发布时间 : 星期三 文章细胞组织切片及观测方法(实验教材)更新完毕开始阅读fd497cd576eeaeaad1f330bf
是安装切片刀的部分，有调节刀片斜度和固着刀片的螺旋。一个是安装材料的部分，也有螺旋可以调节材料的位臵。另一个是操纵在旋转中向前推进的部分，控制着切片的厚薄，是比较重要而复杂的部分。
图1-4 旋转切片机
（一）修块、粘块、整修的步骤：
1.选取所要切片的材料，从包埋的石蜡块上用单面刀片切割下来，注意不可损伤包埋的组织。
2.确定切面的方位，用刀片将石蜡块的四面作初步的整修。保证材料四周都有石蜡包围。但不可太多。切面的上、下边平行。
3.点燃酒精灯，并准备一把旧的解剖刀。
4.左手大拇指与食指间持整修好的石蜡块，材料向上用其余三指夹住台木。此时将解剖刀在酒精灯上加温后，即放在台木与石蜡块之间，因解剖刀已加温，遇上两面的石蜡都会融化，可立即将解剖刀抽出，石蜡块迅速压在台木上。
5.再将解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，放在刚才固定的石蜡四周。此时，解剖刀再加温，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平。使石蜡块牢固地粘在台木上。
6.修石蜡块上下面平行，是切成的蜡带呈一直线，不弯曲。每个切片中组织的距离接近。
（二）切片的方法：
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1.准备下列用具：毛笔、黑色亮光纸
2.将已固着和整修好的石蜡块和台木装在切片机的夹物部分.
3.安装切片刀，将刀片夹在刀夹上，并调整好刀的角度。刀的斜度，非常重要，最好先切除的蜡块试刀，以确定刀的斜度，一经调度适合后，就不要随便变动，以免每次试刀的麻烦。
4.移动刀片固定器，使夹刀部与夹物部之间的距离调整好，以石蜡块的表面刚贴近刀口为度，在旋紧切片固定器的螺旋。
5.调整石蜡块与刀口之间的角度与位臵。修整蜡块，将刀片移近蜡块，使小蜡块的下边与刀锋平行，如不平行，可调夹物部上的螺旋。然后把它固定，再转下蜡块．呈矩形才行。只有平整的蜡块，才能切出平整的蜡带。
6.最后根据需要，调整控制切片厚度的机制。调度后，把它固定下来。上述四步骤完成后，就可进行切片，
7.开始切片。右手握旋转轮的手柄，摇动一转就可切下一片，切下的蜡片粘在刀口上，待第二片切下时粘在一起，所以连续摇动就可将切下的蜡片连成一条蜡带。这时左手就可持毛笔将蜡带提起，边摇边移动蜡带。转速为每分钟40-50为宜。
8.切成的蜡带到20-30厘米时，即以右手用另一只毛笔轻轻将蜡带挑起，平放在黑电光纸上。靠刀的一面较光滑，应向下，较皱的一面向上。
9.切下的蜡片是否良好，此时应先行检查。 10.切片工作结束后，仍将刀片用具擦拭干净。
八、贴片：贴附牢固，在染色时不易脱落；是皱褶的蜡片伸展平整。 （一）用具：载玻片、粘片剂、解剖刀、蒸馏水、展片机及铐片机。 （二）贴片的方法
1.将展片机温度调整到35℃，保持恒定。
2.在载玻片上涂蛋白甘油粘片剂。其法是用细玻璃棒蘸取一小滴粘片剂，加在载玻片的中央，然后用洗净的手指（无名指）加以涂抹，范围不要太广，也不要太多，以能贴足够的蜡片为度。蛋白甘油粘片剂的配方：（不适宜用作蛋白观察）
3.将涂粘片剂的载玻片放在展片机上，滴加蒸馏水数滴，此时若发现水不均匀分散而聚成滴状，即表示玻片不清洁，有残留油脂等物在上面。
4.用解剖刀将蜡带切成小段，每段的长度应以盖玻片的长度为准，一般应比盖玻片短约1/5-2/5。分片应从蜡带交界处分。
5.将蜡带轻轻移到涂有水的载玻片上，蜡片光面应向下贴在载玻片上，依次排列整
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齐。留出右端贴标签处。
6.材料展平后，从展片机上取下，稍稍倾斜留出多余的水分，用吸水纸吸干背面及周围多余水分，放于烤片机（35℃）上烤干水分。 九、染料与染色：
（一）染料：在组织切片染色中使用的最广的染色剂是有机染色剂。
1.染色剂的性质：具备两个性质，一要具有颜色，二要与被染组织间有亲和力。这两个性质都是由分子结构决定的，主要有两种特殊的基团所产生，即产生颜色的发色团和产生亲和力的助色团。
