA连接酶直接进行共价连接。或两种不同的限制性核酸内切酶切割产生的配伍末端(相同类型的黏性末端)之间也可以进行黏性末端连接。(2)平端连接：某些限制酶切割DNA后产生平头末端，由于平头末端5prime;端带有磷酸，3prime;带有游离羟基，