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分子诊断学试卷A
适用专业及层次（由出卷教研室填写）：
班级________________ 姓名________________ 学号___________________
（此试卷共3页，答案请填写在答题纸上，答案填写在试卷上者答题无效）
一、名词解释（每题3分，共24分。请将答案填写在答题纸上）
1. 分子诊断
2. 实时定量PCR 3. 重叠基因 4. 锌指结构 5.基因置换 6. 基因敲除 7.基因芯片 8.蛋白质组学
二、填空（每空0.5分，共15分。请将答案填写在答题纸上）
1.从高温嗜热细菌中发现高温DNA polymerase后，使得PCR技术得以广泛应用，在高温下
有活性的DNA polymerase有?????????????、??????????????、?????????????、??????????????。其中具有3’-5’外切活性的高温DNA polymerase有?????????????和??????????????。
2.黏粒(cosmid)是质粒－噬菌体杂合载体，它的复制子来自 、cos位点序列来自，最大的克
隆片段达到45kb。
3.感受态细胞(Competent cells)是一种处于_________________________状态的细胞。一般通
过__________来诱导大肠杆菌感受态的形成。 4.PCR反应过程分为三个步骤，即，和。
5. 细菌的移动基因存在着三种类型的转位因子包括 、 、。
6.Klenow酶在 情况下，呈现DNA聚合酶活性，在 情况下呈现外切酶活性。 7. 外源基因在原核细胞中表达，常用的启动子有 、、 、和 。
8. 在LacZ标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显色，为 性克隆，
未插入基因的克隆显 色，为性克隆。
9. 基因序列经碱基替代，缺失或插入后，可使遗传信息产生三种不同的后果，分别
为 、 、 。
10.由一个细胞或者组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，称为。
三、判断题（错的打“×”，对的打“√”，每题1分，共10分。请将答案填在答题纸对应的题号下）
1. Maxam-Gilbert化学降解法测序时，从测序胶上直接读出的序列是用于测序的模板的互补
序列。
2. 蛋白酶K可有效地降解内源蛋白，能快速水解细胞裂解物中的DNA酶和RNA
酶，以利于完整DNA和RNA的分离。
3. 电泳时EB加在琼脂糖凝胶中一般会降低DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率。 4. 提取DNA时，若用酚除蛋白质，需要用Tris-HCl对酚进行平衡,pH达7.8。
5. 基因组研究可以归纳成为构建4张相互关联的基因组图谱：遗传图、物理图、序列图和功
能图。
6. DNA连接酶是一种能催化二条DNA链之间形成磷酸二酯键的酶，因此该酶既可修复基
因序列中的缺口，也可修复裂口。
7. 质粒提取后，在琼脂糖电泳出现一条带时说明质粒提取纯度高，当为三条带时为纯度不
高。
8. COS位点，COS质粒，COS细胞它们均含有用于自身环化的12个碱基的互补粘性末端。 9. 入噬菌体的插入型载体只有一个单一限制酶切点，替换型载体有2个成对的限制性酶切
点。
10. 原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的
转录。
四、选择题（每题1分，共15分。请将最佳答案填在答题纸对应的题号下）
1. 用于核酸分子杂交的探针不能是放射性标记的( )。 A．DNA B．RNA C．抗体D．寡核苷酸 2. cDNA文库包括该种生物的( )。
A．某些蛋白质的结构基因B．所有蛋白质的结构基因 C．所有结构基因D．内含子和调控区
3. 关于碱解法分离质粒DNA，下面哪一种说法不正确?( )
A．溶液I的作用是悬浮菌体B．溶液Ⅱ的作用是使DNA变性 C．溶液Ⅲ的作用是使DNA复性
D．质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性 4. 有关 DNA 序列自动化测定的不正确叙述是（）。