发色团：能使染色剂分子产生颜色的原子团称发色团，也就是能吸收一定波长的光线，并因之而呈现颜色的化学结构。
助色团：能使染色剂对组织产生亲和力的原子团。它的作用是使化合物具有盐类的性质，即它是不能染色的有色物质变为一种电解质，使它能和酸或碱生成盐类。
2.染色剂的分类
（1）根据染色剂的来源分：
天然染色剂：是从动植物体中提取出来的，为天然产物，产量少。目前常用的是洋红、地衣红、靛青、苏木精，其中最常用的是洋红、胭脂红，地衣红，番红花和苏木精。
人工合成染色剂：使用化学方法合成的芳香环或具有芳香环的杂环化合物。 （2）按主要用途分为
胞核染色剂：苏木素，胭脂红，甲苯胺蓝，美蓝，孔雀绿等。 胞浆染色剂：伊红，淡绿，橘黄G,酸性品红,苦味酸等。 脂质染色剂：苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑，硫酸尼罗蓝及油红等。
（3）根据染色剂的化学反应分：染色剂的干粉是稳定的盐类，它们在溶液中则电离成酸性或碱性染色剂。如酸性染色剂，能够产生氢离子（H+)或其它阳离子(Na+),而其本身成为带负电荷的阴离子者。这类染色剂一般用于染细胞浆，如伊红Y，苦味酸，橘黄G等。碱性染色剂，能产生氢氧根离子（OH -)或其它负离子(如Cl-),而本身成为带正电荷的阳离子者。这类染色剂常用于染细胞核,如碱性品红等。
①酸性染色剂：色原——助色团——Na→[色原-助色团]+Na+。酸性染色剂在水中电离后，其发色团带负电荷。一般溶于乙醇和水，常用高浓度的乙醇和丁香油作溶剂。一般用于细胞质染色。常用的如伊红，酸性品红，苦味酸，橘黄G，刚果红，水溶性苯胺蓝，淡绿等酸性染料常用以染细胞浆等碱性成份。
②碱性染色剂：色原——助色团——Cl→[色原-助色团]++Cl。碱性染色剂在水中
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电离后，其发色团带正电荷。一般能溶于水和乙醇，常用水和低浓度的乙醇作溶剂。一般用于胞核染色。着色能力差，染色时间长。常用的如苏木素,卡红,次甲基蓝,甲苯胺蓝,硫堇,美蓝等碱性染料常用以染细胞核等酸性成份。 木质化细胞壁：碱性染色剂 细胞壁：纤维素细胞壁：酸性染色剂 着色部位 细胞质：酸性染色剂 细胞核：碱性染色剂
严格地说，酸性染色剂的溶液并不一定呈酸性。同样，碱性染色剂的溶液也未必呈碱性。所谓酸性和碱性染色剂仅指它们电离后其分子的主要染色部分是阳离子还是阴离子。因此称为阳离子型染色剂或阴离子型染色剂更为适当。
常规H.E染色中苏木素染液的PH值约为7，此时胞核的化学成份电离产生H+，而其本身成为带电荷的阴离子，所以被阳离子型的碱性染料剂所着色。伊红染液为弱酸性。细胞的化学成份从溶液中获取H+而成为带正电荷的阳离子，因此与阴离子型的酸性染色剂（伊红）相结合，染作红色，这就是H.E染色分别显示核和胞浆的机制。
③中性染色剂：这是酸性染色剂和碱性染色剂的复合物，又可称为复合染料。是由碱性染料（色碱的盐）和酸性染料（色酸的盐）配制而成。其中染色剂的分子很大，所以往往水中溶解度较低，需用酒精做溶剂。血液学中的血液涂片经常使用的瑞氏染色剂及姬姆萨染色剂就是这种混合染色剂。其中的各种不同成分可分剔使核、胞浆和颗粒着色。
(3)按染色剂分子中的发色团可分为九类
①亚硝基类：发色团为亚硝基（-NO)如萘酚缘-B。 ②硝基染料：发色团是硝基（-NO2）如苦味酸。
③偶氮类：发色团为偶氮基（-N=N-）属于这一类的染色剂的橘黄G,刚果红,俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
④醌亚胺类：这类染料含有两个发色团，一个是印胺基（-N=），一个是醌型苯环，如硫堇，美蓝，甲苯胺蓝O,硫酸尼罗蓝,中性红,碱性藏红花O，焦油紫等。
⑤苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘，浅绿，碱性品红，酸性品红，结晶紫，甲基缘等。
⑥山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁，伊红Y等。 ⑦蒽醌染料：此类染色剂含有色原蒽醌，如茜素和胭脂虫酸。 ⑧噻唑类。
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