发布时间 : 星期四 文章细胞组织切片及观测方法（实验教材） - 图文更新完毕开始阅读fd497cd576eeaeaad1f330bf
图1-1涂片法 图1-2展片法 图1-3磨片法
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第三节 石蜡切片
石蜡切片过程：
取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→脱蜡→染色→脱水→透明→封藏 一、取材：
（一）生物组织取材的注意事项：
1.取材应遵循准确、典型、完整、适时的原则。
2.研究正常结构应选取健全而又有代表性的部分取材，采取病理材料时，除取病理部位外，还应选取正常部位，以利于对照观察。
3.取材前，要根据要求选择并配制好固定液，取材后，立即投入固定液中，以防组织自溶和腐败。
4.切取材料时，刀必须锐利，动作要快且仔细，切割时切勿拉锯式的来回切取，镊取也应轻拿轻放，避免材料的损坏。
5.取材要详细记录日期、采集地点、标本名称、取材部位、断面和所用固定液等。 （二）植物材料的取材：
1.固定前对材料要进行切割： 原因：
（1）为了固定更容易
为保证下一步固定材料能迅速的杀生和固定，务必使各细胞立刻停止生命活动，而不使原生质有崩解的现象。普通应用的固定液对于植物体外表面的角质、木栓质等的穿透很慢，但对于被切割的表面，则穿透速度快很多。所以，我们在固定材料的时候，应将所需要的部分分割到最小块、段或片、以达到立刻杀生与固定的目的。
（2）石蜡块也有一定限制，一般（5-6mm）。 2.切割面一般分为两类：
（1）横切面：使用刀横越根、茎的横断面的切面，横切片可观察材料自外向内的各种组织。
（2）纵切面：刀的切向与根、茎的长轴方向平行的切面，这种切面又分为两种： ①半径切面：以刀穿过中心点与其半径吻合的切面，这种切面可观察到茎中各种组织纵走的情形及髓的排列、厚度等。
②切线切面：以刀沿植物体的表面与其半径成直角所切的切面。
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3.不同材料的切割方法
（1）叶片：叶片宽小于1cm,可沿主脉横切3-5mm
叶片宽大于1cm,可分割成许多片，选其中含主脉和侧脉的固定，一般5-7mm2方块。 （2）圆柱形材料：直径小于2mm，有角质层的，切2mm厚。无角质层的，固定液穿透容易，切5-10mm厚。直径大于等于5mm，切5mm厚。直径大于10mm,切2-5mm厚。直径很大，取楔形
（3）木质小枝：直径小于5mm，切成15mm长
木条和大枝：直径较大的,切成2-3cm厚，再分割成楔形小块。 （三）动物取材：
活体直接取材、麻醉后取材、处死后取材。无论采取那种处死方法，多应避免由于痛苦引起挣扎，而造成组织结构发生变化，同时取样必须迅速，越快越好。因为动物一旦死亡，细胞便开始自溶。
二、固定（fixation）:细胞生命现象的突然终结，并保持生活状态的形态和结构。 （一）固定的目的和作用：
1.可以防止细胞自溶和腐败，在整个制片过程中保存细胞内的各种内含物。 2.增强细胞对各种浓度渗透压的抵抗能力。
3.可使细胞成份沉淀和凝固，因而产生不同的折射率，造成光学上的差异，使得原来看不清楚的一些结构清晰起来。
4.有些固定剂可使细胞各部分容易染色。 （二）作为固定液的条件：
1.对组织细胞渗透能力强，立即将细胞杀死。
2.细胞内含物不能发生变化。（不能是细胞内某些成份的溶剂。）（酒精是脂类物质的溶剂，所以单独使用时收到一定的限制。酒精不适宜作膜结构观察的固定剂）
3.尽可能避免组织或细胞膨胀或收缩。
4.有利于增加细胞内含物的折光程度，增加媒染作用或染色能力。 5.使材料适当变硬，并具有一定的坚硬性便于切片。 （三）按固定的方式将固定液分为两类：
凝结型固定液：使蛋白质凝固，形成悬浮颗粒网状混合液。 非凝结型固定液：不使蛋白质凝固，形成透明的凝胶。
苦味酸、升汞、铬酸、碘均能使胞质蛋白和核蛋白凝固；酒精能沉淀胞质蛋白，而核蛋白沉淀后溶于水；醋酸不能凝固胞质蛋白但能凝固核蛋白;福尔马林、锇酸、重铬
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酸钾对两种蛋白都不凝固。
1.凝结型固定液：
（1）酒精:(alcohol)70%-75%酒精渗透力最强。 特点：①穿透速度快。
②可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，前两者所生成的沉淀不溶于水，核蛋白所生成的沉淀溶于水；所以经乙醇固定的标本对核的染色不良，不适于对染色体的固定。
③浓度50%以上的酒精可溶解脂肪和类脂体。不能用于膜结构的研究，溶解血色素，破坏其他多种色素，所以不能用于脂肪、类脂类和色素的固定。一般用于组织学观察。
④使糖原沉淀，但能溶于水。
⑤是还原剂，在混合固定液中，酒精不能与氧化固定液混用。如铬酸、锇酸、重铬酸钾等。
⑥使材料硬化、组织收缩明显。
⑦固定材料适宜浓度为70%-100%。固定后不需冲洗，70%的酒精可较长时间保存， 若长期保存材料与甘油等量混合后使用。70%酒精：甘油=1：1 （2）醋酸（acetic acid） 特点：①穿透力速度极快。
②能固定核蛋白，对胞质也存在固定作用。对核蛋白是凝结型固定液，对胞质是非凝结型固定液。使染色质和染色体的固定和染色均很好，因此所有固定染色体的固定液中几乎都有醋酸。
③对脂类和糖类无固定作用。 ④酸性
⑤对材料不但不硬化还有软化作用。对细胞无收缩作用，稍有膨胀作用。可防止其他药剂如乙醇、甲醛、铬酸等引起组织收缩。
⑥固定后不需冲洗，可直接投入70%的酒精中保存。 ⑦固定材料适宜浓度为0.3%-5%。 （3）铬酸（chromic acid） 特点：①穿透速度缓慢。
②能沉淀所有蛋白质，凝固核酸，增强核的着色能力，可作为核蛋白核核酸的固定液。能固定高尔基体及线粒体。常用于细胞学观察。
③只有铬酸能真正固定肝糖原，使之不溶于水。对脂类无影响；
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