发布时间 : 星期一 文章细胞组织切片及观测方法(实验教材)更新完毕开始阅读fd497cd576eeaeaad1f330bf
④氧化剂，不能与酒精混用。固定后投入酒精前必须用流水冲洗，直至组织中不含铬酸为止，如冲洗不干净或直接投入酒精中，被还原成绿色的氧化铬并发生沉淀，使染色困难。
⑤使组织硬化，细胞收缩。
⑥铬酸常配成2%或10%的水溶液作为储备液，固定适宜浓度为0.5%-1%。 （4）苦味酸（picric acid）三硝基苯酚，不能结晶保存，要以饱和溶液存放。干燥时易爆炸。
特点：①穿透速度中等。
②可沉淀一切蛋白质。对脂类无影响，对糖类无固定作用。 ③细胞收缩明显，材料硬化程度很小。
④固定后不需冲洗，可直接投入70%酒精中洗去黄色。 ⑤固定材料适宜浓度为饱和溶液，即0.9%-1.2%。 2.非凝结型固定液：（质量较好） （1）锇酸（OsO4）
特点：①穿透速度很慢。材料要切的小一些，约1mm3。
②不沉淀蛋白质，能使蛋白质被均匀固定，所以用锇酸固定的蛋白质能保持生活时的均匀性。
③是脂肪和类脂类的很好的固定剂 。
④强氧化剂，易挥发，毒性大，对视网膜固定效果好，要保护好眼睛。价格贵。 ⑤不使细胞收缩，对细胞质固定好，固定物组织柔软。
⑥固定后流水冲洗12～24小时。使其完全洗净，否则遇乙醇就发生沉淀。 ⑦固定材料适宜浓度为0.5-2%。
锇酸的配制：用重蒸水配成母液2%，使用时，用PH7.0、0.2M磷酸缓冲液稀释一倍到1%。
（2）戊二醛： 特点：①穿透速度很快。
②固定微管蛋白，是微管的很好的固定液。
③用PH6.8-7.0、0.2M磷酸缓冲液配成25%母液，固定材料适宜浓度为3-6%。 （3）丙烯酸：
特点：①固定蛋白、核酸和聚多糖。
②固定材料适宜浓度为10%，用PH6.5的磷酸缓冲液配。
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（4）甲醛：（不用于电镜制片） 特点：①穿透速度快。
②可与蛋白质化合形成不溶性的化合物而固定，固定脂肪和类脂类化合物。 ③还原剂，不能与氧化剂混用。
④组织硬化程度显著，收缩小，但仅仅经酒精脱水后，收缩显著。
⑤固定后不需水洗，可直接投入70%的酒精。但经长期固定的材料，需经流水冲洗1-2天，否则影响染色。
⑥市售的为37-40%甲醛，称为福尔马林，固定和保存材料的适宜浓度是10%福尔马林。
（四）混合固定液：
1.卡诺(Carnoy)氏固定液： 配方：纯酒精：冰醋酸=3：1
此液适于固定一般动物组织和肝糖原以及植物组织。（多用于细胞学研究。）穿透速度快，为防止组织硬化，固定时间不要超过24小时。时间以材料的不同而有所区别，根尖15min,花药1小时。糖原在3-5℃下固定4消失，小白鼠睾丸30-50min。固定后可转入70%中保存，也可直接经95%酒精，纯酒精脱水。
2.福尔马林-醋酸-酒精混合液：（FAA）
配方：50%或70%酒精 90ml、冰醋酸 5ml、福尔马林 5ml
配方中福尔马林及冰醋酸的含量，经常根据材料而略加改变。一般容易引起收缩的材料应多加冰醋酸而减少福尔马林的含量；坚硬的材料可略减少冰醋酸而增加福尔马林。至于酒精的浓度应用的原则是：柔弱幼嫩的材料用低浓度，老年或坚硬材料用70%酒精。
如用作植物胚胎材料则其配方可改为：
50%酒精 89ml、冰醋酸 6ml、福尔马林 5ml