A．不再需要引物 B．激光扫描分析代替人工读序
C．基本原理与手工测序相同D． 用荧光代替了同位素标记 5. 在重组 DNA 技术中，不常用到的酶是（）。
A．限制性核酸内切酶B．DNA 聚合酶C．DNA 连接酶D．DNA 解链酶 6. 关于 cDNA 的最正确的说法是（）。
A．以 mRNA 为模板合成的双链 DNA B．同 mRNA 互补的单链 DNA C．同 mRNA 互补的双链 DNA D．以上都正确
7. 在分离DNA 过程造成DNA 分子断裂的因素很多，下列说法中哪一项是不正确的（ ）。
A．核酸酶的降解B．化学降解 C．保存液中未加一滴氯仿D．物理剪切 8. 下列哪一项不是 Southern blotting 的步骤（）。
A．用限制酶消化 DNA B． DNA 与载体的连接
C．凝胶电泳分离 DNA 片段D．DNA 片段转移到硝酸纤维膜上 9. 下列哪种克隆载体对外源 DNA 的装载量最大（）。 A．粘粒B．酵母人工染色体 C．质粒 D．λ噬菌体 10. 人工染色体载体必须具有的元件是（）。
A．染色体端粒B．着丝粒C．自主复制序列D．以上三项全部 11. λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（）。
A.小于λ噬菌体DNA的50% B. 小于噬菌体DNA的75%
C.大于λ噬菌体DNA的105% D.为λ噬菌体DNA的75%～105% 12.识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（）。
A.同工酶B.同尾酶C.同裂酶D.同位酶
13.下列生物体的细胞基因组哪些会有断裂基因？（）
A.大肠杆菌B.乙肝病毒C.人D.噬菌体 14. 真核细胞基因表达的特点为（）。
A.单顺反子B.多顺反子C.转录和转译连续进行D .转录和转译在同一时空进行
15. pBR322质粒作为基因克隆载体不具有下列何种调控元件（）。
A.Ampr和TetrB.ori复制子C.LacZ标记D.多克隆位点
五、问答题（共36分，请将答案填写在答题纸对应的题号下）
1. 真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？为什么？（5分） 2. 质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？（6分） 3. 真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？（8分） 4. 基因工程疫苗研究开发应遵循的原则是什么？（8分） 5. 有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其原理。（9分）
答案-试卷A
一、名词解释（每题3分，共24分。请将答案填写在答题纸上）
1. 分子诊断：是指通过检测基因的结构异常或其表达异常，对人体的健康状况和疾病做出诊断的方法。 2. 实时定量PCR(real-time PCR)：7.实时PCR：通过特定设计的 PCR 仪器来实时检测 PCR 扩增过
程每一轮循环产物的累积数量，推算模板的起始浓度，这种工作方式就称为实时 PCR
3. 重叠基因：不同基因的核苷酸序列有时为相邻两个基因共用，将核苷酸彼此重叠的两个基因称为重叠基
因 4. 锌指结构：由两个半胱氨酸（Cys）残基和两个组氨酸（His）残基通过位于中心的锌离子结合成一个
稳定的指状结构, 并以锌辅基敖合形成的环状结构作为活性单位, 在指状突出区表面暴露的碱基及其极性氨基酸与DNA结合有关
5. 基因置换：是指将致病基因整个地被有功能的正常基因所置换，使致病基因永久地得到更正。 6. 基因敲除：基因敲除是向正常生物个体内引入某个突变的基因位点而选择性地使某特定基因功能失活的
技术。
7. 基因芯片：将大量的基因片段有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片（又
称 DNA 芯片、生物芯片）。
8. 蛋白质组学：指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴学科，即研究细胞在不同生理或病理条件
下蛋白质表达的异同，对相关蛋白质进行分类和鉴定。更重要的是蛋白质组学的研究要分析蛋白质间相互作用和蛋白质的功能.
