培养基思考题答案 联系客服

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答:发酵培养基是供菌种生长、繁殖和合成产物之用。它既要使种子接种后能迅速生长,达到一定的菌丝浓度,又要使长好的菌体能迅速合成需产物。因此,发酵培养基的组成除有菌体生长所必需的元素和化合物外,还要有产物所需代谢调节剂等。代谢调节剂中包括抑制剂、促进剂和前体。

前体是指某些化合物加入到发酵培养基中,能直接被微生物在生物合成中结合到产物分子中去,而其自身的结构并没有多大变化,但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高,如加苯乙酸可使苄青霉素产量增加;

抑制剂加入到发酵过程中时能抑制不需要的产物,而大量产生所需的特定产物(或中间体)。如在四环素发酵中,加入溴化物能抑制金霉素(即氯四环素)的形成,从而增加四环素的产量。

促进剂多为一些酶的诱导剂,如酶所需的基质或基质的类似物,β-半乳糖苷酶的诱导剂类似物异丙基-β-D-半乳糖苷。曲霉产生-淀粉酶时需要淀粉作诱导剂。

6. 如何根据微生物的代谢要求选择发酵培养基。

答:(1)一般的发酵产物以碳源为主要元素,发酵培养基中的碳源含量往往高于种子培养基;如果产物的含氮量高,应增加氮源。

(2)根据代谢产物加入适量的代谢调节剂和微量元素

(3)根据微生物的代谢特征,调整适当的碳氮比,调节最佳pH

(4)大规模生产时,原料应该价廉易得,还应有利于下游产物的分离提取工作

7. 培养基的设计原则和设计思路是什么。 答:(1)设计原则:

① 培养基的成分直接影响培养目标。在设计培养基时,必须考虑是要培养菌体,还是要

积累菌体代谢产物;是实验室培养,还是大规模发酵等问题

② 为微生物提供所必须的营养(能源物质、碳源、氮源、无机盐和微量元素、前体、促

进剂和抑制剂等)。

③ 为微生物的生长提供必要的生长环境条件。

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④ 培养基的组成和配比合适(对微生物的生长发育、产品的产量、提炼工艺的选择和成

品的质量都会产生相当大的影响)。

⑤ 满足生产的一些基本需要,如必须含有供细胞生长繁殖和合成细胞成分的原料;满足生产物的需要;能维持一定的pH条件;来源丰富、价格低廉、质量稳定,产物的分离提取等。

⑥ 避免培养基中各成分之间的相互作用,如蛋白胨、酵母膏中含有磷酸盐时,会与培养基中钙或镁离子在加热时发生沉淀作用;在高温下,还原糖也会与蛋白质或氨基酸相互作用而产生褐色物质。 (2)设计思路:

① 首先根据前人的经验和和和必须考虑的因素来确定可能的培养基成分

② 结合所用菌种和产品的特性,采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备,对碳源、氮源、无机盐和前体等进行逐个单因子试验。

③ 采用一些合理的实验设计方法如正交实验、响应面分析方法对培养基各成分之间配比(复配)进行优化,确定最适浓度。

④ 扩大培养时,可按照先按照一般的放大原则进行放大,再结合正交实验、响应面分析方法进行优化,确定最适浓度

8. 影响培养基质量的因素是什么?

答:(1) 水质:配制培养基应用蒸馏水或去离子水,制备培养基时,不可用铜锅或铁锅,可用中性硬质能耐高温的玻璃、搪瓷和铝制器皿制备;容器的洁净程度。

(2) 各组分质量稳定:确保稳定的原料来源,更换不同产地来源的组份时,必须进行实验试验,确保产量和质量的稳定性。

(3) 粘度:是否适当,否则影响灭菌、搅拌、微生物呼吸和产物的分离

(4) 装量过程的操作技术:培养基配制好后,应根据不同用途和形态,分装在不同容器内;分装量不能超过容器的2/3,以避免高压灭菌时培养基外溢,且有利于灭菌完全。分装后用棉塞塞紧瓶口,外用油纸包裹,以免灭菌时水蒸气直接渗入棉塞,造成灭菌后冷凝水多而影响培养基的硬度。

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(5) 灭菌过程:灭菌温度及压力,灭菌时间与次数皆会影响培养基的质量。高压时间不可过长,灭菌次数不要超过2次,否则会使培养基变质,使营养物质损失。琼脂培养基加热时间太长温度太则引起沉淀,如其pH值在4.8以下,则灭菌时间过长可破坏其粘度。明胶培养基如受热温度太高,可破坏其凝固性。

(6) 倒板的操作技术:倒板时培养基灭菌后放冷至45~50℃,及时倾入已加有样品稀释液的平皿内,摇匀。此时培养基温度不应太高或太低,过高过低皆会影响其质量。培养基必须保持澄清,以便观察细菌生长情况,必要时可用适当方法滤过后再分装灭菌。

(7) 保存:制备好的培养基不能存放过久,因能吸收空气中的二氧化碳等影响其质量,且要注意潮解变质,要密封保存。培养基最好现用现配制。

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