FAA是一种良好的固定液和保存液，差不多一般植物组织和器官都适用。（适用于组织学观察，不适于细胞学观察。）固定时间一般24小时，也可在此液中长期保存。也可通过50%酒精、70%酒精开始脱水。木质小枝枝枝必须固定1周。固定后木质材料应在流水中冲48小时，并在50%酒精和甘油溶液（1：1）中浸2-3天，使其软化。
3.铬酸-醋酸中液：
配方∶10%铬酸水溶液 7ml 、10%醋酸水溶液 10ml、蒸馏水加至100ml。 此液用于固定根尖、小的子房及分离出来的胚珠等植物组织。固定时间一般12-24小时，不能长期保存材料。固定后流水冲洗12-24小时。
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4.纳瓦兴氏液：（适用于组织学和细胞学研究） 甲乙液分开配，临用时再混合。配法为：
表1-4纳瓦兴氏液的配方
常备液 1%铬酸 10%铬酸 10%醋酸 冰醋酸 蒸馏水 福尔马林 蒸馏水 纳瓦兴氏液 15 10 75 40 60 Ⅰ 40 15 45 10 90 Ⅱ 40 20 40 10 90 Ⅲ 60 40 20 80 Ⅳ 8 60 32 20 80 Ⅴ 10 70 20 30 70 桑弗利斯 13 8 79 64 36 甲液 乙液
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纳瓦兴氏液，固定时间为24-48小时，如固定液呈暗绿色时，表示固定能力已经消失，其中铬酸被还原的缘故，仅有保存作用，固定后用70%酒精冲洗，再脱水。 纳瓦兴氏液ⅠⅡⅢⅣⅤ，固定时间为12-48小时，ⅠⅡ固定后用水冲洗，ⅢⅣ可用35%酒精冲洗，Ⅴ可用70%酒精冲洗。
桑弗利斯液，固定时间为4-6小时，流水冲洗6-12小时。 （五）固定时应注意的问题：
1.固定的材料越新鲜越好，立即固定。 2.材料与固定液比例一般为1：20。
3.根据材料的性质和制片的目的选择固定液。 4.有时要用蔗糖、氯化钠来调节渗透压。
5.材料外表有毛或其他不易穿透的物质存在，可先在含酒精的固定液中固定几分钟，再换用含水的固定液。
6.含有气体的材料投入固定液后，不下沉，须将气体抽出。方法可采用真空泵，或用注射器的简易方法（将材料和固定液倒入10ml注射器中，插入活塞，用手封住出口，用手来回抽拉几次即可）。
7.材料固定后一定要做标记。 三、冲洗：
（一）目的：所谓洗涤，即用洗涤剂渗透到材料中，把固定剂洗掉，洗涤必须彻底，才能进行下一步操作。否则留在组织中的固定液有的防碍染色，有的会发生沉淀物或结晶而影响观察，有的可以继续发生作用，破坏材料或影响以后的处理。 （二）洗涤的原则与方法：
常用的洗涤剂是水和低浓度的乙醇。
1.固定液用水配的，就用水或流水来冲洗；不需流水冲洗的材料，放在小瓶内，换数次水，每次1-2小时。
2.用各种浓度的酒精配的，就要用与固定液相近浓度的酒精冲洗；材料：酒精=1：10。
3.用福尔马林固定的不用水洗，但长期固定的，应充分水洗，否则影响染色。 4.用铬酸、重铬酸钾等固定的材料就用流水冲洗。将材料放在广口瓶内，瓶口用纱布扎起，橡皮管一端接在水龙头上，一端插入瓶底，调节水的流量，是瓶内的水不断更新。水流不要太猛，以免损坏材料。冲洗时间应和固定时间相同或再长。
5.冲洗时间要根据固定液及材料的性质、大小而定，一般1-6小时。
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