二、填空（每空0.5分，共15分。请将答案填写在答题纸上）
1. TaqDNA聚合酶 Tth DNA聚合酶 VentDNA聚合酶 Pwo DNA聚合酶 Pfu DNA聚合酶 Pwo
DNA聚合酶 PfuDNA聚合酶 2. 质粒 噬菌体
3. 容易接受外源DNA片段 CaCl-2法
4. 变性 退火 延伸
5. 插入序列 转位子 噬菌体Mu和D108 6. 有 dNTP 没有dNTP
7. 乳糖启动子Trp启动子 Tac启动子 噬菌体的PL和PR启动子 脂蛋白启动子 8. 白 阳性 蓝 阴
9. 同义突变 错义突变 无义突变 10. 蛋白质组
三、判断题（错的打“×”，对的打“√”，每题1分，共10分。请将答案填在答题纸对应的题号下）
题号 答案 1 × 2 √ 3 √ 4 √ 5 √ 6 × 7 × 8 × 9 √ 10 ×
四、选择题（每题1分，共15分。请将最佳答案填在答题纸对应的题号下）
题号 答案 1 C 2 A 3 D 4 A 5 D 6 A 7 C 8 B 9 B 10 D 11 D 12 B 13 C 14 A 15 C
五、问答题（共36分，请将答案填写在答题纸对应的题号下）
1. 真核细胞基因组中的基因常有内含子存在，能否在原核细胞中表达？为什么？（5分）
答：不能，因为原核细胞缺乏对真核基因中内含子的剪接功能和转录后加工系统。原核生物必须有相应的原核RNA聚合酶可识别原核细胞的启动子, 以催化RNA的合成。
基因表达是以操纵子为单位，操纵子由数个相关的结构基因和调控功能的部位组成的。因此在构建原核表
达载体时必须有1个强的原核启动子及其两侧的调控序列。
2. 质粒单酶切点的基因连接如何降低本底和防止自我环化和提高连接效率？（6分）
答：目的基因片断与载体由相同的单一限制性核酸内切酶（如EcoRI）消化酶切后, 两者的两端均具有相同的粘性末端, 称为单酶切点的粘性末端, 又称全同源性粘性末端
⑴ 高背景
载体经单一限制性核酸内切酶切割后, 载体分子易于自我环化, 既不利于目的基因的重组连接, 大大降低阳性克隆效率, 又可使非重组性载体造成高背景。为了防止载体的自我环化，通常用碱性磷酸酶去除载体粘性末端的5’-P以抑制DNA的自我环化。在连接反应中, 具有5’-P，的目的基因DNA片断可有效地与去磷酸化质粒DNA载体通过粘性末端发生互补连接, 尽管产生的重组DNA分子于连接点含有两个缺口的开环分子,尽管在转化时其转化效率高于线性低于闭和环, 但转化大肠杆菌后,在菌体内其缺口可获得修复。如第二章图2-6
⑵ 双向插入
经单一限制核酸内切酶（如EcoRI）切割的目的基因和载体, 因二者的粘性末端是相同的, 因此在连接反应中, 目的基因可发生双向插入, 载体对目的基因表达是有方向的, 而目的基因可双向与之相连, 这种连接若以克隆目的基因片段为目的没有影响, 若以表达为目的, 我们就要对插入的片段进行方向鉴定, 因目的基因由起始密码子向终止密码子方向表达是定向转录的, 一旦启动子与目的基因编码顺序方向相反就不能正确转录目的基因的mRNA。若构建表达DNA重组体选用双酶切切割目的基因和载体，可使目的基因与载体的连接发生定向连接重组, 以便定向克隆。
3. 真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？（8分）
答：顺式作用元件为一些能与DBP结合的特定序列的DNA片段, 决定转录起始位点和RNA聚合酶的转录效应,按功能可分为启动子、增强子、沉默子、衰减子和终止子等DNA序列片段。
⑴ 启动子
真核基因启动子是基因表达时与基因转录起始有关的5'端DNA序列,包括在-30bp区富含有AT的典型TATA盒（框）（TATA box）和在-70～-80bp区域（在TATA box上游）启动元件。前者是引导RNA聚合酶Ⅱ在正确起始位点转录mRNA所必需的DNA序列, 即保证转录的精确起始。后者UPE是调节转录起始频率和提高转录效率的调控序列，后者的序列常为